Un modelo del cerrado-pecho para inducir constricción aórtica transversal en ratones

El objetivo general de este procedimiento es realizar la constricción aórtica transversa, en un modelo murino de tórax cerrado, induciendo hipertrofia miocárdica ventricular izquierda. Esta técnica mínimamente invasiva, ayuda a reducir los problemas respiratorios, y minimizar la respuesta inflamatoria. Este método puede ayudarnos a responder preguntas clave, en el campo de la inmunología, por ejemplo, la respuesta de la macrofagia cardíaca en el desarrollo de hipertrofia ventricular izquierda.

La principal ventaja de esta técnica es que la caja torácica permanece intacta y, por lo tanto, se minimiza el traumatismo. Dado que los espacios y los volúmenes de marea se adaptan al peso corporal, este protocolo se puede utilizar en ratones de diferentes tamaños. También reduce el trauma quirúrgico y disminuye la desviación en los valores de medición.

Después de anestesiar un ratón, de acuerdo con el protocolo de texto, mueva el mouse a una mesa de operaciones con temperatura controlada y separe la nariz que está conectada a la caja de inducción de anestesia para mantener la narcosis. Con una sutura de nylon, fije los incisivos superiores del ratón. Pellizca la cola para asegurar la ausencia de un reflejo.

Usa cinta adhesiva para fijar las extremidades. Después de insertar una sonda rectal, aplique crema depilatoria en la garganta y la parte superior del pecho, de acuerdo con las instrucciones del fabricante, y déjela reposar durante un minuto. Luego, limpie la crema y repita si es necesario.

Con la configuración del ventilador ajustada a los parámetros fisiológicos, y el animal bajo un microscopio quirúrgico, incidir la piel en la línea media unos tres milímetros por debajo de la mandíbula hasta la segunda costilla. Identificar la línea media y los tejidos conectivos de la glándula submandibular. Luego, use dos pinzas en ángulo para dividir suave y sin rodeos la glándula en la línea media y explore el músculo traqueal.

Prepare suavemente la tráquea, separando sin rodeos los músculos paratraqueales. Use fórceps para tirar de la lengua para enderezar la garganta y facilitar la intubación, e inserte suavemente una cánula de intubación dentro de la tráquea. Confirme la intubación mediante la visualización directa del tubo dentro de la tráquea y verificando el movimiento adecuado del tórax.

Prepare ambas arterias carótidas, que se encuentran adjuntas a la tráquea, usando fórceps para separar suavemente el tejido conectivo. Aplique gel de ultrasonido en la punta de la sonda Doppler de 20 hercios y coloque la punta de la sonda en la arteria carótida derecha e izquierda, en un ángulo de menos de 45 grados. Gire lentamente la sonda para moverla lateral y medial para encontrar una señal Doppler, y luego incline la sonda para optimizar la señal.

Con un nuevo juego de guantes y tijeras estériles, expanda la incisión cutánea hasta el segundo espacio intercostal. Luego, con la punta de las pinzas, abra el segundo espacio intercostal e inserte los retractores. Con un aumento del 200%, identifique la línea media y los tejidos conectivos.

Luego, use pinzas en ángulo para dividir suavemente el timo. Retire el tejido graso hasta que se pueda ver claramente el arco aórtico. Con pinzas de pulgar en ángulo, prepare un túnel debajo de la aorta transversa, entre la arteria braquiocefálica y la arteria carótida común izquierda.

Luego, con pinzas finas, sostenga una sutura 6-0 y pase el hilo por debajo del arco aórtico. Con la segunda pinza, toma la rosca del otro lado del arco. Coloque con cuidado el espaciador paralelo a la aorta transversa.

Prepare un nudo doble suelto en el espaciador y asegure la colocación óptima del espaciador en paralelo a la aorta. Luego, ate el primer nudo y haga rápidamente un segundo nudo contrario, antes de quitar rápidamente el espaciador. El paso más crítico de todo el procedimiento es hacer ambos nudos rápida y apretadamente, y quitar el espaciador inmediatamente.

Cerrar el segundo espacio intercostal, con una sutura de polipropileno 6-0, y prestar especial atención a los vasos subclavios al ligar. Luego, usando una sutura de polipropileno 6-0, cose la piel en un patrón de sutura continua. Confirmar la ligadura, y realizar los cuidados postoperatorios, de acuerdo con el protocolo de texto.

Estas mediciones de la velocidad del flujo Doppler validan un TAC exitoso, lo que provoca un aumento de la velocidad sanguínea en la arteria carótida derecha, debido a la presión elevada en el ventrículo izquierdo y la aorta, mientras que provoca una atenuación de la velocidad del flujo sanguíneo postestenótica en la arteria carótida izquierda. Como se muestra en este gráfico, las proporciones de peso cardíaco y peso corporal aumentaron significativamente en los ratones TAC, en comparación con los ratones sin bandas, seis días después de la cirugía. Esta proporción se mantuvo casi constante después de 21 días.

La frecuencia cardíaca tiene un efecto significativo sobre la contractilidad del ventrículo izquierdo y el gasto cardíaco. Este gráfico revela que no hubo diferencias en las frecuencias cardíacas de los ratones con banda aórtica y no aórtica con banda, después de 21 días. Como se demostró aquí, un bandeo constante de la aorta se comprobó por un aumento de la presión arterial sistólica, medida a través de un catéter ventricular izquierdo después de 21 días.

Se sabe comúnmente que los ratones C57 black six desarrollan hipertrofia excéntrica con disfunción sistólica después de la TAC. Se encontró un aumento del diámetro del ventrículo izquierdo, que también parece significativo en las mediciones de volumen de presión. Como resultado, los volúmenes sistólico y diastólico final aumentaron significativamente.

Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en menos de 10 minutos, si se hace correctamente. Por último, este procedimiento proporciona un análisis optimizado de la respuesta inmune en la hipertrofia ventricular izquierda, ya que el trauma quirúrgico mínimo restringe la inducción inespecífica del sistema inmune. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar una constricción aórtica transversa mínimamente invasiva estandarizada.