Análisis en tiempo real de presión-volumen del infarto agudo de miocardio en ratones

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la investigación cardiovascular, como la identificación temprana de mecanismos de protección en la infección aguda de miocardio. La principal ventaja de esta técnica es que se puede realizar una caracterización hemodinámica avanzada en tiempo real en ratones sometidos a un infarto de miocardio seguido de reperfusión. La intubación endotraqueal y la cirugía de reperfusión por isquemia serán realizadas por Pia Stock, bióloga de nuestro laboratorio.

Después de anestesiar al animal, retire el vello del cuello y el pecho con una maquinilla eléctrica. A continuación, limpie la piel con tres exfoliantes alternos de Betadine y 70% de alcohol. Ahora, con unas tijeras quirúrgicas pequeñas, haga una incisión mediana longitudinal de 10 milímetros cinco milímetros por debajo del labio inferior y hacia el esternón.

A continuación, diseccione sin rodeos la parte izquierda y derecha de la glándula submandibular con pinzas. A continuación, separe el músculo y el tejido graso en la región paratraqueal derecha para acceder a la arteria corroída de la comuna derecha. Con pinzas curvas, diseccione cuidadosamente el vaso para movilizar y separar de cinco a 10 milímetros del mismo.

Evite siempre mover el nervio vago en el cuerpo corroído, ya que esto puede provocar hipotensión grave y bradicardia. Después de la movilización del vaso, pase las dos suturas de seda 5/0 preparadas por debajo del vaso. A continuación, ligar el vaso distal con un nudo apretado y colocar un nudo suelto en la sutura proximal donde irá el catéter.

A continuación, coloque una pinza vascular hemostática en el extremo proximal del vaso expuesto, proximal a la sutura. Esto se usará para bloquear el flujo sanguíneo de manera reversible. Ahora, con unas microtijeras, abra el vaso con la incisión en forma de cuña un milímetro proximal al nudo craneal.

Se debe ver una pequeña gota de sangre. Luego, estire la incisión e inserte el catéter 10 milímetros en el vaso. Ahora, comience a registrar los datos recopilados por la sonda del catéter.

A continuación, extraiga la pinza vascular y, a continuación, añada una o dos gotas de solución salina en la incisión para ayudar a deslizar el catéter otros 10 milímetros por el vaso. Luego, apriete el nudo para evitar el reflujo sanguíneo a lo largo del catéter sin bloquear el catéter en su lugar. Ahora, continúe avanzando suavemente el catéter hasta que el análisis de presión muestre un perfil de presión arterial cuando el catéter haya alcanzado la aorta.

En la válvula aórtica, también se debe sentir la resistencia a la luz y el movimiento sincronizado del tirón. Al tratar de hacer avanzar el catéter a través de la válvula aórtica, puede ser útil tirar de él hacia atrás cinco milímetros y volver a avanzar. El cateterismo ventricular izquierdo adecuado estará indicado por un cambio en la presión diastólica.

Cualquier cambio en el volumen también es un indicador del avance del sensor hacia el ventrículo izquierdo. Una vez que tenga la certeza de que el catéter está en el ventrículo izquierdo, sujete el nudo proximal con más fuerza para evitar que se mueva. Después del cateterismo, prepare la isquemia de 45 minutos.

En primer lugar, incidir la piel desde el esternón caudal hasta la axila izquierda. Luego proceda con la preparación roma de las dos capas musculares para exponer las costillas. A continuación, abra el tórax con una incisión entre la tercera y la cuarta costilla izquierda.

Utilice ganchos quirúrgicos para acceder al pericardio y luego reseque el pericardio que cubre el corazón. Antes de continuar con la ligadura del tronco principal de la arteria coronaria izquierda, espere 30 segundos sin tocar al animal para registrar los datos de presión y volumen para un análisis válido. Ahora, identifique el tronco de la arteria coronaria izquierda.

Emerge por debajo del oráculo izquierdo y desciende por el lado izquierdo del corazón hacia el ápice. A continuación, enrolla una sutura de polipropileno 6/0 alrededor de la arteria dos milímetros por debajo del oráculo izquierdo. A continuación, coloque un pequeño tubo de silicona debajo del lazo y asegúrelo con un nudo.

Si el miocardio distal comienza a volverse gris, entonces la arteria coronaria principal izquierda ha sido ocluida. Para continuar, corte la sutura a una longitud de un milímetro y luego suelte los ganchos quirúrgicos y cierre manualmente las capas musculares por encima de la incisión. A continuación, espere 45 minutos mientras registra continuamente los datos de presión y volumen.

Después de 45 minutos, vuelva a abrir la incisión y retire el tubo de silicona para inducir la reperfusión. A continuación, registre los datos durante otros 20 minutos. Cuando el corazón vuelve a estar rojo, la reperfusión es exitosa.

Después del período de reperfusión, afloje el nudo y extraiga el catéter mientras vuelve a sujetar rápidamente el nudo para evitar la pérdida de sangre si se necesita sangre para estudios adicionales. Después de completar los pasos de calibración, que se detallan en el protocolo de texto, realice un análisis de datos guiado por software. Para los datos basales, resalte al menos 10 ciclos tomados antes del paso del catéter a la válvula aórtica.

Según sea necesario, excluya cualquier ciclo con desviaciones debidas a la ventilación o la manipulación. A continuación, analice 10 bloques de ciclo en intervalos de cinco minutos a través de la isquemia y la reperfusión. Los diversos parámetros calculados por este análisis son suficientes para la caracterización de la función ventricular izquierda.

Al final del experimento, después de que el catéter se haya retraído del ventrículo izquierdo, realice un análisis final de los datos de presión. Siguiendo el protocolo, tras el cateterismo ventricular izquierdo, se realizó ligadura reversible del tronco coronario izquierdo durante 45 minutos seguida de 20 minutos de reperfusión. La correcta colocación del catéter de volumen y presión se confirmó mediante la obtención de la gráfica característica de presión-volumen del ventrículo izquierdo.

La oclusión exitosa del tronco de la arteria coronaria izquierda se confirmó visualmente mediante el blanqueamiento del miocardio ventricular izquierdo distal. Después de la oclusión del tronco principal de la arteria coronaria izquierda, se analizaron los datos de presión y volumen en intervalos de cinco minutos. Los datos de presión no mostraron cambios en la presión sistólica máxima del ventrículo izquierdo, lo que indica perfusión periférica preservada y anestesia estable.

El análisis del volumen ventricular izquierdo reveló que, durante la fase temprana de la isquemia, hubo una disminución significativa de la fracción de eyección y del volumen sistólico absoluto. El cambio máximo en la presión, un parámetro de la contractilidad del ventrículo izquierdo, mostró una reducción del 30% en los ratones sometidos a isquemia miocárdica. El cambio mínimo en la presión también disminuyó significativamente, lo que indica una distensibilidad deficiente del ventrículo izquierdo.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo caracterizar la función sistólica y diastólica del ventrículo izquierdo en ratones sometidos a un infarto agudo de miocardio utilizando la técnica de catéter de presión-volumen.