Generación de un modelo Murino ortotópico de cáncer de mama metastásico y la realización de mastectomía Radical murino

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del cáncer de mama sobre cómo imitar la progresión y el tratamiento del cáncer de mama humano en un modelo de ratón. La principal ventaja de este modelo de cáncer de mama de ratón es que tiene una alta tasa de tumorigenesis después de la implantación ortotópica y una baja tasa de recurrencia local después de la mastectomía. Comience por confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo en un ratón hembra anestesiado y pegar las extremidades del animal a una tabla quirúrgica.

El uso de hisopos de algodón estéril esterilizan el área quirúrgica con clorhexidina, yodo y 75%etanol. Y haz una incisión cutánea de cinco milímetros en el centro de la pared anterior del pecho. A continuación, levante el lado derecho de la piel adyacente a la incisión y utilice tijeras de microdisección estériles para separar la piel de la pared torácica.

Invierta la piel para exponer la almohadilla de grasa mamaria número dos correcta y utilice una jeringa de insulina de un mililitro equipada con una aguja de calibre 28,5 para inyectar cuidadosamente 20 microlitros de suspensión de células cancerosas a través de la herida en la almohadilla de grasa. Sostenga la aguja dentro de la almohadilla de grasa durante cinco segundos para permitir que la mezcla de proteína de células de cáncer gelatinoso se solidifique antes de extraer la aguja, y cierre la incisión con suturas estériles 5-0 no absorbibles. A continuación, coloque el animal en una jaula limpia con monitoreo hasta la plena reclinencia.

Para realizar la mastectomía ocho días después de la inoculación del cáncer, prepare el ratón para la cirugía como acaba de demostrar, y haga una incisión cutánea de cinco milímetros dos milímetros a la izquierda de la cicatriz quirúrgica de la inoculación de la célula cancerosa. Extiende la incisión hacia la raíz de la extremidad delantera para extirpar el tumor, y la piel, incluida la cicatriz quirúrgica, y la lesión en contacto con el tumor, y la cuenca de los ganglios linfáticos axilares en la que normalmente no hay ganglios linfáticos visibles en el momento de la mastectomía. A continuación, cierre los defectos de la piel con suturas estériles 5-0 no absorbibles en forma de Y.Y devolver el animal a su jaula con monitoreo hasta la plena titularidad.

Para la cuantificación de metástasis pulmonar 21 días después de la inoculación inyectar 150 miligramos por kilogramo de D-Luciferin IP 15 minutos antes de la eutanasia. Y usa tijeras curvas de Mayo para abrir la piel y el peritoneo en el abdomen medio. Presione hacia abajo el hígado hasta que se pueda visualizar el diafragma, y corte el diafragma y las costillas bilaterales de caudad a cefalada.

Voltee la pared del tórax anterior para exponer los pulmones y levante los pulmones para identificar el esófago torácico, que parece un cordón que conecta los pulmones con la columna vertebral. Corta el esófago con tijeras de microdisección y usa fórceps para tirar de los pulmones bilaterales y el corazón hacia el caudad. Luego corta la tráquea y los vasos principales en el ápice pulmonar en el cefalida y coloca los pulmones en una placa Petri de 10 centímetros para imágenes bioluminiscentes.

Usa las tijeras para extraer el corazón del tejido pulmonar. A partir de unos ocho días después de la inoculación de la célula de cáncer de almohadilla de grasa mamaria, la bioluminiscencia en los pulmones es más profunda y más pequeña que en la lesión primaria que refleja la carga tumoral primaria en ratones vivos. La medición del tamaño del tumor con pinzas permite la estimación del volumen tumoral in situ.

Este modelo de mastectomía también permite el monitoreo de la carga tumoral metastásica en serie sin tener que eutanasiar a los animales. La carga tumoral de las metástasis pulmonares también se puede cuantificar mediante imágenes ex vivo, pero la limitación es que los ratones deben ser eutanasiados. La supervivencia del ratón después del tratamiento quirúrgico también se puede controlar como un punto de vista clínico traducible.

Después de su desarrollo esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo del cáncer de mama exploraran no sólo el desarrollo de nuevos fármacos, sino también la investigación del cáncer de mama en general.