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JoVE Journal Bioengineering
Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

Reprimiendo la transcripción genética redirigiendo la maquinaria celular con modificadores químicos de epigenéticas

Full Text
7,007 Views
10:28 min
September 20, 2018

DOI: 10.3791/58222-v

Anna M. Chiarella1, Tiffany A. Wang2, Kyle V. Butler3, Jian Jin3, Nathaniel A. Hathaway4

1Chemical Biology and Medicinal Chemistry, Center for Integrative Chemical Biology and Drug Discovery, Curriculum in Genetics and Molecular Biology,University of North Carolina, 2College of Arts and Sciences, Chemical Biology and Medicinal Chemistry, Center for Integrative Chemical Biology and Drug Discovery,University of North Carolina, 3Chemical Biology and Drug Discovery, Pharmacological Sciences and Oncological Sciences,Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Chemical Biology and Medicinal Chemistry, Center for Integrative Chemical Biology and Drug Discovery, Curriculum in Genetics and Molecular Biology, Lineberger Comprehensive Cancer Center,University of North Carolina

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a method for controlling gene expression by recruiting chromatin-modifying machinery in a gene-specific and reversible manner. This technique addresses key questions in the epigenetics field, particularly regarding gene regulation mechanisms.

Key Study Components

Area of Science

  • Epigenetics
  • Gene Regulation
  • Chromatin Dynamics

Background

  • Regulation of the chromatin environment is crucial for gene expression.
  • The method allows for modulation of chromatin loci with endogenous enzymes.
  • Mouse ESL culture presents challenges for new users.
  • Safety monitoring is essential during the protocol.

Purpose of Study

  • To develop a method for gene expression control.
  • To explore the mechanisms of gene regulation.
  • To establish cause and effect relationships between chromatin regulatory elements.

Methods Used

  • Passaging 18 million 293T HEK cells per 50 cm plate.
  • Monitoring two separate lines of cell culture.
  • Utilizing physiologically relevant endogenous enzymes.
  • Implementing safety protocols during viral infection steps.

Main Results

  • The method enables gene-specific and reversible control of gene expression.
  • Demonstrates the feasibility of using endogenous enzymes for chromatin modulation.
  • Highlights the challenges faced by new users in mouse ESL culture.
  • Emphasizes the importance of safety during experimental procedures.

Conclusions

  • This technique represents a significant advancement in the field of epigenetics.
  • Further demonstration of the method is necessary for broader application.
  • Understanding the chromatin environment is vital for gene expression studies.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this method?
The main advantage is the ability to modulate chromatin loci with physiologically relevant endogenous enzymes.
What challenges do new users face?
New users often struggle with mouse ESL culture, which is inherently difficult without proper training.
Why is safety monitoring important?
Safety monitoring is essential during the viral infection steps to prevent contamination and ensure researcher safety.
How many cells are needed to start the protocol?
The protocol begins with 18 million 293T HEK cells per 50 cm plate.
What is the purpose of this study?
The purpose is to control gene expression and explore the mechanisms of gene regulation.
What are the key areas of science involved?
The key areas include epigenetics, gene regulation, and chromatin dynamics.

Reglamento de medio ambiente de la cromatina es un proceso esencial para expresión génica adecuada. Aquí, describimos un método para controlar la expresión génica a través de la contratación de modificadores de la cromatina maquinaria de manera gene-específica y reversible.

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la epigenética, como los mecanismos de regulación genética y las relaciones de causa y efecto entre los diferentes elementos reguladores de la cromatina. La principal ventaja de esta técnica es que por primera vez es posible módulor un loci de cromatina con enzimas endógenas fisiológicamente relevantes. Generalmente los individuos nuevos en este método lucharán porque la cultura de LA ESL del ratón es inherentemente difícil para aquellos que no han sido entrenados en la técnica.

La demostración adicional de este método es fundamental, ya que los pasos de infección viral celular son difíciles de aprender. El investigador debe cronolar dos líneas separadas de cultivo celular y es necesario vigilar vigilantemente la seguridad durante estos pasos. Para comenzar el protocolo, pasaje 18 millones de células HEK 293T por placa de 50 centímetros.

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Número 139 Biología química bioingeniería moléculas bifuncionales química inducida por proximidad regulación de la cromatina represión de genes histona deacetilasa epigenética químicos modificadores epigenéticos CEMs

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