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DOI: 10.3791/58371-v
Tatsuo Ito1, Keiki Ogino1, Kenjiro Nagaoka1, Kei Takemoto1, Rina Nishiyama1, Yurika Shimizu2
1Department of Public Health,Okayama University Graduate School of Medicine, Dentistry, and Pharmaceutical Sciences, 2Department of Pathophysiology-Periodontal Science,Okayama University Graduate School of Medicine, Dentistry and Pharmaceutical Sciences
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a highly sensitive method for detecting 3-nitrotyrosine modifications in atmospheric proteins using air sampler prefilters. The technique utilizes high-performance liquid chromatography with an electrochemical detector (HPLC-ECD) to analyze collected samples.
Se presenta un método para la detección de 3-nitrotirosina modificaciones químicas de las proteínas atmosféricas con 6 rondas de mm de diámetro de prefiltros de muestreador de aire utilizando un detector electroquímico de cromatografía de líquido de alto rendimiento (HPLC-ECD).
Este método puede ayudar a responder a la pregunta clave en la investigación ambiental sobre Nitrapyrin y 3-nitrotirosina. La principal ventaja de esta técnica es que es un método único y altamente sensible para detectar 3-nitrotirosina en filtros de muestra de aire. Para recoger partículas suspendidas totales o partículas de menos de siete micras de tamaño, primero pese un filtro de cuarzo aglutinante de 3 y fíjelo en un tomamuestras de aire de alto volumen. Cubra el filtro con un selector de tamaño de partícula para recoger PM7 o deje el filtro sin tapar para recoger el total de partículas suspendidas. Ejecute el tomamuestras de aire a 1000 litros por minuto de forma continua durante siete días. Cargue los prefiltros en una unidad de clasificación de tamaño e instale la unidad de clasificación de tamaño y un filtro de respaldo en el muestreador de aire de bajo volumen. Ejecute el muestreador de aire a 116 camadas por minuto de forma continua durante siete días para recoger PM2.5 en el filtro de respaldo. Cuando finalice el muestreo, registre el volumen de flujo total. Pesar el filtro y calcular el peso de las partículas recogidas. Sellar el filtro en una bolsa de plástico y almacenarlo a 30 grados Celsius.Next prepare 500 microlitros de cóctel de proteasa no específico 6X y tampón de acetato y colóquelo en una membrana dalasisna con un corte de peso molecular de 5000 daltons. Sumergir la membrana llena en 1 L del tampón de acetato y agitar a 4 grados Celsius durante 24 a 36 horas, reemplazando el tampón cada 12 horas para eliminar la indogénea 3-Nitrotirosina y Nitrito.Then mida la concentración de proteína en la solución de proteasa dialiada con un ensayo de proteína de ácido biconcininic. Después de eso, retire un filtro del congelador y deje que se caliente a temperatura ambiente mientras esté sellado en la bolsa. A continuación, perforar hasta cinco círculos de 6 milímetros de ancho desde el área cubierta de partículas del filtro, y colocar los círculos en un tubo de micro centrífuga de 1,5 mililitros. Preparar 300 microlitros de tampón de acetato que contengan 50
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