Elevado más laberinto prueba combinada con Video Tracking Software para investigar el efecto ansiolítico de suplementos exógenos de cetogénicas

Aquí, presentamos un protocolo para investigar cambios en el nivel de ansiedad de modelos de animales roedores. La elevada más laberinto prueba (EPM), utilizado junto con un vídeo de seguimiento de software, proporciona un método fiable para documentar el efecto de distintos potenciales tratamientos de ansiolíticos en escenarios de laboratorio preclínicos.

El laberinto superior elevado es un método para documentar el efecto de varios tratamientos potencialmente ansiolíticos en modelos de roedores de laboratorio de una manera más humana en comparación con otros métodos. La principal ventaja de este método es que se basa en la proclividad instintiva del roedor a los espacios oscuros y cerrados, además del miedo incondicional a las alturas y la evitación de espacios abiertos. Collin Park, un colaborador de mi laboratorio, ayudará a demostrar el procedimiento.

Varios días antes de la prueba, manejar a los animales escogiéndolos por su torso y sosteniéndolos durante un minuto para aclimatarlos al experimentador. A continuación, medir el peso corporal de los animales antes de iniciar cualquier tratamiento para determinar el cálculo de la dosis para el tratamiento. A continuación, familiarizar a los animales al método de gavage intragástrico utilizando agua por gavage durante cinco días antes de la suplementación con cetona.

Para el ensayo de ansiedad, utilice el laberinto elevado más o el aparato EPM, un aparato en forma de signo de más con cuatro brazos con dos abiertos y dos cerrados. Encienda el aparato EPM utilizando iluminación indirecta desde el techo en lugar de iluminarlo directamente. Asegúrese de que los cuatro brazos estén iluminados de forma similar.

Conecte la clave de instalación del software de seguimiento de movimiento en un puerto USB 2.0 e instale el software. A continuación, fije la cámara por encima del área experimental y asegúrese de que permanecerá inmóvil durante el experimento. Por último, configure un nuevo experimento en el sistema de software de seguimiento de movimiento mediante el manual de instrucciones.

Coloque el animal en el área experimental. A continuación, inicie el proceso de adquisición de datos pulsando el botón de inicio en el panel de control de tiempo. En la sala de pruebas, recopile los datos de EPM de dos maneras, manualmente y utilizando el software.

Los observadores ciegos están separados por una cortina. Espere hasta que el ene de la grabación del proceso de seguimiento o pulse el botón de parada en el panel de control de tiempo. A continuación, retire el animal del área experimental.

Por último, para acceder a la herramienta de análisis pulse el botón de análisis en la barra del asistente de experimentación. Seleccione ensayos e intervalos de tiempo para analizar y generar un informe. Comience por transferir las ratas en su jaula de origen a la sala experimental 30 minutos antes de comenzar el experimento.

Coloque una rata en la intersección de los cuatro brazos del EPM mirando hacia el brazo abierto opuesto al experimentador. Ejecute el software de seguimiento de vídeo, así como registrar manualmente el comportamiento del animal durante cinco minutos. Luego, si el animal se cae del EPM, recógelo y colóquelo de nuevo en el mismo punto del EPM donde se cayó.

Excluir los datos de comportamiento de este animal del análisis. Al final de la prueba de cinco minutos, detenga el software de seguimiento de vídeo. Retire el animal del EPM y colóquelo de nuevo en su jaula de casa.

Por último, limpie el EPM con un detergente desinfectante seguido de agua del grifo. Seque el aparato con toallas de papel. Después de la alimentación crónica, las ratas del grupo KSMCT pasaron mucho más tiempo en los brazos abiertos en comparación con el grupo de control.

El grupo KS pasó mucho más tiempo en el centro en comparación con el grupo de control. Y se pasa menos tiempo en armas cerradas en los grupos LKE, KS, KSMCT en comparación con el control. Las ratas de los grupos KS y KSMCT recorrieron distancias significativamente más largas en los brazos abiertos.

Mientras que las ratas en los grupos LKE, KS y KSMCT mostraron significativamente menos distancia recorrida en los brazos cerrados en comparación con el grupo de control. Además, después de siete días de gavage oral, el tiempo pasado en los brazos abiertos fue mayor en el grupo KE, pero disminuyó en el centro para los grupos KE, KS y KSMCT. El número de entradas a las armas cerradas también fue significativamente menor después de siete días de administración en los grupos KE y KS.

Es muy importante colocar todas las ratas en el equipo en una mansión consistente en la intersección frente al experimentador. El ensayo de EPM en roedores es un método adecuado y sensible para investigar el efecto de diferentes tratamientos que influyen en las áreas cerebrales involucradas en el efecto ansiolítico y los mecanismos de acción.