Name: Evaluación de efectos neuroprotectores de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extraer mediante un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria Cerebral Media (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprende a evaluar efectos neuroprotectores de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma mediante un modelo de oclusión de arteria cerebral media en ratón. Este método permite estudiar compuestos naturales contra el daño isquémico cerebral.

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No es aplicable.

Todos los procedimientos que involucran animales fueron aprobados por el Comité de ética de la Universidad Nacional de Pusan (número de aprobación, PNU-2016-1087). Una visión gráfica de este estudio se muestra en la figura 1.
1. preparación y administración de GRex
Nota: El GR utilizado en este estudio fue adquirido a una compañía farmacéutica comercial.
<ol><li>200 g de GR en 2.000 mL de metanol e incubar a temperatura ambiente (25 ° C) durante 5 días.</li>
	<li>La mezcla con papel de filtro con 0,26 mm de espesor y 5 μm tamaño de poro del filtro y retire el sobrenadante. Agregar 1000 mL de metanol al residuo GR y filtro nuevo.</li>
	<li>Combinar los dos sobrenadantes, filtrar con papel de filtro, concentrado bajo vacío y luego el residuo para producir GRex por congelación.</li>
	<li>Disolver el GRex en dimetil sulfóxido (DMSO), diluir con solución salina fisiológica 0,9% y filtrar con un filtro de jeringa de 0.45 μm. A continuación, ajuste la concentración final de DMSO a < 5%.</li>
	<li>Administrar GRex (300 mg/kg de peso corporal) 1 h después de la reperfusión de MCAO vía oral por sonda nasogástrica. Administrar el DMSO diluido en suero fisiológico (10 mL/kg de peso corporal) sólo a los grupos normales y grupos de control, respectivamente. Nota: La concentración de GRex utilizado en este experimento se determinó según la concentración que se activa a través de nuestro anterior estudio8.</li>
</ol>2. ratón modelo de MCAO
<ol><li>Ratones C57BL/6 machos de uso de 6 semanas de edad y 22-25 g. de peso todos los animales con libre acceso a chow estándar y agua y la casa en un ambiente con temperatura controlada (22 ± 1 ° C) y un ciclo de 12 h luz/oscuridad.<ol>
<li>Dividir los ratones en grupos de seis ratones cada uno, que deben consistir en simulada funciona normal, el control y grupos de tratamiento de GRex.</li>
		<li>Realizar cirugía MCAO (modificación del método de Koizumi et al. 9) sobre el control y los grupos de tratamiento GRex utilizando un microscopio estéreo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inducir la anestesia inhalatoria en los ratones con 2% de isoflurano en 70% N2O y 30% O2. Anestesia se considera suficiente cuando el ratón se convierte en insensible a la estimulación mecánica aplicada a su cola. Mantener la temperatura corporal de los ratones a 36,5 ± 0.5 ° C usando un cuerpo temperatura-tenencia manta conectada a un termómetro.</li>
	<li>Quitar todo el pelo en el pecho y cuello de los ratones por el afeitado seguido por el uso de crema depilatoria, desinfecta el sitio quirúrgico de la piel con betadine scrub alternando con alcohol por dos veces y luego realizar una incisión de aproximadamente 2 cm largo con quirúrgico hoja en el centro del cuello. Aislar cuidadosamente la arteria carótida común izquierda (LCCA), arteria carótida externa y la rama de la arteria carótida interna de los tejidos conectivos circundantes.</li>
	<li>Ligar la arteria carótida externa y la arteria carótida común con una sutura quirúrgica (sutura de seda 4-0, medio enganche nudo) para bloquear temporalmente el flujo sanguíneo en la arteria carótida interna durante la operación.</li>
	<li>Insertar una sutura de nylon de silicio (monofilamento de 8-0, 11 mm de largo) a través de la arteria carótida interna en el origen de la MCA izquierdo. Ajustar el espesor de la pieza de silicio del filamento a una gama de 0.10-0.12 mm.</li>
	<li>Medir la disminución del flujo sanguíneo cerebral relativo (rCBF) en el MCA usando un flujómetro Doppler láser. MCAO se confirmará cuando se mantiene el rCBF en < 20% de los valores de condición descanso durante todo el período isquémico.</li>
	<li>Fijar el filamento insertado a los vasos sanguíneos para 2 h mientras se ocluye la arteria cerebral y luego retirar cuidadosamente el filamento para restaurar el flujo de sangre de 22 h de la reperfusión. La sutura de la piel por costura en los 5 lugares (nudo de dos medios nudos, sutura de seda 3-0) y permita que cada ratón para despertar de la anestesia.</li>
	<li>En el grupo normal, realizar una operación simulada siguiendo el mismo procedimiento anteriormente (hasta 2.4), con las siguientes excepciones. Ligar la arteria carótida común y la sutura del músculo Incisa y piel.</li>
</ol>3. medición del volumen de tejido cerebral dañado
<ol><li>Después de la eutanasia de los ratones para la medición de daño cerebral con la inhalación de CO2 , impuesto el ratón cerebros 24 h después del inicio de MCAO usando tijeras quirúrgicas de iris y ángulo de pinzas.<ol>
<li>Después de quitar la cabeza con unas tijeras, hacer una incisión en la piel de la línea media de la cabeza a voltear la piel del cráneo.</li>
		<li>Romper los huesos parietales con pinzas angulares, pelar apagado dura materia al mismo tiempo y luego aislar el cerebro cuidadosamente desde el cráneo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Corte el tejido suprimido en secciones (1 mm de espesor) utilizando una matriz de cerebro de ratón y entonces la mancha las secciones de 17 min en una solución de 2% de cloruro de 2,3,5-Trifeniltetrazolio (TTC).</li>
	<li>Fijar las secciones en formalina al 10% durante al menos 2 h y luego fotografiar con una cámara digital. TTC se observará a teñir el tejido viable rojo mientras que las áreas necróticas será blanco.</li>
	<li>Analizar y cuantificar el área de infarto cerebral de cada sección con ImageJ.</li>
</ol>4. hematoxilina y eosina (H & E) y cresil violeta tinción de cortes histológicos
<ol><li>Eutanasia a los ratones para el estudio histológico por la inhalación de CO2 y perfusión les transcardially con 10 mL de solución salina tamponada con fosfato (PBS), seguido de 10 mL de paraformaldehído al 4% (PFA). Aislar el cerebro usando el mismo procedimiento de arriba (3.1) y sumergir el cerebro en 10 mL de sacarosa al 30% durante la noche.</li>
	<li>Incrustar el tejido cerebral en la temperatura de corte óptima (OCT) compuesto y corte coronal en secciones de 15 μm de espesor con un criostato. Monte las secciones sobre portaobjetos de vidrio, seguidos por la coloración con hematoxilina y eosina (H & E) o violeta de cresilo.</li>
	<li>Sumerja el portaobjetos en etanol al 80% durante 1 min seguido por la coloración de hematoxilina en solución durante 5 minutos.<ol>
<li>Sumerja los portaobjetos en alcohol ácido al 1% dos veces, sumergir en una solución saturada de carbonato de litio durante 30 s, lavar con agua del grifo por 30 s y entonces contratinción en solución de eosina para 30 s.</li>
		<li>Enjuague los portaobjetos en agua del grifo, remojo en 95% y etanol absoluto consecutivamente.</li>
		<li>Deje secar al aire los portaobjetos, claro en el xileno durante al menos 10 minutos y luego Monte el cubreobjetos con medio de montaje.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque el portaobjetos sobre un portaobjetos calentador durante al menos 1 h, seguido por inmersión en etanol al 50% diluido con cloroformo durante la noche.<ol>
<li>Los portaobjetos con violeta de cresilo 0.1% durante 10 min en un horno seco de 40 º C de la mancha.</li>
		<li>Sumerja en etanol al 95% por 30 min y luego deshidratar en etanol absoluto por 2 veces.</li>
		<li>Claro 2 veces en xileno durante 5 minutos, y luego montar con medio de montaje después de secado al aire.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilizando un microscopio, observar los cambios histológicos ocurridos después de lesión del cerebro inducida por MCAO.</li>
</ol>5. estadístico análisis
<ol><li>Expresan los resultados experimentales como medio ± desviación estándar y determinar la significación estadística entre los grupos usando un unidireccional análisis de varianza (ANOVA) seguido de análisis post hoc de Tukey usando un software de análisis de datos.</li>
	<li>Establecer la significación estadística a un p-valor < 0.05.</li>
</ol>

<ol><li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rising+stroke+incidence+in+young+adults%3A+more+epidemiological+evidence%2C+more+questions+to+be+answered%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li>
<li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Article+in+Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li>
<li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Neurorehabilitation%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li>
<li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+exploration+of+licorice+metabolome%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li>
<li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Separation+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li>
<li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Yakushigaku+Zasshi%22%5BJournal%5D)">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li>
<li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Food%22%5BJournal%5D)">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li>
<li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li>
<li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention%3A+role+of+multimodal+combination+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li>
<li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li>
<li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+and+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li>
<li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329(2016).</li>
<li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li>
<li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%3A+translational+potential+at+present+and+in+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li>
<li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+animal+models+of+stroke%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li>
<li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+%28licorice%29%3A+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li>
<li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacological+activities+of+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+Medica%22%5BJournal%5D)">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li>
<li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-inflammatory+activity+of+licorice%2C+a+widely+used+Chinese+herb%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Biology%22%5BJournal%5D)">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Con la creciente prevalencia de enfermedades metabólicas como la hipertensión crónica, diabetes e hiperlipidemia, que son factores de riesgo para el accidente cerebrovascular, el tratamiento y prevención de accidentes cerebrovasculares han convertido en una importante área de investigación médica12, 13. los déficits en el lenguaje y el movimiento después de un accidente cerebrovascular se correlacionan fuertemente con el grado de daño cerebral de tejido<sup class...

Daño cerebral causado por isquemia y reperfusión del flujo sanguíneo cerebral conduce a la muerte de las células nerviosas y la pérdida de tejido cerebral. Este tipo de daño cerebral continúa aumentando con la creciente prevalencia de enfermedades cerebrovasculares debido a la propagación de enfermedades metabólicas como obesidad, hipertensión y diabetes mellitus1,2. El número absoluto de pacientes mayores con ictus ha aumentado en todo el mundo, y el costo de la atención médica de estos pacientes, que a menudo se quedan con discapacidades a largo plazo, es una carga social importante. Por lo tanto, discapacidad secundaria debe mitigarse lo más posible para reducir la carga económica1,2.
El modelo más utilizado de roedor del infarto cerebral es el modelo de oclusión (MCAO) de arteria cerebral media (MCA), en el que el MCA se ocluye con un filamento de sutura quirúrgico silicio para bloquear el flujo sanguíneo, causando accidente cerebrovascular isquémico3, 4. usando un filamento como el material de la obstrucción permite el control del tiempo de oclusión y permanencia mediante la manipulación de la duración de la inserción del filamento intra-luminales.
Estudios anteriores han demostrado que incluso cuando se utiliza el mismo modelo MCAO roedor, el volumen total del infarto cerebral varía entre experimentos, causando baja reproducibilidad de los estudios. Para mejorar la reproducibilidad, hemos optimizado el grueso de la menta de filamentos utilizado en el experimento. Los resultados de un estudio preliminar del período isquémico cerebral y el infarto inducido demostrada que un período isquémico de más de 60 min permitió la región volumétrica del dañan tejido cerebral para ser observados y cuantificados.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), también conocido como regaliz, consiste en el secado raíces y rizomas de Glycyrrhiza uralensis y g. glabra. Se ha utilizado en la medicina tradicional China y coreana para los varios propósitos incluyendo como un aditivo alimenticio y medicinal5,6,7.
En un anterior estudio8, pre-tratamiento con el extracto de metanol GR (GRex) demostrado un efecto anti-apoptotic en ratones MCAO, incluyendo prevención significativa de la disminución en la expresión de la proteína de linfoma de células B 2 (Bcl-2) y Bcl extra grande (Bcl-xL). Este estudio se llevó a cabo para mejorar la reproducibilidad del modelo de ratón MCAO convencional evaluando su eficiencia en la determinación de si el tratamiento postinfarto con GRex efectivamente reduce el volumen de infarto en daño cerebral inducido por MCAO.

<table><tbody><tr><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td><td>Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Corea</td><td></td><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td></tr><tr><td>Papel de filtro cualitativo</td><td>Advantec</td><td>Papel de filtro No. 2</td><td>Papel de filtro cualitativo</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418-250ML</td><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td></tr><tr><td>Filtro de jeringa (0.45 y micro; m)</td> <td>Sigma</td><td>CLS431220</td><td>Filtro de jeringa (0.45 y micro; m)</td></tr> <tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Leica</td><td>M50</td><td>Microscopio</td></tr><tr><td>estereoscópico Microscopio estereoscópico</td><td>Nikon</td><td>SMZ745</td><td>Microscopio estereoscópico</td></tr><tr><td>Doppler láser Doppler</td> láser <td>Moor Instrumento</td><td>moorVMS-LDF</td><td></td></tr><tr><td>Soporte de mesa de anestesia con N2O & Sistema de caudalímetro de O2</td><td>Harvard Appratus</td><td>34-1352</td><td>Soporte de mesa de anestesia con N2O& Sistema de caudalímetro de O2</td></tr><tr><td>Sistema de monitoreo homeotérmico</td><td>Harvard Appratus</td><td>55-7020 Sistema de</td><td>monitoreo homeotérmico</td></tr> Cámara <tr><td>digital</td><td>Canon</td><td>Eos-M2</td><td>Cámara digital</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td> Microscopio <td>criostato</td></tr><tr><td></td><td>Carl Zeiss</td><td>Microscopio Zeiss Axio</td><td>Análisis</td></tr><tr><td>de datos</td><td>Systat Software Inc.</td><td>SigmaPlot versión 12</td><td>Análisis de datos</td></tr> Análisis de <tr><td>datos</td><td>NIH Image</td><td>ImageJ</td><td>Análisis de datos</td></tr><tr><td>Dieta de ratón</td><td>Doo Yeol Biotech</td><td>Comida estándar para roedores</td><td>Dieta de ratón</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>JOONGWAE</td><td>A02104781</td><td>Isoflurano</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>TROIKAA</td><td>ISOTROY 100</td><td>Isoflurano</td></tr><tr><td>Sutura de seda (4-0 Seda negra)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>SK47510</td><td>Sutura de seda (4-0 Seda negra)&nbsp;</td></tr><tr><td>Sutura de seda (3-0 Seda blanca)&nbsp;</td><td>Baekjae</td><td>57</td><td>Sutura de seda (3-0 Seda blanca)&nbsp;</td></tr><tr><td>Sutura de nylon (monofilamento 8-0)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>NB825</td><td>Sutura de nylon (monofilamento 8-0)&nbsp;</td></tr><tr><td>Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877-25G</td><td>Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC)</td></tr><tr><td>Formalina (solución de formaldehído)</td><td>JUNSEI</td><td>69360-1263 20KG</td><td>Formalina (solución de formaldehído)</td></tr><tr><td>Hematoxilina (Harris Hematoxylin)</td><td>YD Diagnostics</td><td>EasyStain</td><td>Hematoxilina (Harris Hematoxylin)</td></tr><tr><td>Eosina (1% Eosina Y Solution)</td><td>MUTO PURE CHEMICALS</td><td>3200-2</td><td>Eosina (1% Eosina Y Solución)</td></tr><tr><td>Violeta de cresilo (acetato)</td><td>Sigma</td><td>C5042-10G</td><td>Violeta de cresilo (acetato)</td></tr><tr><td>Paraformaldehído&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-1KG</td><td>Paraformaldehído&nbsp;</td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>JUNSEI</td><td>31365-0350 1KG</td><td>Sacarosa</td></tr><tr><td>Temperatura óptima de corte (OCT) compuesto</td><td>Scigen</td><td>4583</td><td>Temperatura óptima de corte (OCT) Cuchillo</td></tr><tr><td>de disección</td><td>Fine Science Tools</td><td>10055-12 Cuchillo de</td><td>disección</td></tr><tr><td>#4 Pinza</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11241-30</td><td>#4 Pinza</td></tr><tr><td>#5 Pinza</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11254-20</td><td>#5 Pinza</td></tr><tr><td>#6 Pinza</td><td>Herramientas de Ciencia Fina</td><td>11260-20</td><td>#6 Pinza</td></tr><tr><td>#7 Pinza Fina</td><td>Herramientas de Ciencia Fina</td><td>11274-20</td><td>#7</td></tr><tr><td>Tijeras Quirúrgicas</td> de Pinza Fina <td>Herramientas de Ciencias Finas</td><td>14001-12</td><td>Tijeras Quirúrgicas</td></tr><tr><td>Tijeras Bonn Extra</td><td>Finas Herramientas de Ciencias Finas</td><td>14084-08</td><td>Tijeras Bonn Extra Finas</td></tr><tr><td>Moria Pascheff-Wolff Spring tijeras herramientas de</td><td>ciencia fina</td><td>15371-92</td><td>Moria Pascheff-Wolff tijeras de resorte</td></tr><tr><td>pinza de dilatación de vasos</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>18153-11</td><td>pinza de dilatación de vasos</td></tr></tbody></table>

evaluación de efectos neuroprotectores de glycyrrhizae radix et rhizoma extraer mediante un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria cerebral media

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

Isquemia seguida de reperfusión del flujo sanguíneo cerebral después de un derrame cerebral conduce a la muerte de las células nerviosas y la pérdida de tejido cerebral. El modelo animal más utilizado para el estudio de tiempos es el modelo de oclusión (MCAO) de la arteria cerebral media. Estudios anteriores han reportado tamaños diferentes infarto incluso cuando la misma especie animal experimental se utilizó en condiciones similares de MCAO. Por lo tanto, hemos desarrollado un método experimental mejorado para hacer frente a esta discrepancia. Ratones fueron sometidos a MCAO usando un filamento como el material de la obstrucción para imitar las condiciones de movimiento humano y grueso filamento fue optimizado para crear más volumen de infarto reproducible. Extracción de ratones tratados con un metanol de Glycyrrhizae Radix et rizoma (GRex) tras inducción de movimiento mostró un volumen de infarto total significativamente disminuida y aumento en el número de supervivientes de las células en relación con el grupo control no tratado. Esto modificó el protocolo experimental con éxito y reproducible había demostrado el efecto beneficioso de GRex en accidente cerebrovascular isquémico.

En el grupo normal operado simulado, infarto cerebral no se observa mientras que en el grupo control, se observó una gama relativamente amplia de áreas dañadas. En los ratones administrado GRex 300 mg/kg en el grupo de modelos MCAO, una reducción estadísticamente significativa en el área dañada se observa (figura 2).
Los cambios histológicos son investigados por tinción de secciones del cerebro isqu...

En este estudio, modificamos un método experimental existente para obtener resultados reproducibles más, mediante el establecimiento de un modelo de ratón de arteria cerebral media oclusión (MCAO). La administración oral de Glycyrrhizae Radix et Extracto de metanol de rizoma (GR) (GRex), tras la inducción de la carrera, redujo significativamente el volumen de infarto total en relación con el grupo control no tratado.

Evaluación de efectos neuroprotectores de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extraer mediante un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria Cerebral Media

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los campos de investigación de neurociencia y medicina oral tradicional sobre la detección de compuestos naturales neuroprotectores relevantes para el modelo. La principal ventaja de esta técnica es que la mayor producibilidad del volumen de infección está de acuerdo con la dosis de sincronización isquémica. La demostración visual de este método es crítica, ya que es típico insertar un implemento muy delgado en la arteria cerebelosa media original, utilizando un microscopio estéril.Demostrar el procedimiento será Se-Eun Lee, un estudiante de primaria que estudia en mi laboratorio. Para preparar el extracto de Glycyrrhizae Radix et Rhizome, o GRex, primero agregue 200 gramos de Glycyrrhizae Radix et Rhizome, o GR, a dos litros de metanol para una incubación de cinco días a temperatura ambiente. Al final de la incubación, colar la solución a través de papel de filtro de 0,26 milímetros de espesor con un tamaño de poro de cinco micrómetros.Agregue el residuo GR a un litro de metanol fresco y filtre la solución de nuevo. Combine los dos filtrados y colarlos a través de un nuevo pedazo de papel de filtro. A continuación, concentrar

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La arteria cerebral media (MCA) ligadura es una técnica para estudiar la isquemia cerebral focal en modelos animales. En este método, la arteria cerebral media se expone mediante craneotomía y se liga con cauterización. Este método da volumen del infarto altamente reproducible y el aumento de post-operatorio las tasas de supervivencia en comparación con otros métodos disponibles.

La aplicación de la Permanente Ligadura arteria cerebral media en el ratón

Fuente: Zheng, Y., et al. Modelos experimentales para estudiar la neuroprotección del postcondicionamiento ácido contra la isquemia cerebral. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la aplicación del postacondicionamiento ácido (APC) para evaluar sus efectos neuroprotectores contra la lesión isquémica en un modelo de ratón de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO). Describe los pasos involucrados en la reperfusión en el modelo MCAO y la aplicación de APC durante la reperfusión para...

 Evaluación de los efectos neuroprotectores del postacondicionamiento ácido en un modelo de ratón de isquemia cerebral

Fuente: Lee, S. E., et al. Evaluación de los efectos neuroprotectores del extracto de Glycyrrhizae radix et rhizoma utilizando un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria cerebral media. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el procedimiento para evaluar el efecto neuroprotector de un compuesto de prueba en un modelo de ratón de oclusión de la arteria cerebral media. El compuesto ingresa al cerebro, previene la muerte neuronal y reduce el volumen del infarto, lo que confirma su...

Evaluación de los efectos neuroprotectores de un compuesto de prueba en un modelo de ratón de oclusión de la arteria cerebral media

Este protocolo describe el precondicionamiento hipóxico repetitivo, o exposiciones breves a la hipoxia sistémica que reducen los volúmenes de infarto y la interrupción de la barrera hematoencefálica después de una oclusión transitoria de la arteria cerebral media en ratones. También detalla la cuantificación dual del volumen del infarto y la alteración de la barrera hematoencefálica después de un accidente cerebrovascular para evaluar la eficacia de la protección neurovascular.

Cuantificación de Protección neurovascular Siguiendo repetitivo hipóxico Precondicionamiento y transitoria cerebral media oclusión de la arteria en ratones

Con el fin de entender la fisiopatología del accidente cerebrovascular, es importante utilizar modelos fiables. En este trabajo se va a describir uno de los modelos de accidente cerebrovascular de uso más frecuente en los ratones, llamado el medio modelo de oclusión de la arteria cerebral (MCAO) (también llamado el filamento de sutura intraluminal o modelo) con reperfusión.

Técnica quirúrgica para la oclusión de la arteria cerebral media y la reperfusión del movimiento inducidos en ratones

oclusión quirúrgica de una rama distal de la arteria cerebral media (MCAO) es un modelo frecuentemente usado en investigación del accidente cerebrovascular experimental. Este manuscrito describe la técnica básica de la MCAO permanente, combinado con la inserción de una ventana craneal lateral, que ofrece la oportunidad para microscopía intravital longitudinal en ratones.

Ventana lateral crónica craneal Preparación Activa En Vivo Observación Siguiendo distal de la arteria cerebral media oclusión en ratones

Describimos un modelo de ratón de accidente cerebrovascular inducido por la oclusión de la arteria cerebral media utilizando una sutura recubierta de silicona. El protocolo se puede aplicar para inducir una oclusión permanente o una isquemia temporal, seguida de reperfusión.

La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área

Aquí, describimos un modelo de ratón de isquemia retiniana por oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común bilateral utilizando suturas simples y una abrazadera. Este modelo puede ser útil para entender los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana causados por anomalías cardiovasculares.

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

Este protocolo demuestra un modelo único de brazada de ratón con un infarto de tamaño medio y una excelente tasa de supervivencia. Este modelo permite a los investigadores preclínicos de accidentes cerebrovasculares extender la duración de la isquemia, utilizar ratones de edad avanzada y evaluar los resultados funcionales a largo plazo.

Un modelo de oclusión transcraneal modificado de la arteria cerebral media para estudiar los resultados del accidente cerebrovascular en ratones ancianos

En este trabajo, presentamos un protocolo para establecer un modelo de oclusión distal de la arteria cerebral media (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6J y evaluamos el comportamiento neurológico y las características histopatológicas posteriores.

Inducción de ictus isquémico agudo en ratones mediante la técnica de oclusión de la arteria media distal

Aprende a evaluar efectos neuroprotectores de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma mediante un modelo de oclusión de arteria cerebral media en ratón. Este método permite estudiar compuestos naturales contra el daño isquémico cerebral.

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Evaluación de efectos neuroprotectores de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extraer mediante un modelo de ratón de oclusión transitoria de la arteria Cerebral Media

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