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Un ensayo de Micro-neutralización de Virus sincitial respiratorio (VSR) mejorado y alto rendimiento
Un ensayo de Micro-neutralización de Virus sincitial respiratorio (VSR) mejorado y alto rendimiento
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JoVE Journal Medicine
An Improved and High Throughput Respiratory Syncytial Virus (RSV) Micro-neutralization Assay

Un ensayo de Micro-neutralización de Virus sincitial respiratorio (VSR) mejorado y alto rendimiento

Full Text
11,617 Views
09:14 min
January 26, 2019

DOI: 10.3791/59025-v

Lien Anh Ha Do1,2, Reuben Tse1, Jordan Nathanielsz1, Jeremy Anderson1, Darren Suryawijaya Ong1, Keith Chappell3, Kim Mulholland1,2,4, Paul V. Licciardi1,2

1Murdoch Children's Research Institute, 2Department of Paediatrics,University of Melbourne, 3School of Chemistry and Molecular Bioscience,University of Queensland, 4London School of Hygiene and Tropical Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a high throughput, imaging-based micro-neutralization assay designed to measure the titer of neutralizing antibodies against respiratory syncytial virus (RSV). The assay has been validated across various sample types and demonstrates high reproducibility.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Virology
  • Laboratory Techniques

Background

  • Respiratory syncytial virus (RSV) is a significant cause of respiratory illness.
  • Neutralizing antibodies are critical for protection against RSV.
  • Current methods for measuring these antibodies lack high throughput capabilities.
  • There is a need for cost-effective and reproducible assays in laboratories worldwide.

Purpose of Study

  • To develop a reliable method for quantifying RSV neutralizing antibodies.
  • To provide a protocol that can be easily implemented in various research settings.
  • To assess the assay's adaptability for different RSV subgroups and sample types.

Methods Used

  • Imaging-based micro-neutralization assay.
  • Testing on RSV subgroup A with potential adaptation for subgroup B.
  • Use of A549 cells for the assay.
  • Inter-assay variation assessment with reference antiserum.

Main Results

  • The assay demonstrated inter-assay variations of less than 10% for reference antiserum.
  • It can be established in laboratories at a relatively low cost.
  • High throughput capabilities were confirmed across different sample types.
  • The method is reproducible and adaptable for various RSV strains.

Conclusions

  • This imaging-based micro-neutralization assay is a valuable tool for measuring RSV neutralizing antibodies.
  • It addresses the need for accurate and efficient antibody quantification methods.
  • The assay's low cost and reproducibility make it accessible for global research efforts.

Frequently Asked Questions

What is the significance of measuring RSV neutralizing antibodies?
Measuring RSV neutralizing antibodies is crucial for understanding immunity and protection against respiratory syncytial virus infections.
How reproducible is the assay?
The assay shows inter-assay variations of less than 10% for reference antiserum, indicating high reproducibility.
Can this assay be adapted for different RSV subgroups?
Yes, the assay has been tested on RSV subgroup A and can be adapted for subgroup B.
What cell line is used in the assay?
A549 cells are used for seeding in the assay.
Is the assay cost-effective?
Yes, the assay can be established at a relatively low cost, making it accessible for many laboratories.
What types of samples can be tested?
The assay has been validated for different sample types, enhancing its versatility.

Este estudio describe un alto rendimiento, basado en la proyección de imagen de neutralización micro ensayo para determinar el título de anticuerpos neutralizantes específicos para virus sincicial respiratorio (VSR). Este formato de ensayo ha sido probado en tipos diferentes de la muestra.

Es necesario un método preciso y de alto rendimiento para medir los anticuerpos neutralizantes del VHS, como un marcador importante de protección contra el virus respiratorio sincitial. Este método es altamente reproducible con variaciones entre ensayos para el antisuero de referencia que son inferiores al 10%Creemos que este ensayo se puede establecer fácilmente en muchos laboratorios de todo el mundo a un costo relativamente bajo. Aquí describimos un ensayo de microneutralización basado en imágenes que se ha probado en el subgrupo A del RSV, y también se puede adaptar para el subgrupo B del RSV y diferentes tipos de muestras.

Demostrando el procedimiento estará Reuben Tse, miembro del equipo de investigación de MCRI. Para sembrar placas en el primer día, primera resuspendición A549 células en medios DMEM, con 10%FCS y 1.000 unidades de mezcla de penicilina-estreptomicina a una concentración de 400.000 células por mililitro. Luego siembra placas estériles de fondo plano de 96 pozos con 40.000 células A459 a una densidad de 100 microlitros por pozo.

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Medicina número 143 virus sincitial respiratorio neutralizar anticuerpo anticuerpos reducción de placa enfermedades infecciosas la estandarización

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