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Avanzadas de la proyección de imagen de pulmón Homing de linfocitos humanos en un Experimental en...
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JoVE Journal Medicine
Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

Avanzadas de la proyección de imagen de pulmón Homing de linfocitos humanos en un Experimental en modelo Vivo de inflamación alérgica basada en microscopia de luz hoja

Full Text
8,223 Views
10:39 min
April 16, 2019

DOI: 10.3791/59043-v

Anja Schulz-Kuhnt1, Sebastian Zundler1, Anika Grüneboom2, Clemens Neufert1, Stefan Wirtz1, Markus F. Neurath1, Imke Atreya1

1Department of Medicine 1,University Hospital of Erlangen, 2Department of Medicine 3,University Hospital of Erlangen

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

El protocolo introdujo aquí permite la caracterización de la capacidad de pulmón homing de linfocitos humanos primarios en condiciones inflamatorias en vivo. La infiltración pulmonar de células inmunes humanas eventualmente transferidas en un modelo murino de inflamación alérgica puede ser reflejada y cuantificada mediante microscopía de fluorescencia de luz hoja de tejido pulmonar químicamente limpia.

Nuestra técnica permite la toma de imágenes precisas de células inmunitarias humanas acumuladas en pulmones en condiciones inflamatorias in vivo, proporcionando información interesantes sobre el proceso de localización pulmonar de células T. Este protocolo apoya la investigación traslacional en el rastreo pulmonar de las células T y, por lo tanto, puede ayudar en la identificación de nuevos objetivos para una terapia optimizada de enfermedades pulmonares inflamatorias o alérgicas. En particular, la capacidad de considerar la influencia de las propiedades de células inmunitarias específicas de la enfermedad, la organización del tejido pulmonar y el entorno inflamatorio en la localización pulmonar de las células T hace que este método sea altamente ventajoso.

En general, nuestra técnica es de alto valor para la investigación inmunológica en el campo de las enfermedades pulmonares inflamatorias crónicas, que a menudo son impulsadas por una abrumadora acumulación de tejido de células inmunitarias activadas. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco en un ratón C57 negro 6J de al menos 16 gramos, seis semanas de edad, anestesiado, utilice un micropipet para entregar lentamente 10 microlitros de solución de papaína recién preparada en una fosa nasal del ratón una vez al día durante tres días consecutivos. Al día siguiente de la última administración de papaína, capa 10 mililitros de Ficoll medio bajo sangre periférica humana de un voluntario sano pre-diluido en una proporción de uno a dos en PBS para la separación del gradiente de densidad por centrifugación.

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