Name: Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-01T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Aprende a establecer un modelo de oclusión de dos vasos en ratón para estudiar la isquemia-reperfusión cerebral. Este método permite investigar la fisiopatología del ictus y evaluar el volumen del infarto en cortical.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue apoyado por el Ministerio de ciencia y tecnología, Taiwán (más 106-2320-B-038-024 105-2221-E-038-007-MY3 más y más 104-2320-B-424-001) y Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01). Este manuscrito fue editado por Wallace de edición académica.

Los comités de uso de Sinica de la Academia y Universidad médica de Taipei y cuidado de los animales institucional aprobaron este protocolo para el uso de animales de experimentación.
1. modelo MCAO/reperfusión
<ol><li>Proporcionar los ratones con acceso libre al agua y chow hasta la cirugía.</li>
	<li>Autoclave el quirúrgico herramientas y desinfectar la mesa de cirugía y aparatos con etanol al 70%. Use una máscara quirúrgica y guantes estériles. Utilizar un esterilizador de grano seco a esterilizar los instrumentos quirúrgicos si múltiples cirugías de ratón se llevará a cabo en un experimento.</li>
	<li>Anestesiar un ratón de 8 a 12 semanas de edad (total: 25-30 g) mediante el uso de hidrato de cloral de 0,8%, a través de una inyección intraperitoneal. Asegúrese de que el ratón anestesiado no tiene un reflejo pedal (como prueban usando un sujetador firme del dedo del pie) después de la anestesia.</li>
	<li>Use ungüento veterinario para prevenir la sequedad de ojo del ratón mientras está bajo anestesia.</li>
	<li>Utilice un sistema de la presión arterial no invasiva para monitorizar la presión arterial del ratón.</li>
	<li>Utilice un sistema de monitorización fisiológico para controlar su temperatura rectal y la gasometría arterial. Mantener la temperatura corporal a 36.5 ± 0,5 ° C.</li>
	<li>Inyectar por vía subcutánea el ratón con un antibiótico profilácticos (cefazolina de 25 mg/kg)8.</li>
	<li>Coloque el ratón en la posición supina en la almohada.</li>
	<li>Utilice tijeras eléctricas que exponga la piel al afeitarse la piel del ratón en la región ventral del cuello, así como en la región entre el ojo derecho y el oído derecho.</li>
	<li>Usar crema de depilación para aclarar la piel del cuerpo del ratón y para desinfectar el sitio quirúrgico alternando scrbus con povidione-yodo y etanol al 70%.</li>
	<li>Utilice tijeras de iris para cortar una incisión de 1 cm de largo de la línea media en el cuello.</li>
	<li>Utilice pinzas de iris para disecar cuidadosamente el CCA de los nervios vago sin causar daño físico.</li>
	<li>Use suturas de seda 5-0 para aislar el CCA.</li>
	<li>Haga una incisión de 0,3 cm en cuero cabelludo en el punto medio entre el ojo derecho y el oído derecho.</li>
	<li>Utilice microscissors para cortar el músculo de los temporalis para exponer el hueso zigomático y escamosal.</li>
	<li>Con un estéreo microscopio de disección, utilice una microperforadora para crear un agujero de diámetro 2 directamente sobre el MCA distal derecha.</li>
	<li>Ligar el tronco de la MCA distal lado derecho usando una sutura de 10-0.</li>
	<li>Ocluir la CCA derecha usando un clip de aneurisma nontraumatic.</li>
	<li>Después de 10 o 40 min de isquemia, quitar los clips de aneurisma y sutura para restablecer el flujo sanguíneo a la MCA y CCA.</li>
	<li>Utilizar una pinza de sutura para sellar la incisión de la piel en la cabeza.</li>
	<li>Sello de las incisiones de piel cervical utilizando una sutura única seguida por el cierre de la piel del cuello con sutura o grapas9.</li>
	<li>Inyectar por vía subcutánea buprenorfina (0.1 mg/kg) para el alivio de dolor9.</li>
	<li>Mantener la temperatura corporal del ratón en 36,5 ± 0,5 ° C en el cojín de calentamiento hasta que ha recuperado de la anestesia. No devuelva el animal que ha sufrido la cirugía a la compañía de otros animales hasta que haya recuperado completamente. No descuide el animal hasta que recupere conciencia suficiente.</li>
	<li>Coloque el ratón en la jaula del autoclave puede libremente acceder a agua y chow después de que ha recuperado completamente.</li>
</ol>2. tinción con cloruro de 2,3,5-Trifeniltetrazolio
<ol><li>Anestesiar el ratón con hidrato de cloral de 0,8% a través de una inyección intraperitoneal.</li>
	<li>Use tijeras para decapitar el animal del funcionamiento.</li>
	<li>Exponer el cráneo mediante el uso de tijeras de iris para hacer una incisión en la piel de la cabeza.</li>
	<li>Utilice tijeras para cortar la parte anterior del hueso frontal del funcionamiento.</li>
	<li>Utilice tijeras de iris para cortar el cráneo a lo largo de la sutura sagital.</li>
	<li>Utilizar una gubia ósea para empujar a un lado el frontal y el hueso parietal y exponer el cerebro.</li>
	<li>Utilice pinzas de iris para disecar el cerebro.</li>
	<li>Utilizar una matriz de cerebro de ratón y hojas de afeitar para obtener rebanadas coronales 2 mm.</li>
	<li>Mancha las rebanadas de cerebro durante 10 min a 37 ° C con cloruro 2% 2,3,5-Trifeniltetrazolio (TTC) en 1 x solución salina con tampón fosfato.</li>
	<li>Enjuague el cerebro 2 x con formalina al 10%.</li>
	<li>Corregimos el cerebro en formol al 10% a temperatura ambiente durante 24 h.</li>
</ol>3. medición del tamaño del infarto
<ol><li>Organizar las secciones en un portaobjetos de plástico limpio y orientar a las secciones de rostral a caudal.</li>
	<li>Analizar la diapositiva utilizando un escáner. Coloque una regla métrica y asegúrese de que esté visible en la imagen escaneada. Voltee la diapositiva y escanear el reverso.</li>
	<li>Calcular el área de infarto de cada sección usando el software ImageJ.<ol>
<li>Abra el archivo de imagen y establecer la escala de la imagen.</li>
		<li>Utilice selección a mano alzada para seleccionar el área de infarto.</li>
		<li>Utilizar las regiones de manager de interés (ROI) para medir el área de interés.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Suma las áreas de infarto para cada sección y multiplique el resultado por el espesor de la sección para estimar el volumen total del infarto.</li>
</ol>4. estadístico análisis
<ol><li>Utilice GraphPad Prism 6 para determinar la significación estadística con el de Student t-test. Nota: Las barras de error en los gráficos de barras representan los errores estándar de la media (SEM).</li>
	<li>Uso G * 3.1 poder calcular el tamaño de muestra adecuado y realizar un análisis de la potencia10.</li>
</ol>

<ol><li>Woodruff, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology%2C+treatment%2C+and+animal+and+cellular+models+of+human+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurodegeneration%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke.</a> Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11(2011).</li>
<li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunology+of+acute+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Neurology%22%5BJournal%5D)">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice+-+Middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2423(2011).</li>
<li>Lee, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+15+blockade+protects+the+brain+from+cerebral+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li>
<li>Wellons, J. C. 3rd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+strain-related+susceptibility+in+two+murine+recovery+models+of+global+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia.</a> Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).</li>
<li>Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+hypoxic+stroke%3A+a+new+mouse+model+of+stroke+with+high+throughput%2C+low+variability+and+a+quantifiable+functional+deficit%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).</li>
<li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia%3A+Distal+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).</li>
<li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+Permanent+Distal+Middle+Cerebral+with+Common+Carotid+Artery+Occlusion+in+Aged+Rats+to+Study+Cortical+Ischemia+with+Sustained+Disability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability.</a> Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106(2016).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%3A+The+Journal+of+the+American+Society+for+Experimental+NeuroTherapeutics%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li>
<li>Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolongation+and+enhancement+of+postischemic+c-fos+expression+after+fasting%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting.</a> Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).</li>
<li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).</li>
<li>Tachibana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+Reperfusion+After+Brain+Ischemia+Has+Beneficial+Effects+Beyond+Rescuing+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons.</a> Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).</li>
<li>Gan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+neurons+recruit+natural+killer+cells+that+accelerate+brain+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-derived+interleukin-15+exacerbates+ischemic+brain+injury+via+propagation+of+cellular+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).</li>
<li>Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+architecture+underlying+variation+in+extent+and+remodeling+of+the+collateral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation.</a> Circulation Research. 107 (4), (2010).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El modelo de ratón MCAO/reperfusión es un modelo animal empleado comúnmente para mímico isquemia transitoria en los seres humanos. Este modelo animal puede aplicarse a las cepas de ratones transgénicos y knockout para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Varios pasos en el protocolo son especialmente críticos. (1) la microperforadora debe utilizarse con cuidado cuando se crea un agujero en el cráneo, con inadecuado acción fácilmente, lo que causa hemorragia de la MCA. (2) el MCA no debe ser dañado,...

El modelo de ratón de isquemia-reperfusión cerebral es uno de los enfoques experimentales más utilizados para la investigación de la fisiopatología del cerebro inducida por la isquemia lesión1. Porque isquemia-reperfusión cerebral activa el sistema inmune periférico, las células inmunes periféricas infiltran en el cerebro isquémico y causan daño neuronal2. Así, un modelo de ratón fiable y reproducible que imita la isquemia-reperfusión cerebral es necesaria para entender la patofisiología del accidente cerebrovascular.
C57BL/6J (B6) los ratones son la cepa más comúnmente utilizada en experimentos de movimiento ya que pueden fácilmente ser manipulados genéticamente. Dos modelos comunes de MCAO/reperfusión que imitan a la condición de isquemia-reperfusión cerebral están disponibles. El primero es el modelo de filamento intramural de MCAO proximal, donde se emplea un filamento silicio intravascularly ocluir el flujo sanguíneo en el MCA; Posteriormente se retira el filamento oclusión para restaurar el flujo de sangre3. Una duración corta oclusión resulta en una lesión de la región subcortical, considerando que una mayor duración de la obstrucción provoca infartos en las áreas corticales y subcorticales. El segundo modelo es el modelo de ligadura de MCAO distal, que consiste en la ligadura extravascular de la MCA y CCA para reducir el flujo de sangre a través de la MCA, después de que el flujo sanguíneo se restablece a través de la remoción de la sutura y el aneurysm clip4. En este modelo, un infarto es causado en las áreas corticales, y la tasa de mortalidad es baja. Debido a la ligadura del modelo MCAO/reperfusión requiere craniectomía para exponer el sitio de la MCA distal, el sitio puede confirmarse fácilmente, y examinando si el flujo de sangre en el MCA distal se interrumpe durante el procedimiento es sencillo.
B6 ratones muestran considerables variaciones en la anatomía de su círculo de Willis; Esto puede afectar el volumen de infarto tras isquemia-reperfusión cerebral5,6,7. Actualmente, este problema puede superarse a través de la ligadura de la MCA distales8. En este estudio, establecemos un método para ocluir el flujo de sangre MCA y permitiendo la reperfusión después de un período predeterminado de isquemia. Oclusión de dos vasos del modelo de isquemia-reperfusión cerebral induce isquemia transitoria del territorio MCA a través de la ligadura de la MCA distal derecho y CCA derecha, con flujo de sangre restaurado después de un periodo de isquemia. Este modelo MCAO/reperfusión induce un infarto de tamaño estable, una mayor parte del cerebro de la infiltración de células inmunes en el cerebro isquémico y un déficit conductual después de isquemia – reperfusión cerebral4.

<table><tbody><tr><td>Rongeur óseo</td><td>Diener</td><td></td><td>Friedman</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Sigma</td><td>B-044</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolina</td><td>Sigma</td><td>1097603</td><td></td></tr><tr><td>Hidrato de cloral</td><td>Sigma</td><td>C8383</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Nikon</td><td>SMZ-745</td><td></td></tr><tr><td>Maquinillas eléctricas</td><td>Petpro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% formalina</td><td>Sigma</td><td>F5304</td><td></td></tr><tr><td>Germinador esterilizador de perlas secas</td><td>Braintree Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinza de iris</td><td>Karl Klappenecker</td><td></td><td>10 cm</td></tr><tr><td>Tijeras de iris</td><td>Diener</td><td></td><td>9 cm</td></tr><tr><td>Tijeras de iris STR</td><td>Karl Klappenecker</td><td></td><td>11 cm</td></tr><tr><td>Microdrill</td><td>Stoelting</td><td>FOREEDOM K.1070</td><td></td></tr><tr><td>Microtijeras-Vannas</td><td>HEISS</td><td>H-4240</td><td>hoja 7mm, 8 cm</td></tr><tr><td>Matriz de cerebro de ratón</td><td>World Precision Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema de presión arterial no invasivo</td><td>Muromachi</td><td>MK-2000ST</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de operación STR</td><td>Karl Klappenecker</td><td></td><td>14 cm</td></tr><tr><td>Sistema de monitoreo fisiológico</td><td>Harvard</td> Apparatus <td></td><td></td></tr><tr><td>Razor cuchillas</td><td>Ever-Ready</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stoelting Calentadores de roedores</td><td>Stoelting</td><td>53810</td><td>Almohadilla térmica Pinza</td></tr><tr>de<td>sutura</td> Pinzas <td>Stoelting</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>IDEALTEK</td><td></td><td>No.3</td></tr><tr><td>Vetbond</td><td>3M</td><td>15672</td><td>Pegamento quirúrgico</td></tr><tr><td>10-0 sutura</td><td>UNIK</td><td>NT0410</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-Trifeniltetrazolio cloruro</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td></td></tr></tbody></table>

oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión cerebral

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

En este estudio, un modelo de ratón de oclusión de arteria cerebral media (MCA) se emplea para el estudio de isquemia-reperfusión cerebral. Un modelo reproducible y confiable es útil para investigar la fisiopatología de la isquemia-reperfusión cerebral y determinar posibles estrategias terapéuticas para pacientes con accidente cerebrovascular. Las variaciones en la anatomía del círculo de Willis de C57BL/6 ratones afecta su volumen de infarto después de la lesión inducida por la isquemia cerebral. Los estudios han indicado que oclusión distal de la MCA (MCAO) puede superar este problema y resultar en un tamaño de infarto estable. En este estudio, establecemos un modelo de ratón de oclusión de los vasos dos de isquemia-reperfusión cerebral a través de la interrupción del flujo sanguíneo a la derecha MCA. Distal, ligar el MCA derecha y arteria carótida común derecha (CCA) y restaurar el flujo sanguíneo después de un periodo de isquemia. Esta isquemia-reperfusión induce un infarto de tamaño estable y un déficit conductual. Las células inmunes periféricas infiltran en el cerebro isquémico dentro del período de infiltración de 24 h. Además, la pérdida neuronal en el área cortical es menor para una duración más larga de la reperfusión. Por lo tanto, este modelo de oclusión de los vasos dos es adecuado para investigar la respuesta inmune y la recuperación neuronal durante el período de reperfusión tras la isquemia cerebral.

Este procedimiento MCAO/reperfusión produce un infarto cortical en las cercanías de la MCA derecha y causó un déficit conductual. Diferentes grados de volumen inducida por la isquemia infarto (figura 1AB) y la pérdida neuronal (figura 1D) fueron creados en la corteza cerebral de la zona derecha de MCA a través de un aumento en la duración de la ligadura. Este MCAO/reperfusión disminuyó actividad ...

Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.

Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Este modelo de ratón de oclusión de dos vasos de isquemia-reperfusión cerebral puede investigar la fisiopatología del accidente cerebrovascular. Este modelo inducirá un volumen estable de infarto de la mayor parte de las células inmunitarias infiltrantes cerebrales en el cerebro isquémico y el déficit conductual después de la isquemia-reperfusión cerebral. En este modelo, se produce un infarto en las zonas corticales y la tasa de mortalidad es baja.Debido a que el modelo de reperfusión MCAO de ligadura requiere craneotomía para exponer el tamaño de la MCA distal, el tamaño se puede confirmar fácilmente, y el examen si el flujo sanguíneo en el MCAO distal se interrumpe durante el procedimiento es sencillo. Proporcione a los ratones acceso gratuito al agua y a los alimentos hasta la cirugía. Autoclave las herramientas quirúrgicas, y utilizar 70%etanol para desinfectar la mesa de cirugía y el equipo.Después de anestesiar un ratón de ocho a 12 semanas de edad, asegúrese de que no tiene un reflejo de pedal cuando se prueba con un pellizco firme del dedo del pie. Use ung ón veterinario para evitar la sequedad ocular mientras el ratón está bajo anestesia. Para controlar la presión arterial, primero retire el cabello, y luego utilice un sistema de presión arterial no invasivo y un sistema de monitoreo fisiológico para monitorear la temperatura rectal y los gases sanguíneos arteriales.Inyecte el ratón por vía subcutánea con un antibiótico profiláctico. A continuación, coloque el ratón en la posición supina en la almohadilla de calentamiento. Para exponer la piel, utilice pinzas eléctricas para afeitar el pelaje en la región del cuello ventral y en la región entre el ojo derecho y el oído derecho.Limpie el pelaje del cuerpo del animal con crema depilantes y desinfecte el sitio quirúrgico con 70% de etanol. Luego corta una incisión de línea media de un centímetro de largo en el cuello usando tijeras de iris. Con los fórceps del iris, disecciona cuidadosamente la arteria carótida común libre de los nervios vagos sin causar lesiones físicas, y usa suturas de seda 5-0 para aislar la arteria.A continuación, usa tijeras de iris para hacer una incisión de 0,3 centímetros en el cuero cabelludo en el punto medio entre el ojo derecho y el oído derecho. Usando micro tijeras, corte el músculo temporalis para exponer el hueso cigomático y escamoso. Coloque el ratón debajo de un microscopio de disección estéreo y utilice un micro taladro para crear un agujero de dos mililitros directamente sobre la arteria cerebral media distal del lado derecho.Usa una sutura 10-0 para ligar el tronco del MCA distal del lado derecho, y usa un clip de aneurisma no traumático para ocluir la CCA del lado derecho. Después de la duración deseada de la isquemia, retire la sutura y el clip de aneurisma para restaurar el flujo sanguíneo al MCA y CCA. Utilice un clip de sutura para sellar la incisión de la piel en la cabeza y sellar las incisiones de la piel cervical con pegamento quirúrgico.Inyecte buprenorfina por vía subcutánea para aliviar el dolor. Mantener la temperatura corporal del animal en 36,5 más o menos 0,5 grados Centígrados en la almohadilla de calentamiento, y no dejar desatendido ni devolverlo a la compañía de otros animales hasta que esté completamente recuperado de la anestesia. Por último, coloque el ratón en la jaula del autoclave para que pueda acceder libremente al agua y a los alimentos después de que se haya recuperado por completo.Usa tijeras de iris para hacer una incisión en la piel de la cabeza del ratón anestesiado y decapitado para exponer el cráneo. Luego usa tijeras de operación para cortar lo anterior del hueso frontal, y con tijeras de iris, corta el cráneo a lo largo de la sutura sagital. Con un rongeur óseo, empuja a un lado el hueso frontal y parietal, y expone el cerebro.Retire el cerebro y colóquelo en una matriz cerebral de ratón. Utilice cuchillas de afeitar para obtener rodajas coronales de dos mililitros y colóquelas en tubos de 50 mililitros llenos de cinco mililitros de 2%TTC. Cuando se utiliza la matriz cerebral del ratón para obtener rodajas coronales, el tamaño de corte debe ser el mismo en diferentes cerebros.El tamaño de corte afecta el tamaño de las rebanadas cerebrales, que también afectan el cálculo del tamaño del infarto. Mancha las rebanadas cerebrales con 2%TTC y 1X PBS durante 10 minutos a 37 grados Celsius, y luego enjuaga dos veces con 10%formalina. Fijar las rebanadas cerebrales en 10%formalina a temperatura ambiente durante 24 horas.Después de secar las rebanadas cerebrales en el papel tisú para absorber el exceso de formalina, acoplándolas en un portaobjetos de plástico limpio, orientandolas de rostral a caudal, y cúbralas con otro portaobjetos de plástico limpio. Escanee la diapositiva con un escáner. Dé la vuelta a la diapositiva y escanee el reverso.Utilice el software ImageJ para calcular el área de infarto de cada sección, primero abriendo el archivo de imagen y configurando la escala de la imagen. A continuación, utilice la selección a mano alzada para seleccionar el área de infarto y utilice el administrador de ROI de regiones de interés para medir el área de interés. Por último, sume las áreas de infarto para cada sección y multiplique el resultado por el grosor de la sección para estimar el volumen total de infarto y, a continuación, complete el análisis estadístico como se describe en el manuscrito.El aumento de la duración de la isquemia durante este procedimiento de reperfusión de MCAO produjo diferentes grados de volumen de infarto inducido por isquemia y pérdida neuronal en la corteza cerebral del área correcta de MCA. Además, la isquemia disminuyó la actividad locomotora del animal a las 48 horas después de la reperfusión MCAO. Después de la reperfusión de isquemia cerebral, una mayor parte de las células inmunitarias periféricas se infiltraron en el hemisferio ipsilateral del cerebro isquémico.Además, cuando se comparó este modelo de oclusión de dos buques con el modelo MCAO, sus volúmenes de infarto no eran significativamente diferentes. El micro taladro debe utilizarse cuidadosamente al crear un agujero en el cráneo. Con una acción inapropiada, fácil causar sangrado de la MCA.El MCA no debe dañarse, y el sangrado debe evitarse antes y después del procedimiento de ligadura. La oclusión MCA y el estado de la reperfusión pueden ser comprobados por el doppler láser. Este método puede confirmar la condición del flujo sanguíneo de MCA.

two-vessel-occlusion-mouse-model-of-cerebral-ischemia-reperfusion

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Inducción quirúrgica del daño cerebral isquémico en la rata es un modelo ampliamente utilizado para la investigación del accidente cerebrovascular. Aquí se demuestra la inducción de isquemia cerebral focal por oclusión de la arteria cerebral media. Visualización del infarto como resultado de la tinción histológica y la resonancia magnética también se indica.

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

Oclusión filamentosa de la arteria cerebral media es un modelo común para el estudio de ACV isquémico en los ratones.

Modelado de accidente cerebrovascular en ratones - Oclusión arteria cerebral media con el modelo de filamento

Con el fin de entender la fisiopatología del accidente cerebrovascular, es importante utilizar modelos fiables. En este trabajo se va a describir uno de los modelos de accidente cerebrovascular de uso más frecuente en los ratones, llamado el medio modelo de oclusión de la arteria cerebral (MCAO) (también llamado el filamento de sutura intraluminal o modelo) con reperfusión.

Técnica quirúrgica para la oclusión de la arteria cerebral media y la reperfusión del movimiento inducidos en ratones

Describimos un modelo de ratón de accidente cerebrovascular inducido por la oclusión de la arteria cerebral media utilizando una sutura recubierta de silicona. El protocolo se puede aplicar para inducir una oclusión permanente o una isquemia temporal, seguida de reperfusión.

La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área

Obstrucción de filamento intraluminal de la arteria cerebral media es el modelo más frecuentemente utilizado en vivo del movimiento experimental en roedores. Una alternativa quirúrgica para permitir la reparación de la arteria carótida común se realiza aquí, lo que permite la reperfusión de la arteria carótida común y una reperfusión completa para el territorio de la arteria cerebral media.

Oclusión de la arteria Cerebral Media permitiendo la reperfusión mediante la reparación de la arteria carótida común en ratones

Este protocolo demuestra un modelo único de brazada de ratón con un infarto de tamaño medio y una excelente tasa de supervivencia. Este modelo permite a los investigadores preclínicos de accidentes cerebrovasculares extender la duración de la isquemia, utilizar ratones de edad avanzada y evaluar los resultados funcionales a largo plazo.

Un modelo de oclusión transcraneal modificado de la arteria cerebral media para estudiar los resultados del accidente cerebrovascular en ratones ancianos

Este protocolo describe el modelo de isquemia cerebral focal transitoria en ratones a través de la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media. Además, se muestran ejemplos de evaluación de resultados mediante resonancia magnética y pruebas de comportamiento.

Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media de accidente cerebrovascular

En este trabajo, presentamos un protocolo para establecer un modelo de oclusión distal de la arteria cerebral media (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6J y evaluamos el comportamiento neurológico y las características histopatológicas posteriores.

Inducción de ictus isquémico agudo en ratones mediante la técnica de oclusión de la arteria media distal

El protocolo actual describe un modelo de rata de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media que preserva la estructura anatómica de los vasos cerebrales sin causar daño.

Un modelo en ratas de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media sin dañar la estructura anatómica de los vasos cerebrales

Este protocolo presenta una guía paso a paso para que los investigadores realicen el procedimiento de oclusión de la arteria cerebral media en ratones utilizando el método modificado de la arteria carótida externa de Longa. Las modificaciones presentadas en este artículo tienen como objetivo aumentar la precisión de la oclusión de la arteria cerebral media y asegurar una reperfusión completa.

Optimización del método de oclusión de la arteria cerebral media de Longa para la reperfusión completa

Este protocolo describe el proceso de preparación para la reperfusión de la oclusión de la arteria cerebral media a través de la arteria carótida común.

Un modelo modificado de preparación para la reperfusión de oclusión de la arteria cerebral media

Aprende a establecer un modelo de oclusión de dos vasos en ratón para estudiar la isquemia-reperfusión cerebral. Este método permite investigar la fisiopatología del ictus y evaluar el volumen del infarto en cortical.

Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral

Explorar más videos