Incorporación de un procedimiento de biopsia del hígado Survivable en ratones para evaluar la resolución de la esteatohepatitis no alcohólica (NASH)

En ajustes clínicos, una biopsia del hígado se utiliza para evaluar estadios de esteatohepatitis no alcohólica (esteatosis, inflamación, hepatocitos en globo y fibrosis). Aquí ilustramos una biopsia del hígado survivable en ratones que se puede utilizar para análisis histológicos para permitir la evaluación de los agentes terapéuticos de forma más alineada con los ensayos clínicos.

Este procedimiento de biopsia de hígado sobrevivible en ratones con esteatohepatitis no alcohólica, o NASH, permite tanto la exclusión de animales que no tienen NASH como la medición precisa de las respuestas a las intervenciones. Este procedimiento imita de cerca el diseño del ensayo clínico para los estudios de NASH que comparan la patología post-versus pre-tratamiento del hígado y permite una evaluación más precisa de la eficacia del fármaco. Exponer el lóbulo hepático puede ser un desafío al principio.

Practique exponer el tejido con el dedo o un aplicador con punta de algodón primero para encontrar el mejor ajuste para usted. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie, haga una incisión longitudinal de la piel de la piel de uno a dos centímetros inmediatamente caudal al proceso de xifoide y ligeramente al lado izquierdo del ratón anestesiado. Utilice fórceps y tijeras para diseccionar la piel hasta que la pared abdominal esté expuesta y el hígado se pueda visualizar debajo del tejido muscular.

Usando una cuchilla de bisturí estéril, haga una incisión de uno a dos centímetros en la pared abdominal para exponer el lóbulo lateral izquierdo del hígado, y coloque un hisopo de algodón estéril debajo del lóbulo lateral izquierdo para extraer suavemente la porción que se exponga a través de la incisión. Coloque una gasa estéril empapada en solución salina debajo del lóbulo expuesto, y use tijeras estériles para extirpar una pieza de tejido en forma de cuña de 30 a 50 miligramos del hígado extraído. Cortar un pedazo de gelatina absorbible esponja comprimida similar en tamaño a la pieza de cuña del hígado, y utilizar fórceps estériles para insertar la esponja en la porción cortada del hígado.

Sostenga la esponja en su lugar con los fórceps hasta que la gelatina se adhiera a la superficie del hígado y se logre la hemostasia antes de colocar la biopsia hepática en un recipiente adecuado para su análisis aguas abajo. Devolver suavemente el hígado a la cavidad abdominal, teniendo cuidado de no molestar a la esponja, y, comenzando y terminando con un nudo cuadrado completo, suturar la pared abdominal con 5-0 suturas absorbibles recubiertas. Luego, cierra la piel con clips de herida de siete milímetros, confirmando un cierre completo después de la colocación, y regresa el ratón a una jaula limpia en una superficie calentada con monitoreo hasta la recuperación completa.

En este experimento representativo, 118 ratones fueron biopsiados después de 29 semanas en una dieta personalizada alta en grasas, fructosa y colesterol para inducir NASH. El nivel de fibrosis y esteatosis se obtuvo para cada biopsia. Los ratones fueron excluidos del estudio basado en fibrosis baja o alta y pérdida de peso anormal o cicatrización de heridas, y los ratones restantes fueron tratados con vehículo o el péptido-1 receptor agonista de glucagón-1 liraglutida durante seis semanas.

En los grupos tratados con vehículos, un ratón exhibió un aumento en la fibrosis y cuatro ratones demostraron un aumento en la puntuación de actividad de NASH. El tratamiento con liraglutida se asoció con una mejora general de la fibrosis, con una mejora del 17% del grupo de tratamiento que mejora y el 83% se mantiene sin cambios. Del mismo modo, el tratamiento con liraglutida mejoró la puntuación global de NASH, con el 66% del grupo presentando una puntuación mejorada de actividad de NASH, y el 33% se mantuvo sin cambios.

Además, el tratamiento con liraglutida mejoró la inflamación, con un 75% del grupo con una puntuación de inflamación más baja después del tratamiento, mientras que los animales tratados con vehículo experimentaron un aumento de la inflamación. La esteatosis no se vio afectada por el tratamiento agonista, permaneciendo inalterada en ambos grupos antes y después de la intervención. Tenga cuidado de no dañar demasiado la pieza de hígado extirpado para asegurarse de que se puede analizar adecuadamente para sus necesidades.

Este procedimiento se puede utilizar para imitar los diseños de ensayos clínicos comparando los efectos previos y posteriores al tratamiento de nuevas terapias en los hígados NASH.