Name: Un modelo murino de enfermedad similar a la encefalitis vírica aguda inducida por el virus del dengue (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: Aprende a crear un modelo murino inmunocompetente ICR para estudiar la neuropatía inducida por el virus del dengue mediante infección con bajo título viral. Este protocolo permite monitorear enfermedades encefalíticas agudas in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este estudio fue apoyado por subvenciones del Ministerio de Ciencia y Tecnología (MOST107-2321-B-038-001) y la financiación intramuros 106TMU-CIT-01-2, Taipei, Taiwán.

Los protocolos experimentales de estudio en animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado de Animales y Usuarios del Centro Médico de Defensa Nacional (número IACUC: 16-261), de acuerdo con las directrices establecidas por el Ministerio de Ciencia y Tecnología de Taiwán.
1. Procedimiento de infección
<ol><li>Preparar las existencias no adaptadas de DENV2 (strain PL046)9 (obtenido originalmente de los Centros para el Control de Enfermedades en Taiwán, que van desde 2.5 x 107 a 1 x 109 PFU/mL).</li>
	<li>Diluir el stock de virus a 1 x 106 PFU con Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medio a un volumen total de 40 L.</li>
	<li>Llene una jeringa de 0,3 ml equipada con una aguja de 30 G con 10 ml (2,5 x 105 PFU) de virus diluido y llene otra jeringa de 0,3 ml equipada con una aguja de 30 G con 30 ml (7,5 x 105 PFU) de virus diluido.</li>
	<li>
Sostenga el ratón de la madreito ICR de 7 días de edad y realice los siguientes pasos.
	<ol>
<li>Para la inyección intracerebral, sostenga el ratón en una posición propensa presionando la aurícula entre el dedo índice y el pulgar, e inyecte por vía intracerebral 10 l de virus diluido en el área lambda, el punto en la intersección de la sutura sagital y lambdoid 16.</li>
		<li>Después de la inyección intracerebral, sostenga el ratón en posición supina utilizando el dedo índice y el pulgar e inyecte por vía intraperitoneal 30 l de virus diluido suavemente en el abdomen murino. NOTA: Para evitar el canibalismo, 75% de alcohol se utiliza para crear una pérdida temporal de la sensación olfativa de la madre. Además, se sugiere cubrir las camadas con las heces y la orina de su madre.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Poner los ratones lactantes de nuevo en sus jaulas y esperar 5 minutos para comprobar su seguridad postestimulación con la avidez de ratones, incluyendo caminar y chupar leche madre. NOTA: Muy a menudo, los ratones demuestran actividad normal después de la estimulación y no parece haber efectos nocivos después del desafío técnico. Durante este experimento, los animales fueron mantenidos por el Comité Institucional de Cuidado de Animales y Usuarios del Centro Médico de Defensa Nacional, Taiwán.</li>
	<li>Evaluar el progreso diario de los ratones en términos de peso corporal (mediante el uso de un equilibrio de microgramos), enfermedad similar a la encefalitis vírica aguda (por puntuación de la enfermedad como se describe en la sección 2), y tasa de supervivencia9,10,11 ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. Puntuación de enfermedades
<ol><li>Controlar el grado de enfermedades similares a la encefalitis viral aguda. Asigne una puntuación de 0 a ratones sanos; 1 a ratones con síntomas de enfermedad menores, incluyendo pérdida de peso, movilidad reducida y una orientación corporal jorobado; 2 a ratones que presentan convulsiones límbicas; 3 a ratones la exhibición de debilidad límbica, incluyendo moverse con dificultad y la debilidad de la extremidad anterior o posterior; 4 para la parálisis; 5 por la muerte. NOTA: Una vez que la puntuación alcanza 3, se considera que los síntomas de la enfermedad evolucionan rápidamente.</li>
	<li>Trazar la puntuación de la enfermedad, de acuerdo con el paso 2.1, para cada día como una figura basada en curvas utilizando la media de SD de las puntuaciones diarias de las pruebas en cada grupo.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Se ha detectado una infección por DENV en el SNC de pacientes con dengue grave3,17, lo que sugiere la posibilidad de que la manifestación de encefalitis vírica aguda se haya producido durante la patogénesis del dengue. Aquí, informamos de un modelo in vivo murino de infección por DENV para estudiar la participación de la disfunción del SNC en el dengue grave, particularmente con un enfoque en enfermedades similares a la encefalitis vírica aguda inducidapor por DE...

DENV, un virus transmitido por artrópodos de la familia Flaviviridae, contiene un genoma de ARN de sentido positivo que codifica tres proteínas estructurales virales (cápside, premembrana y envolvente) y siete proteínas no estructurales virales (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B , y NS5). Los cuatro serotipos del DENV (DENV1-4), que infectan a aproximadamente 390 millones de personas al año, causan una carga mundial a pesar de que los gobiernos han dirigido esfuerzos sustanciales hacia el control de vectores de mosquitos y enfermedades1. Actualmente, las vacunas protectoras y los antivirales terapéuticos están en desarrollo y requieren una mayor validación a largo plazo2. En la práctica clínica, aunque un paciente con dengue con infección por el SNC es poco frecuente, es necesario explorarlo más a fondo para comprender la diversidad del desarrollo de la enfermedad del dengue3. Se necesitan más investigaciones y validación; en particular, la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha incluido la participación del deterioro del SNC, como deterioro cognitivo, convulsiones, encefalopatía y encefalitis, en la clasificación del dengue grave3,4. La construcción de modelos animales de infección por DENV es indispensable para explorar la neuropatógenosis de la infección por DENV.
Para generar la infección por El SNC por DENV, varios estudios han ejecutado diferentes vías de infección por DENV, incluyendo (1) inoculación intracerebral de ratones C57BL/6 que recibieron 4 x 103 unidades formadoras de placas (PFU) de DENV35noadaptados, 6, (2) inoculación intraperitoneal de ratones BALB/c que recibieron 7 x 104 PFU de DENV47,(3) inoculación intracerebral de ratones suizos que recibieron 1 x 105 PFU de IN vivo neuroadaptado DENV18y (4) co-inoculación intracerebral e intraperitoneal de ratones chupadores ICR que recibieron 1 x 106 PFU de DENV29no adaptados. Según los resultados de estos estudios5,6,7,8,9, la infección POR DENV en ratones resulta en replicación viral en el cerebro, dando lugar a síndromes similares a la encefalitis, cambios de comportamiento acompañados de parálisis de las extremidades e inestabilidad postural, neurotoxicidad e inflamación del SNC, fuga de plasma general y localizado a través de la barrera hematoencefálica (BBB) y letalidad. Todos los resultados de estos estudios5,6,7,8,9 han demostrado la capacidad de DENV para infectar el SNC y la inducción de la encefalitis vírica aguda enfermedad tras la infección.
Sobre la base de nuestros hallazgos actuales9,10,11,12,13,14,15, hemos creado un modelo murino de infección DENV como un in vivo para examinar la eficacia terapéutica de los agentes/factores dirigidos contra la replicación viral, así como la neurotoxicidad. Aquí, informamos del protocolo utilizado para crear un ratón ICR de raza superior inmunocompetente para estudiar la infección por el SNC y para monitorear el desarrollo de neuropatías con diferentes gravedades causadas por DENV. Los resultados muestran la progresión significativa de la enfermedad similar a la encefalitis en ratones infectados por el DENV de una manera dependiente del tiempo.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 medio (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>Virus diluyente</td></tr><tr><td>0,3 mL Jeringa de insulina&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>Inyección intracerebral e intraperitoneal</td></tr><tr><td>Microbalanza</td> LabX <td>AL104</td><td>de</td><td>METTLER TOLEDO</td></tr><tr><td>Ratón DENV2 no adaptado (cepa PL046)</td><td>Centros para el Control de Enfermedades de Taiwán-Infectar</td><td></td> <td>ratón</td></tr><tr><td>Instituto de Investigación del Cáncer (ICR) ratón lactante</td><td>BioLASCO Taiwan Co.,</td> <td>Ltd-Nuestro</td> <td>modelo murino</td></tr></tbody></table>

un modelo murino de enfermedad similar a la encefalitis vírica aguda inducida por el virus del dengue

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

El virus del dengue (DENV), un virus transmitido por artrópodos transmitido por mosquitos, puede causar la enfermedad grave conocida como fiebre hemorrágica por dengue, que se caracteriza por complicaciones letales debido a fugas plasmáticas, ascitis, derrame pleural, dificultad respiratoria, sangrado grave y deterioro de los órganos. Algunos casos de infección por DENV presentan manifestaciones neurológicas; sin embargo, los estudios no han explorado más la neuropatógenosis inducida por DENV. En este estudio, presentamos un protocolo para utilizar un ratón ICR (Instituto de Investigación del Cáncer) inmunocompetente para investigar la inducción de la infección del sistema nervioso central (SNC) con DENV, seguido de la progresión de la encefalitis vírica aguda Enfermedad.

Se han notificado complicaciones neurológicas graves asociadasal dengue en pacientes por dengue patógeno 4. Aunque estos casos son raros en la clínica, la creación de un modelo murino inmunocompetente de infección por DENV se puede utilizar no sólo para estudiar la inmunopatógeno, sino también para explorar la infección por el SNC, neuroinflamación, neurotoxicidad y viral agudo enfermedad similar a la encefalitis. En este estudio, según nuestro modelo actual<sup cl...

Aquí, presentamos un protocolo para crear un modelo murino irevolucionario inmunocompetente (Instituto de Investigación del Cáncer) de infección del sistema nervioso central para mostrar el desarrollo de la neuropatía. El control de trastornos encefalíticos víricos agudos por puntuaciones idénticas de enfermedad podría realizarse para mostrar in vivo la neuropatía inducida por el virus del dengue.

Un modelo murino de enfermedad similar a la encefalitis vírica aguda inducida por el virus del dengue

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Este protocolo de un modelo de enfermedad que se ve infección por el virus del dengue en el cerebro se convierte en una plataforma in vivo para la detección de vectores virales y de huésped asociados con la neuropaogénesis. A diferencia de los modelos anteriores, nuestros modelos utilizan herramientas de la infección con un título viral bajo, para infectar a los ratones lecantes del Instituto de Investigación del Cáncer para la inducción de la enfermedad encefalética. Demostrando el procedimiento será Ting-Jing Shen, un candidato al doctorado de mi laboratorio.Antes de iniciar el procedimiento de infección, diluir el virus del dengue no adaptado dos poblaciones, a una por 10 a la quinta placa formando unidades por cada 40 microlitros de RPMI 1640 concentración media. A continuación, cargue una jeringa de 0,3 mililitros equipada con una aguja de calibre 30 con 10 microlitros de virus diluidos. Y una jeringa de 0,3 mililitros equipada con una aguja de calibre 30, con 30 microlitros de virus por animal.Para la entrega intercerebral del virus, presione el oráculo entre el pulgar y el dedo índice para restringir suavemente un ratón del Instituto de Investigación del Cáncer de siete días de edad en una posición propensa e inyecte el volumen de 10 microlitro del virus diluido en el área lambda, en la intersección de la sutura sagital y lambdoide. Después de la inyección intercerebral, utilice el pulgar y el dedo índice para sostener el ratón en una posición supina, y suavemente intraperitonealmente, inyectar el volumen de 30 microlitros del virus diluido, en el abdomen murino. Para la puntuación de la progresión de la enfermedad, asigne una puntuación de cero a cinco a cada ratón inoculado diariamente, de acuerdo con el grado de enfermedades víricas agudas similares a la encefalitis, y trazar las puntuaciones de cada día como una figura basada en curva, utilizando la media más y menos la desviación estándar de las puntuaciones de la prueba diaria en cada grupo.En comparación con los cambios de peso corporal medidos en ratones simulados, medianos solo inoculados, los animales inoculados del virus del dengue presentan una disminución del peso corporal en cada momento durante el ensayo. Además, los animales infectados por el virus del dengue demuestran un aumento significativo en las posturas de espalda encorvaidas, convulsiones límbicas, debilidad límbica, parálisis y muerte en comparación con los síntomas mostrados por animales inoculados simulados. De hecho, los ratones infectados por el dengue presentan una reducción dependiente del tiempo en las tasas de supervivencia que no se observa en animales simulados inoculados, lo que confirma el establecimiento de un modelo infeccioso del virus del dengue dentro del sistema nervioso central que demuestra la progresión de enfermedades similares a la encefalitis viral aguda en ratones.La punción del sitio equivocado puede resultar en la obstrucción de la aguja por la puntuación y el desbordamiento de la solución de virus fuera de la cabeza, lo que resulta en una inyección fallida y una infección fallida. Después del procedimiento, las muestras cerebrales se pueden cosechar para detectar daños patológicos, infiltración de células inmunitarias y análisis de replicación viral por citometría de flujo de tinción de hematoxilina y eosina, y ensayo de formación de placas, respectivamente. Nuestro modelo de murino inmunocompetente, proporciona una plataforma para explorar los mecanismos patógenos de la infección por el virus del dengue, para el desarrollo de vacunas contra el virus del dengue, o fármacos contra el virus del dengue.El virus del dengue es un patógeno de nivel dos de bioseguridad y, como tal, todos los experimentos con este virus deben completarse en un laboratorio de nivel dos de bioseguridad animal cualificado.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video muestra la puntuación de inducción y clínicas de un modelo animal de esclerosis múltiple: las enfermedades crónico-recidivante la encefalomielitis autoinmune experimental en ratas DA. La enfermedad, inducida por la inmunización de ratas con una emulsión que contiene la médula espinal de ratas y toda adyuvante completo de Freund, presenta un cuadro clínico parecido a la enfermedad humana.

La inducción y la puntuación clínica de enfermedades crónico-recurrente encefalomielitis autoinmune experimental

Utilizando luciferasa y los sistemas de formación de imágenes in vivo (IVIS) como un nuevo medio para identificar las variables de enfermedad antes de los desarrollos clínicos ocurrir. IVIS nos ha permitido visualizar en tiempo real la invasión de los virus de encefalitis durante varios días, ofreciendo un modelo de enfermedad más preciso para el estudio futuro. También ha permitido identificar las características potenciales de protección de antivirales y vacunas más rápido que los modelos...

En Vivo Imaging Systems (IVIS) La detección de un virus invasor Neuro-encefálico

El video demuestra la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón mediante la inyección de una combinación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina y Mycobacterium tuberculosis inactivada. El modelo permite a los investigadores estudiar los mecanismos de la enfermedad y probar intervenciones terapéuticas.

Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

Este video muestra la generación de un modelo de ratón con una infección en el SNC. A una cría lactante se le inyecta el virus tanto por vía intracraneal como intraperitoneal. El virus se propaga, infectando el SNC causando la muerte de las células neuronales y la inflamación. El cachorro es evaluado para detectar síntomas de infección a medida que la enfermedad progresa.

Generación de un modelo murino con una infección del sistema nervioso central

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta...

Este video muestra la inducción de convulsiones inducidas por la manipulación en un ratón infectado con el virus de la encefalomielitis murina de Theiler (TMEV). El ratón infectado, que tiene neuronas hiperexcitables, está expuesto a estímulos físicos externos. Esta exposición causa estrés, lo que conduce a una actividad eléctrica anormal en las neuronas, lo que resulta en convulsiones.

Convulsiones inducidas por la manipulación en un modelo de ratón

Virus de la gripe A (gripe) son importantes patógenos respiratorios humanos. Para entender la patogenicidad de gripe y realizar ensayos preclínicos de vacunas nuevos enfoques, modelos animales, imitar la fisiología humana se requieren. Aquí, describimos las técnicas para evaluar el IAV patogenia, respuesta humoral y eficacia de la vacuna utilizando un modelo murino de infección.

Estudios de Virus de influenza A en un modelo murino de infección

Aquí se describe un método para el establecimiento de un modelo de microcefalia inducida por virus Zika en ratón. Este protocolo incluye métodos para embrionario, neonatal y adulto etapa inoculación intracerebral del virus Zika.

Establecimiento de modelos de ratón para trastornos neurológicos inducidos por el Virus Zika utilizando estrategias de inyección Intracerebral: embrionario, Neonatal y adulto

El protocolo presentado aquí permite la reproducción de una desmielinización generalizada de la materia gris de ambos hemisferios corticales en ratas agouti oscuras macho adultas. El método consiste en la implantación intracerebral de un catéter, la inmunización subclínica contra la glicoproteína de oligodendrocitos de mielina y la inyección intracerebral de una mezcla de citoquinas proinflamatorias a través del catéter implantado.

Modelo de rata de desmielinización cortical cerebral generalizada inducida por una inyección intracerebral de citoquinas proinflamatorias

El objetivo del protocolo es demostrar las técnicas utilizadas para investigar la enfermedad viral aislándose y cuantificando el virus del Zika, a partir de múltiples órganos en un ratón después de la infección.

Aislamiento y cuantificación del virus del Zika de múltiples órganos en un ratón

La infección intracerebral con el virus de la encefalomielitis murina de Theiler (TMEV) en ratones C57BL / 6 replica muchos de los síntomas clínicos tempranos y crónicos de la encefalitis viral y la epilepsia posterior en pacientes humanos. Este artículo describe la infección por virus, los síntomas y la histopatología del modelo TMEV.

Un modelo para la epilepsia de etiología infecciosa utilizando el virus de la encefalomielitis murina de Theiler

Aprende a crear un modelo murino inmunocompetente ICR para estudiar la neuropatía inducida por el virus del dengue mediante infección con bajo título viral. Este protocolo permite monitorear enfermedades encefalíticas agudas in vivo.

Un modelo murino de enfermedad similar a la encefalitis vírica aguda inducida por el virus del dengue

Explorar más videos