Name: Evaluación de la Reserva de Flujo Coronario Después de la Reperfusión de Isquemia Miocárdica en Ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-28T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Aprende a evaluar la reserva de flujo coronario en ratas tras isquemia-reperfusión miocárdica mediante ecocardiografía Doppler transtorácica. Esta técnica permite diagnosticar disfunción microvascular y probar tratamientos cardiovasculares.

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Nos gustaría agradecer a la fundación Helmsley por proporcionar equipos de ultrasonido para realizar nuestros experimentos. Este trabajo fue apoyado por la subvención NIA R01 053585.

Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con los protocolos aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Louisville (protocolo 18223 aprobado por la IACUC) y la Guía NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio11.
1. Animales
<ol><li>Utilice 344 ratas Fisher 344 de 4 meses de edad (BW-150-180 g) para el estudio.</li>
</ol>2. Imágenes por ultrasonido antes de la cirugía iral
<ol><li>Anestetizar la rata con isoflurano - cámara de inducción al 5% con 1.5–2.0 L/min O2 flujo seguido de 1.5–2.0% con 1.5–2.0 L/min O2 flujo. Esta anestesia se mantiene durante todo el experimento, durante las etapas de reposo y estrés.</li>
	<li>Coloque al animal en posición supina y ate el tórax. Mantenga la temperatura corporal a 37-38 oC utilizando la plataforma de calentamiento incorporada. Supervise la frecuencia cardíaca utilizando el software. NOTA: La anestesia adecuada es crucial para mantener la frecuencia cardíaca a tasas fisiológicas normales (entre 295-350 latidos/min).</li>
	<li>Aplique pomada de ventosa oftálmica para prevenir la sequedad de los ojos antes de la toma de imágenes.</li>
	<li>Realice ecocardiografía utilizando sonda lineal de 13 a 24 MHz (por ejemplo, MS250) (Figura1A).</li>
	<li>Coloque el animal en la posición supina en la plataforma calentada. Asegúrese de que la anestesia se controla a través del cono nasal. A continuación, coloque la sonda para obtener la vista parasternal de eje corto (PSAX) utilizando el sistema ferroviario (Figura1B).</li>
	<li>Mover la sonda en la dirección rostral desde el PSAX, localizar la arteria pulmonar (Figura 1B).</li>
	<li>Mueva la sonda ligeramente en la dirección caudal de la arteria pulmonar para ver el LAD y almacenar la imagen. NOTA: El LAD es difícil de encontrar sin Color Doppler, por lo que las imágenes en modo B del LAD no siempre son posibles.</li>
	<li>Cuando las diferencias individuales dificultan la localización de la arteria coronaria LAD, siga la técnica que se menciona a continuación:<ol>
<li>Mueva la sonda lateral a la arteria pulmonar.</li>
		<li>Angulo la plataforma para que el animal esté inclinado, invertido o ligeramente hacia el lado derecho para que el ventrículo izquierdo sea más fácilmente visible con la sonda.</li>
	</ol></li>
	<li>Una vez capturada o almacenada en el cine de la imagen en modo B, haga clic en color Doppler en la pantalla táctil (figura1C). Visualizar la arteria coronaria (flecha blanca indica LAD) en el eje corto (Figura1C). El color rojo, como se ve en tiempo real, es indicativo de la dirección del flujo (es decir, el flujo sanguíneo es hacia la sonda).</li>
	<li>Después de visualizar el LAD en un modo de color-Doppler, cambie el modo al modo de onda de pulso (PW). Busque la presencia de una línea indicadora amarilla en la arteria coronaria (Figura2A).</li>
	<li>Coloque la línea PW amarilla en el centro de la arteria coronaria. Asegúrese de que el ángulo es paralelo a la dirección del flujo. NOTA: La velocidad del flujo depende en gran medida del ángulo de la línea PW, así que asegúrese de que coincida con el ángulo de la sonda en pantalla con el ángulo del LAD. Utilice la pantalla táctil para ajustar el ángulo; El ángulo del PW debe ser inferior a 60o.</li>
	<li>Utilice cine store para capturar la velocidad del flujo coronario LAD en reposo en el pico de diastole como formas de onda (Figura2B).</li>
	<li>Después de obtener la velocidad de flujo LAD en reposo, mida la velocidad máxima de flujo de LAD durante la tensión para calcular el CFR. Para medir la velocidad máxima de flujo durante la tensión, infundir Dobutamina a una dosis de 20 g/kg/min a través de la vena de cola8 (Figura2C). NOTA: La perfusión de dobutamina no debe ser superior a 8 min. Utilice una bomba de perfusión y ajuste el diámetro de la bomba de perfusión a 14,43 para la jeringa BD de 10 ml.<ol>
<li>Utilice el conjunto de mariposas de infusión 25-G para la cannulación de la vena de cola. Para colocar la aguja de perfusión, coloque una pequeña tira de gasa alrededor de la base de la cola de la rata, luego agarre con hemostats y gire el torniquete para aplicar presión y hacer que la vena se agrande.</li>
		<li>Coloque la aguja mientras está conectada directamente a la jeringa de Dobutamine. NOTA: Tenga especial cuidado de no introducir accidentalmente el medicamento al extraer sangre para asegurar la colocación adecuada de la aguja en la vena de la cola. Además, asegúrese de evitar introducir una burbuja de aire en la vena, ya que una embolia puede ser fatal para el animal.</li>
		<li>Una vez colocada la aguja, estabilice la con un pegamento y un trozo de cinta quirúrgica, asegurando la línea de perfusión a la cola.</li>
		<li>Retire los hemostats y el torniquete para recuperar el flujo.</li>
		<li>Coloque la jeringa de dobutamina en la bomba de perfusión y configórla para inyectar 20 g/kg/min.</li>
		<li>Durante la perfusión de dobutamina, controle cuidadosamente el pico de LAD y la frecuencia cardíaca. Grabar periódicamente los picos LAD PW en el modo Doppler, especialmente cuando aumenta en respuesta a Dobutamine. NOTA: El desafío de estrés inducido por Dobutamine hace que el corazón trabaje más duro; esto a menudo resulta en el movimiento del corazón y el LAD. Esté preparado para mover el animal, la sonda, o ambos con el fin de mantener el LAD a la vista.</li>
		<li>Después de que los picos de LAD y la frecuencia cardíaca se hayan estancado durante el desafío, detenga la infusión de dobutamina, retire el conjunto de infusión de vena de cola y retire al animal de la plataforma. Permita que el animal se recupere en su jaula de origen.</li>
	</ol></li>
	<li>Seleccione la herramienta Peak Vel para obtener las velocidades diastólicas máximas de las imágenes que se muestran en las figuras 2B y C.</li>
	<li>Calcule el índice CFR como la relación entre la velocidad de flujo diastólica máxima de tensión LAD (Dobutamina) y la velocidad de flujo diastólica máxima de LAD en reposo (Figura2A).</li>
</ol>3. Lesión por reperfusión de isquemia
<ol><li>Rata de anestesia con isoflurano - cámara de inducción al 5% con 1,5–2,0 L/min O2 de flujo seguido de 1,5–2,0% con 1,5–2,0 L/min O2 de flujo.</li>
	<li>Confirme la profundidad de la anestesia por la falta del reflejo de retirada del pedal. Use pomada de ventosa oftálmica en los ojos para evitar la sequedad. Mantener la temperatura corporal adecuada de 37-38 oC utilizando una almohadilla de calentamiento o un controlador de temperatura animal.</li>
	<li>Administrar Meloxicam prequirúrgico, 5 mg/kg por vía intramuscular, 15 minutos antes de la cirugía, seguido de 2 ml de bolo subcutáneo de 0,9% de salina para prevenir la deshidratación durante la cirugía. Se utilizaron guantes e instrumentos estériles, y se emplearon técnicas asépticas. Usando la fuente de luz de fibra óptica, intubate la rata usando el catéter IV del calibre 18 y conéctese al respirador.</li>
	<li>Ligate LAD usando 8-0 sutura monofilamento a través de una abertura de 15 mm en el espacio intercostal 5. Ate un nudo liso y dejar durante 30 min. Confirmar visualmente la isquemia en todas las ratas a través de la decoloración de la superficie del corazón12. Liberar la ligadura después de 30 min y verificar la reperfusión por el enrojecimiento de la zona previamente decolorada del músculo del corazón durante 1-2 min12.</li>
	<li>Cierre la caja torácica con sutura absorbible 4-0 con un patrón de sutura interrumpido, luego cierre la piel usando la sutura de seda no absorbible 5-0 con patrón de sutura continua.</li>
	<li>Retire el animal de la anestesia. Permita que el animal se recupere en la jaula de casa. 5mg/kg Meloxicam se inyectó intramuscular cada 24 horas antes de eutanasiar al animal (72 horas después de la cirugía).</li>
</ol>4. Imágenes por ultrasonido después de la cirugía iral
<ol><li>72 h después de la cirugía irrrobo, mida el flujo coronario y el CFR de nuevo. Compare las mediciones con las mediciones anteriores a IR. Repita los pasos 2.1 a 2.15 como se describió anteriormente.</li>
</ol>

<ol><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia+and+reperfusion--from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation.</a> Nature medicine. 17 (11), 1391-1401 (2011).</li>
<li>French, C. J., Zaman, A. K., Sobel, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+erythropoietin+to+render+jeopardized+ischemic+myocardium+amenable+to+incremental+salvage+by+early+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Coronary+Artery+Disease%22%5BJournal%5D)">Failure of erythropoietin to render jeopardized ischemic myocardium amenable to incremental salvage by early reperfusion.</a> Coronary Artery Disease. 20 (4), 295-299 (2009).</li>
<li>Marzilli, M., Mariani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-reperfusion+and+microvascular+dysfunction%3A+implications+for+salvage+of+jeopardized+myocardium+and+reduction+of+infarct+size%5BTitle%5D)+AND+%22Italian+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Ischemia-reperfusion and microvascular dysfunction: implications for salvage of jeopardized myocardium and reduction of infarct size.</a> Italian Heart Journal. 2 Suppl 3, 40s-42s (2001).</li>
<li>Prasad, A., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+microvascular+dysfunction+and+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+%28British+Cardiac+Society%29%22%5BJournal%5D)">Management of microvascular dysfunction and reperfusion injury.</a> Heart (British Cardiac Society). 91 (12), 1530-1532 (2005).</li>
<li>Ishihara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+coronary+flow+reserve+immediately+after+coronary+angioplasty+in+patients+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22British+heart+journal%22%5BJournal%5D)">Impaired coronary flow reserve immediately after coronary angioplasty in patients with acute myocardial infarction.</a> British heart journal. 69 (4), 288-292 (1993).</li>
<li>Camici, P. G., d'Amati, G., Rimoldi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+dysfunction%3A+mechanisms+and+functional+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular dysfunction: mechanisms and functional assessment.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (1), 48-62 (2015).</li>
<li>Chung, K. S., Nguyen, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+measures+of+coronary+microcirculation%3A+Taking+the+long+road+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Non-invasive measures of coronary microcirculation: Taking the long road to the clinic.</a> Journal of Nuclear Cardiology. , (2017).</li>
<li>Kelm, N. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+cells+improve+left+ventricular+diastolic+function+and+increase+microvascular+perfusion+in+advanced+age%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived cells improve left ventricular diastolic function and increase microvascular perfusion in advanced age.</a> PLoS One. 13 (8), e0202934(2018).</li>
<li>Pan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+recovery+of+coronary+flow+reserve+in+patients+successfully+treated+with+a+percutaneous+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Espa%C3%B1ola+de+Cardiolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">Late recovery of coronary flow reserve in patients successfully treated with a percutaneous procedure.</a> Revista Española de Cardiología. 56 (5), 459-464 (2003).</li>
<li>Samim, A., Nugent, L., Mehta, P. K., Shufelt, C., Bairey Merz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+angina+and+microvascular+coronary+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+treatment+options+in+cardiovascular+medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment of angina and microvascular coronary dysfunction.</a> Current treatment options in cardiovascular medicine. 12 (4), 355-364 (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , 8th edition, The National Academies Collection: Reports funded by National Institutes of Health (2011).</li>
<li>Ciuffreda, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+experimental+model+of+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury%3A+an+ethical+approach+to+set+up+the+analgesic+management+of+acute+post-surgical+pain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Rat experimental model of myocardial ischemia/reperfusion injury: an ethical approach to set up the analgesic management of acute post-surgical pain.</a> PloS one. 9 (4), e95913-e95913 (2014).</li>
<li>van de Hoef, T. P., Siebes, M., Spaan, J. A. E., Piek, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+in+clinical+coronary+physiology%3A+why+coronary+flow+is+more+important+than+coronary+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Fundamentals in clinical coronary physiology: why coronary flow is more important than coronary pressure.</a> European Heart Journal. 36 (47), 3312-3319 (2015).</li>
<li>Naya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserved+coronary+flow+reserve+effectively+excludes+high-risk+coronary+artery+disease+on+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+nuclear+medicine+%3A+official+publication%2C+Society+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Preserved coronary flow reserve effectively excludes high-risk coronary artery disease on angiography.</a> Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 55 (2), 248-255 (2014).</li>
<li>Cortigiani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+and+prognostic+value+of+Doppler+echocardiographic+coronary+flow+reserve+in+the+left+anterior+descending+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+%28British+Cardiac+Society%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic and prognostic value of Doppler echocardiographic coronary flow reserve in the left anterior descending artery.</a> Heart (British Cardiac Society). 97 (21), 1758(2011).</li>
<li>Kawata, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+value+of+coronary+flow+reserve+assessed+by+transthoracic+Doppler+echocardiography+on+long-term+outcome+in+asymptomatic+patients+with+type+2+diabetes+without+overt+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+diabetology%22%5BJournal%5D)">Prognostic value of coronary flow reserve assessed by transthoracic Doppler echocardiography on long-term outcome in asymptomatic patients with type 2 diabetes without overt coronary artery disease.</a> Cardiovascular diabetology. 12, 121-121 (2013).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar

Los principales hallazgos del presente estudio son que IR aumenta la velocidad de la arteria coronaria LAD en reposo y afecta a la CFR, incluso en ausencia de cualquier estenosis angiográfica residual.
Comprender la fisiología coronaria es una parte esencial de la toma de decisiones clínicas para que los cardiólogos traten la enfermedad de las arterias coronarias. CFR es uno de los parámetros funcionales importantes en lacomprensión de la fisiopatología de la microcircu...

La reperfusión de isquemia miocárdica (IR) es una afección en la que el suministro de sangre está restringido al corazón, seguido de la restauración de la perfusión y la reoxigenación simultánea1. La oclusión de las arterias coronarias puede ser causada por una ruptura de la placa de émbolo o colesterol, lo que resulta en un desequilibrio grave de la oferta y la demanda metabólica, causando hipoxia tisular. La terapia de reperfusión ha observado la recuperación del miocardio en peligro, mejorar la función ventricular izquierda y mejorar la supervivencia en pacientes con infarto agudo de miocardio. Sin embargo, después de la recanalización de la arteria coronaria, las anomalías funcionales de los vasos coronarios pequeños pueden ocurrir2,3,4,5. Una proporción significativa de pacientes, tal vez hasta un 40%, no recuperan la perfusión microvascular y miocárdica a pesar de la restauración del flujo coronario. La visualización y evaluación de la microvasculatura coronaria puede ser difícil in vivo, pero hay una serie de técnicas invasivas y no invasivas que se pueden utilizar para evaluar parámetros directamente dependiendo de la función microvascular coronaria6 ,7. Además, la función endotelial se puede evaluar a nivel de la circulación coronaria a través del CFR5.
La ecocardiografía doppler transtorácica es una herramienta no invasiva que nospermite estudiar la velocidad del flujo de las arterias coronarias y CFR 5. CFR representa la relación entre el flujo sanguíneo coronario máximo y el flujo sanguíneo coronario en reposo8. Durante el desafío de estrés, un corazón normal aumenta el flujo sanguíneo coronario hasta cuatro veces por encima del valor de reposo. El riesgo cardiovascular aumenta cuando se reduce el CFR9. Ishihara et al mostraron que el CFR estaba gravemente deteriorado inmediatamente después de la angioplastia coronaria5. En ausencia de estenosis de la arteria coronaria, el CFR disminuye durante la disfunción microvascular coronaria y está presente en aproximadamente la mitad de los pacientes con enfermedad arterial coronaria estable10.
El objetivo general de este método es la visualización no invasiva de la función de la arteria coronaria descendente anterior izquierda (LAD) en ratas a través de ecocardiografía, que puede utilizarse para calcular la CFR. Esto ofrece una importante herramienta de evaluación para diagnosticar la disfunción microvascular y evaluar posibles tratamientos terapéuticos.

<table><tbody><tr><td>Jeringa de 10 mL</td><td>BD Jeringa</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>250S 13&ndash; Sonda lineal de 24 MHz</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Clorhidrato de dobutamina</td><td>Sigma</td><td>D0676-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RRC</td><td>27376</td><td></td></tr><tr><td>Legato 100 Bomba de jeringa</td><td>KD Scientific</td><td>788100</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 3100</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Set de infusión alado, 27G x 1/2",</td><td>Medline.com</td><td></td><td></td>TMOSV27ELZ</tr></tbody></table>

evaluación de la reserva de flujo coronario después de la reperfusión de isquemia miocárdica en ratas

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

La enfermedad de las arterias coronarias es la principal causa de muerte en todo el mundo. Después de un infarto agudo de miocardio, la intervención temprana y exitosa del miocardio a través de la recanalización de la arteria coronaria es la estrategia más eficaz para reducir el tamaño del miocardio isquémico. La microvasculatura coronaria no se puede visualizar e imágenina invivo, pero hay varias técnicas invasivas y no invasivas que se pueden utilizar para evaluar parámetros que dependen directamente de la función microvascular coronaria. La función endotelial después de la reperfusión de isquemia se puede evaluar también a nivel de la circulación coronaria a través de la reserva de flujo coronario (CFR). En este estudio, la velocidad máxima de las arterias coronarias descendentes anteriores izquierdas (LAD) se midió en ratas in vivo a través de la Ecocardiografía Doppler Transtorácica durante el descanso y el desafío de estrés (inducido por Dobutamine). Un corazón normal puede aumentar su flujo sanguíneo coronario hasta cuatro veces por encima de los valores de reposo durante la inducción del estrés. Después de la reperfusión de isquemia, encontramos un CFR significativamente disminuido, que se puede utilizar como un marcador de disfunción microvascular coronaria. CFR ha abierto una ventana sobre la importancia de la disfunción microvascular y se ha demostrado para predecir el riesgo cardiovascular independientemente de si la enfermedad obstructiva grave está presente.

Para este estudio, utilizamos 12 hembras Fisher 344 ratas. Realizamos una prueba de esfuerzo con dobutamina y medimos la velocidad de la arteria coronaria LAD antes y 72 horas después de la cirugía de infrarrojos. Antes de la cirugía de irrradios, la velocidad de la arteria coronaria ladánírica en reposo se midió como 423 x 59 mm/s, lo que se incrementó después de la perfusión de dobutamina (1005 a 77 mm/s) (Figura3A). Después de 72 h de reperfusión de isquem...

La reserva de flujo coronario (CFR), se define como la relación entre el flujo sanguíneo coronario máximo y el flujo sanguíneo coronario en reposo. Presentamos un protocolo para evaluar la CFR en ratas a través de ultrasonido, que ofrece la oportunidad de predecir factores de riesgo cardiovascular en ausencia de enfermedad coronaria obstructiva.

Evaluación de la Reserva de Flujo Coronario Después de la Reperfusión de Isquemia Miocárdica en Ratas

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

El objetivo general de este método es la visualización de la función de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en ratas utilizando ecocardiografía para calcular la reserva de flujo coronario. Este método ofrece una importante herramienta de evaluación para el diagnóstico de la disfunción microvascular en corazones enfermos y para evaluar posibles tratamientos a lo largo del estudio. Aunque se ha demostrado que la terapia de reperfusión salva el miocardio en peligro y mejora la función ventricular izquierda, pueden producirse anomalías funcionales de pequeños vasos coronarios después de la recanalización de la arteria coronaria.Este método puede proporcionar información sobre la microcirculación coronaria de ratas, así como en otros modelos, incluyendo infarto de miocardio, y sobrecarga de volumen de presión del ventrículo izquierdo. Antes de la cirugía de reperfusión previa a la isquemia, confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie en una rata Fischer 344 anestesiada. Afeita el cabello del pecho.Aplicar pomada a los ojos del animal y colocar al animal en la posición supina en una plataforma de calentamiento incorporada de 37 a 38 grados Celsius. Conecte la sonda lineal de 13 a 24 megahercios a la máquina de ultrasonido. Establezca el ajuste preestablecido de la aplicación en el ajuste de imágenes cardíacas y utilice el sistema de rieles para colocar la sonda para obtener la vista de eje corto parasternal.Utilice el micromaniprógrafo del eje XY para mover la sonda en la dirección rostral para localizar la arteria pulmonar. Mueva la sonda, haciendo que el ventrículo izquierdo sea más fácilmente visible. Una vez capturada la imagen en modo B y Cine almacenado, haga clic en el color Doppler y visualice la arteria coronaria en el eje corto.El color rojo, como se observa en tiempo real, es indicativo de la dirección del flujo. Después de visualizar la arteria coronaria descendente anterior inferior en el modo Doppler de color, cambie el modo a la onda de pulso y busque la presencia de una línea indicadora amarilla en la arteria coronaria. Coloque la línea de onda de pulso amarillo en el centro de la arteria coronaria, teniendo cuidado de que el ángulo sea paralelo a la dirección del flujo y utilice Cine Store para capturar la velocidad del flujo coronario descendente anterior izquierdo en reposo y la diásola pico de las formas de onda.Después de obtener la velocidad de flujo descendente anterior izquierda en reposo, coloque una pequeña tira de gasa alrededor de la base de la cola y use hemostats para agarrar y torcer el torniquete para aplicar presión, haciendo que la vena se agrande. Coloque cuidadosamente una aguja de mariposa de infusión de calibre 25 unida a una jeringa de 10 mililitros cargada con dobutamina en la vena de cola dilatada y estabilice la aguja con pegamento y un pedazo de cinta quirúrgica. Una vez asegurada la línea de perfusión, retire los hemostats y el torniquete para recuperar el flujo y coloque la jeringa en una bomba de perfusión para inyectar 20 microgramos por kilogramo por minuto.Durante la perfusión, controle cuidadosamente el pico de la arteria descendente anterior izquierda y la frecuencia cardíaca, registrando periódicamente los picos de onda de pulso de la arteria descendente anterior izquierda en el modo Doppler bajo las condiciones de estrés inducidas por dobutamina. Después de que los picos de la arteria coronaria descendente anterior y la frecuencia cardíaca se hayan estancado durante el desafío, detenga la perfusión, retire el conjunto de infusión de la vena de cola y retire al animal de la plataforma. A continuación, utilice la herramienta de velocidad máxima para obtener las velocidades diastólicas máximas de las imágenes y calcular el índice de reserva de flujo coronario como la relación de la velocidad de flujo diastólica del pico de tensión de la arteria descendente anterior izquierda a la velocidad de flujo diastólica descendente izquierda en reposo.Usando una fuente de luz de fibra óptica, intuba la rata con un catéter IV de calibre 18 y conéctese al catéter a un respirador. A continuación, utilice un 8-0 sutura monofilamento para ligar la arteria descendente anterior izquierda a través de una abertura de 15 milímetros en el quinto espacio intercostal con un nudo liso durante 30 minutos. Al final del período de isquemia, confirme visualmente la isquemia a través de la decoloración de la superficie del corazón y libere la ligadura.La reperfusión se puede verificar por el enrojecimiento de la zona previamente decolorada del músculo cardíaco. 72 horas después de la cirugía, medir el flujo coronario y la reserva de flujo coronario como se ha demostrado, y comparar las mediciones con las obtenidas antes de la lesión. En este experimento representativo, antes de la cirugía de reperfusión de isquemia, el resto de la velocidad de la arteria coronaria descendente anterior se midió como aproximadamente 423 milímetros por segundo a más del doble de la velocidad después de la perfusión de dobutamina.72 horas después de la reperfusión de isquemia, el reposo dejó la velocidad de la arteria coronaria descendente anterior fue significativamente mayor en comparación con la velocidad de la arteria coronaria descendente anterior en reposo antes de la cirugía. La respuesta al estrés a una prueba de dobutamina después de la lesión se redujo significativamente en comparación con la respuesta antes de las respuestas a la cirugía. La reserva de flujo coronario se calcula como la relación de la velocidad de flujo máxima durante el estrés a la velocidad de flujo en reposo y fue aproximadamente 2.1 en ratas jóvenes antes de la cirugía, pero se redujo significativamente 72 horas después de la lesión.Además, no hubo cambios significativos en la función sistólica del ventrículo izquierdo 72 horas después de la lesión. Después de su desarrollo, esta técnica permitirá a los investigadores explorar y utilizar imágenes por ultrasonido de arterias coronarias en modelos animales pequeños que imitan con precisión las condiciones de la enfermedad humana. Después de ver este video, usted debe tener una muy buena comprensión de cómo medir el flujo sanguíneo coronario y evaluar la microcirculación coronaria en un modelo de enfermedad cardíaca animal pequeño.

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Investigación

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El modelo de rata con infarto agudo de miocardio (IAM) es útil para estudiar las consecuencias de un infarto de miocardio en la función cardíaca fisiopatológicos y fisiológicos.

Infarto agudo de miocardio en ratas

Este protocolo describe el modelo porcino infarto de miocardio (IM) con un 90 min a tórax cerrado oclusión coronaria con balón de la arteria descendente anterior izquierda (LAD), seguido de reperfusión. Por otra parte, el protocolo para varios parámetros de resultado, como la función cardiaca, hemodinámica, la resistencia microvascular, y el tamaño del infarto, también se presentan.

Infarto de miocardio y la evaluación de resultados funcionales en los cerdos

La reserva de flujo coronario (CFR) es útil para la evaluación de la demanda miocárdica de oxígeno y la evaluación del riesgo cardiovascular. Este estudio establece un método de ecocardiograma Doppler transtorácico (TTDE) paso a paso para el monitoreo longitudinal de los cambios en la CFR, medidos desde la arteria coronaria en ratones, bajo la sobrecarga de presión experimental de la banda aórtica.

Evaluación Ultrasonido base de la arteria coronaria de flujo y la reserva coronaria Utilizando la sobrecarga Modelo Presión en ratones

El corazón de rata aislado es un modelo duradero para la lesión por isquemia y reperfusión. Aquí, describimos el proceso de recolección del corazón latiendo de una rata a través de la canulación aórtica in situ, la perfusión de Langendorff del corazón, la lesión simulada por isquemia-reperfusión y la tinción del infarto para confirmar la extensión de la agresión isquémica.

Inducción y Evaluación de la isquemia-reperfusión en perfundidos Langendorff corazones de ratas

El modelo de isquemia-reperfusión miocárdica del corazón de rata se mejora mediante el uso de un retractor de fabricación propia, un tubo de cloruro de polivinilo y un método de anudado único. El electrocardiograma, el cloruro de trifeniltetrazolio y la tinción histológica, y los resultados del análisis de supervivencia porcentual mostraron que el grupo modelo mejorado tiene mayores tasas de éxito y supervivencia que el grupo modelo ya existente.

Modelo mejorado de roedores de isquemia miocárdica y lesión por reperfusión

En este documento, presentamos un protocolo centrado en el control de calidad de la ligadura de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante la modificación técnica del procedimiento tradicional en ratas para la investigación de isquemia-reperfusión miocárdica aguda.

Ligadura de la arteria coronaria descendente anterior izquierda para la investigación de isquemia-reperfusión: mejora del modelo a través de modificaciones técnicas y control de calidad

El presente estudio demuestra un modelo animal altamente reproducible de isquemia miocárdica regional aguda y lesión por reperfusión en conejos utilizando una minitoracotomía izquierda para los casos de supervivencia o una esternotomía de línea media para los casos de no supervivencia.

Modelo de lesión por isquemia y reperfusión en conejos

El presente protocolo describe una visión paraesternal modificada de eje largo para una localización rápida y precisa de la arteria descendente anterior izquierda. Este enfoque está diseñado para ser más simple y fácil de usar, al tiempo que facilita el examen de los cambios dinámicos en la reserva de flujo coronario después de la isquemia-reperfusión miocárdica en ratones.

Evaluaciones dinámicas de la reserva de flujo coronario después de la reperfusión de isquemia miocárdica en ratones

El trauma quirúrgico induce una respuesta inflamatoria. Las citocinas y los ligandos endógenos se sabe que modulan el tamaño del infarto de miocardio después de la isquemia y la reperfusión. Se presenta una versión modificada de tórax cerrado, el modelo murino de isquemia y reperfusión con pesas colgantes para minimizar los efectos de la toracotomía.

Un murino tórax cerrado modelo de isquemia y reperfusión miocárdica

Se introduce un método quirúrgico para inducir experimental de isquemia / reperfusión (I / R) lesión para simular el infarto de miocardio (MI) en modelos de ratón que permite una mayor claridad en el posicionamiento de la ligadura en la arteria descendente anterior izquierda (LAD) para aumentar la reproducibilidad de experimentos en ratones MI.

Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

Aprende a evaluar la reserva de flujo coronario en ratas tras isquemia-reperfusión miocárdica mediante ecocardiografía Doppler transtorácica. Esta técnica permite diagnosticar disfunción microvascular y probar tratamientos cardiovasculares.

Evaluación de la Reserva de Flujo Coronario Después de la Reperfusión de Isquemia Miocárdica en Ratas

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