Modelo murino de estenosis venosa central usando fístula aortocaval con una estenosis de salida

La estenosis venosa central puede causar tanto fístula aortocavala, o AVF, insuficiencia primaria de maduración, así como falla posterior en una fístula de trabajo. Esta técnica utiliza una versión modificada de un modelo AVF murino establecido que recapitula el curso clínico de la AVF humana y se domina fácilmente a través de varios pasos críticos. Antes de comenzar el procedimiento, confirme una falta de respuesta al pellizco del dedo del pie en un ratón C57-Black/6 de nueve a 11 semanas de edad y coloque el ratón en la posición supina en el área quirúrgica.

Aplicar ung ón en los ojos del animal, y eliminar el pelaje del lado ventral del cuello a la parte inferior del abdomen. Luego limpie y desinfecte el sitio quirúrgico con tres exfoliantes secuenciales 10%povidona-yodo y 70%isopropanol, y coloque una cortina quirúrgica sobre el animal. Para la exposición a la abrazadera y el lugar de punción, coloque el ratón bajo un microscopio de disección y, utilizando una técnica estéril y un bisturí, haga una incisión abdominal profunda en la piel desde el borde inferior del hígado hasta justo por encima del pubis.

Corte a través de la musculatura con tijeras para abrir la cavidad abdominal, e inserte un retractor en el abdomen. Mueva los intestinos hacia el lado derecho y envuélvalos en una gasa empapada en solución salina. Mueva la vejiga y las vesículas seminales al lado caudal del animal, y utilice un soporte de micronúleo para diseccionar el mesenterio entre el recto y el retroperitoneo para asegurar una vista completa de la aorta y la vena cava inferior, o IVC.

A continuación, utilice el soporte de microneedleta para diseccionar la aorta infrarroja y la IVC en bloque desde los tejidos retroperitoneales circundantes laterales y dorsales para juntar los tejidos, y diseccionar los tejidos circundantes para exponer el sitio de punción aórtica aproximadamente tres cuartas partes de la distancia desde la vena renal izquierda hasta la bifurcación aórtica. Para el aislamiento de la CIV, disecciona entre el CIV infrarrojo y la aorta inmediatamente distal a la vena renal izquierda y extender la disección distalmente a la mitad entre la vena renal izquierda y la bifurcación aórtica para la observación infrarroja postoperatoria de CIC. Haga una ventana para separar el CIV de la aorta, y disecciona el CIV del tejido circundante.

A continuación, coloque cuidadosamente un 8-0 sutura de monofilamento de poliamida debajo de la CIV y la aorta antes de tirar del extremo de la sutura a través de la ventana para colocar la sutura debajo de la CIV solamente. Para crear el AVF, primero doble una aguja de calibre 25 a un ángulo de 45 a 60 grados a cuatro milímetros de la punta de la aguja y sujete la aorta infrarroja y el IVC con un clip microquirúrgico. Agarrar el tejido conectivo que rodea la bifurcación, girar la aorta mediamente y caudalmente para exponer el sitio de punción de la aorta estirada ligeramente hacia el lado ventral, y utilizar la aguja del calibre 25 para perforar a través de la aorta en el CIV.

Cuando el tejido haya sido perforado, suelte la aorta y tire hacia arriba del lado izquierdo de la aorta para cubrir el sitio de la punción con el tejido circundante. A continuación, retire la aguja y presione suavemente el lugar de la punción con un hisopo con punta de algodón para la hemostasia. Para la creación de estenosis IVC, coloque la punta de un catéter intravenoso de 22 calibres longitudinalmente en el CIV y ligar el catéter al CIV con un 8-0 Sutura.

Cuando se haya colocado la sutura, retire el catéter y confirme la hemostasia primaria antes de desabrochar la aorta y el CIV. Cubra el lugar de la punción por un minuto más para asegurar la hemostasia, y devuelva los órganos a su cavidad abdominal antes de cerrar el abdomen con 6-0 suturas. A continuación, coloque el ratón en una jaula individual sin ropa de cama en un dispositivo de soporte térmico con monitoreo hasta la recuperación completa, y use ultrasonido Doppler para confirmar la patencia de la fístula.

El día siete después del procedimiento quirúrgico, las áreas de fístula y estenosis de la CIV se detectan fácilmente en la vista longitudinal. En ratones con una estenosis sin AVF, el segmento de estenosis exhibe una forma de onda venosa con un ensancimiento más espectral que los ratones operados por simulaciones, pero sin mucha pulsación. En ratones que tienen un AVF, así como una estenosis, el segmento de estenosis muestra una forma de onda pulsatil además de la ampliación espectral, y la velocidad máxima promedio por tiempo del flujo en la estenosis en ratones que tienen un AVF con estenosis es significativamente mayor que en ratones con estenosis sola.

El diámetro medio de la CIV en la estenosis en ratones con estenosis sola es similar al observado en ratones con fiaV y estenosis. Además, utilizando el segmento aguas arriba o aguas abajo como referencia, el porcentaje de estenosis es significativamente mayor en ratones que tienen una AVF además de una estenosis. Cuando se liga el catéter IV y el CIV juntos, es importante atarlos firmemente para crear una estenosis reproducible.

La aplicación de este procedimiento al modelo de implantación de injerto venos murino podría responder a cómo superar la oclusión de la estenosis del injerto venoso.