Métodos funcionales y fisiológicos de evaluación de la regeneración media nerviosa en la rata

Usando el nervio mediano de la rata, es posible replicar adecuadamente, lesiones del nervio periférico en los seres humanos. Clínicamente, la mayoría de estas lesiones se producen, en la extremidad superior que presta apoyo al uso de este modelo experimental. En este artículo vamos a mostrar, cómo producir diferentes tipos de lesiones nerviosas medianas en la rata.

Además, ilustraremos cómo evaluar la recuperación funcional de este nervio usando varias pruebas. El nervio mediano se origina a partir de los segmentos de la médula espinal C6 a T1. El nervio mediano se resalta en verde. En este video, las cortinas quirúrgicas no se utilizan con fines de demostración.

Por favor incluya una cortina mientras realiza la cirugía. La piel en el aspecto medial del brazo derecho y la región pectoral se incisa hasta el plano de fascias profundas. Los vasos sangrantes están cuidadosamente ligados.

A continuación, la fascia braquial se corta cuidadosamente, teniendo cuidado de no dañar las estructuras vasculares y nerviosas, en el aspecto medial del brazo. Un par de tijeras se abre sin rodeos debajo, la inserción terminal del músculo pectoral mayor, con el fin de burlarse de este músculo, lejos de la arteria y vena axilar subyacente, así como de las ramas terminales del plexo braquial. La inserción de pectoral músculo mayor, luego se divide con una cautey eléctrica.

El músculo pectoral menor se expone y corta. El nervio medial se disecciona sin rodeos de los vasos braquiales y del nervio ulnar hasta la región del codo. Ahora es posible observar, las diferentes ramas terminales del plexo braquial, a saber, la mediana, el Ulnar, el radial, el axilar, y los nervios musculocutáneos.

Con el nervio mediano expuesto y aislado se pueden inducir diferentes lesiones mecánicas. Se puede crear un grupo Sham, diseccionando únicamente el nervio mediano. En el grupo de aplastamiento, el nervio mediano se comprime, utilizando fórceps de microcirugía durante 15 segundos.

El grupo de escisión es el resultado de la eliminación de un segmento de 10 milímetros de largo del nervio mediano. El muñón proximal del nervio mediano está ligado con el 8-0 sutura de nylon para prevenir el crecimiento axonal. Alternativamente, es posible rotar el segmento extirpado 180 grados y utilizarlo como un injerto nervioso autólogo.

En este caso, los tocones proximales y distales de la sección en el nervio de medios se suturan al injerto nervioso utilizando puntos de nylon 10-0. La fisioterapia es parte del estándar de atención de los pacientes que se recuperan de lesiones del nervio periférico. Existen múltiples estrategias para proporcionar fisioterapia postoperatoria a las ratas, que se han sometido a lesiones nerviosas medianas.

Es importante elegir ratas jóvenes y permitirles tener contacto con los instrumentos de fisioterapia antes de la cirugía. Esto garantiza una adaptación más fácil y rápida a los ajustes de ejercicio. Además, los instrumentos de fisioterapia deben permitir que las ratas tengan cierto grado de libertad e idealmente permitirles realizar movimientos finos con las sierras delanteras.

Hay varias maneras de realizar la fisioterapia. Por ejemplo, se pueden utilizar esferas individuales. Coloque la rata dentro de la esfera y luego colóquela en una habitación con pocos obstáculos.

Deja que explore la habitación durante media hora. Haz esto una vez al día. Las ratas también se pueden alojar en jaulas individuales.

Con ruedas de running incorporadas. De esta manera, las ratas pueden hacer ejercicio, tanto como quieran y cuando lo deseen. Otra posibilidad es acomodar, las ratas en grupos en jaulas más grandes.

Personalice las jaulas utilizando cueros, cuerdas, ruedas de running y otros elementos de enriquecimiento ambiental. Esto les permite una amplia libertad de movimiento, de acuerdo con su comportamiento exploratorio natural y permite a las ratas familiarizarse, con algunos de los elementos presentes, en las pruebas funcionales. Antes de realizar las pruebas funcionales, familiarice a las ratas con las golosinas que eligió para utilizar como refuerzo positivo.

Realice las pruebas por la noche, cuando las ratas son naturalmente más activas. Comience con una prueba de agarre. Coloque la rata en la rejilla y levántela por su cola dejando que agarre la rejilla.

Cuando la rata es capaz de agarrar la rejilla, con una fuerza similar con ambas sierras delanteras. Significa que el nervio mediano está funcionando y la prueba de agarre se considera positiva. Si no puede agarrar la rejilla con la pata lesionada, la prueba de agarre se considera negativa.

Para la prueba pin Prick, coloque la rata en la plataforma y espere unos minutos hasta que desaparezcan las actividades exploratorias y de aseo mayor. Comience cuando la rata esté estacionaria y de pie sobre las vicadas delanteras. Con la ayuda del espejo, inserte el cabello de Von Frey a través de la malla para pinchar el aspecto palmar de la sierra delantera.

Repita esto cinco veces en cada apuel, alternativamente, esperando unos segundos después de cada evaluación. Puntuar la respuesta de retirada de la siguiente manera, cero para ninguna respuesta de abstinencia, si la rata retira lentamente la pata del filamento y dos si la rata responde rápidamente al estímulo y elimina la pata o lame la pata. Coloque la rata en la parte inferior de la escalera y toque suavemente la cola de la rata.

Encienda el temporizador una vez que la rata comience a caminar y deténgalo una vez que sus hocicos crucen la entrada de las cajas. Registre la hora y repita la prueba tres veces. Coloque la rata en la parte inferior de la cuerda y persuadirla para que la suba tocando suavemente su cola.

Considere la prueba válida si el animal no lo hace, dude durante la tarea o deja de escalar. Arranca el temporizador una vez que el animal inicia la escalada y detente en el momento en que el hocico de la rata cruza la entrada de la plataforma. Dale a la rata un refrigerio después de realizar las tareas correctamente y dejarla, unos minutos de descanso antes de repetirlo.

Coloque un pedazo de papel gráfico en el suelo de los pasillos. Luego, agarra a la rata por su cola y deja que sostenga el pincel de pintura, impregnado en azul de metileno. Colóquelo en la entrada del pasillo para hacerlo caminar dentro de la caja.

Retire el papel gráfico del suelo de los pasillos y repita las pruebas hasta obtener una buena y representativa impresión de ambas sierras delanteras. A partir de las impresiones obtenidas, seleccione una con una buena impresión de las sierras delanteras sucesivas y mida los siguientes parámetros. Longitud de impresión, extensión de dedo, extensión intermedia de los dedos y factor de postura.

Finalmente medir la distancia entre el segundo dedo de dos impresiones sucesivas, la longitud de zancada. Para realizar la Evaluación Termográfica, coloque un pedazo de pegamento de doble cara en la esponja. Coloque la rata en él y pegue las sierras delanteras como se muestra.

Espere un minuto para disipar el intercambio de calor del manejo de las patas de la rata. Agarre la cámara en un ángulo de 90 grados y aproximadamente 30 centímetros de distancia de las ratas. Hacer dos adquisiciones.

Primero, un termograma de cuerpo completo, luego, aproximiendo la cámara a la parte superior del cuerpo de la rata, hacer el segundo. A partir del termograma obtenido, encontramos una región de interés correspondiente a la zona palmar de las sierras delanteras. Mida los valores de temperatura media, mínima y máxima de esa área en ambas patas y calcule las diferencias de temperatura.

Para realizar la siguiente evaluación, exponga el nervio mediano en ambos lados como se explicó anteriormente. Comience colocando la rata en su espalda y coloque el electrodo que acaba de mostrar en la piel. Los electrodos de tierra en el muslo de la rata y los electrodos de estimulación y grabación, en la extremidad superior izquierda.

Ponga un electrodo de grabación, en el vientre muscular Flexor digitorum sublimis, y los electrodos de estimulación, aproximadamente en el nervio mediano. Comienza la adquisición con una amplitud de estímulo de 10 milivoltios y aumenta gradualmente, en pasos de 10 milivoltios hasta llegar a dos voltios. Durante la adquisición, registre la amplitud de estímulo para la primera flexión de los dedos visibles.

Ese es el umbral de estimulación motora. La amplitud mínima de estímulo, necesaria para obtener un potencial de acción muscular compuesta, C.M.A.P.is un umbral de estimulación neurológica. Por último, seleccione un C.M.A.P representativo, en respuesta a un estímulo supramáximo y mida los siguientes parámetros, Latencia, Amplitud y Duración.

Para realizar la evaluación de la fuerza de flexión, en primer lugar pasar un bucle de sutura de seda de cinco o seis a través del área palmar de cada anteéptica y dejarlo con cinco centímetros de longitud. Coloque la rata sobre su espalda. Comience con la sierra delantera izquierda, enganche la línea de sutura en el gancho del dinamómetro y alinee la parte delantera con el dinamómetro, sin poner demasiada tensión en el gancho.

Sostenga los electrodos estimulantes, aproximadamente en el nervio mediano. Ajuste la amplitud del estímulo a 1,5 voltios y registre la fuerza instantánea durante 30 segundos. A partir de la gráfica obtenida, analice los valores de fuerza máxima, mínima y media y el área debajo de la curva.

El Flexor carpi radialis, que es invadido por el nervio mediano, se elimina bilateralmente y se pesa en una escala de precisión. Con respecto a algunos resultados representativos, en la prueba de agarre, el porcentaje de ratas con una respuesta positiva, es más alto en el grupo Sham y aumenta gradualmente con el tiempo, en ratas del grupo de injerto nervioso. Los resultados de la prueba pin Prick son más altos, en el grupo Sham en comparación con los de los grupos Dejerto o Escisión.

La velocidad de la rata en la prueba de Carrera de escalera.es más alta en el grupo Sham.que la rata se somete a una lesión de laboratorio medial. Entre el encendedor, el tiempo para correr la escalera, tiende a disminuir con el tiempo paring Recuperación del nervio mediano. Análogamente a lo que se observa en la prueba de Escalera corriendo, el tiempo que las ratas tardan en subir la cuerda, es inferior en el grupo Sham, en comparación con los grupos en los que el nervio mediano está herido.

La velocidad de la rata, en esta prueba, aumenta en las ratas, en la que se permite que un nervio mediano se recupere. Como se muestra en estos gráficos de barras, el análisis de ratas que caminan, tiende a mostrar cambios en la morfología de las huellas de las patas. Estos cambios son a menudo más pronunciados, en lesiones de aplastamiento que en lesiones de nervios segmentarios.

Este gráfico muestra que la termografía parece ser. una herramienta útil para buscar diferencias de temperatura, entre las sierras delanteras en los primeros 30 días después de la cirugía. Esas diferencias de temperatura son más notables, en ratas con el nervio mediano más gravemente lesionado, como en los del grupo de escisión. La fuerza de flexión de la rata está directamente correlacionada, con el grado de recuperación del nervio.

Estar más cerca de la normalidad cuando la recuperación es máxima, como se puede ver en estos gráficos de barras que comparan la fuerza, tanto en las patas en la Escisión como en los grupos de Injerto Nervioso. En cuanto a la electroneuromiografía, se pueden observar varios patrones. Un potencial normal de C.M.A.P., es típico de una rata del grupo Sham.

Mientras que el C.M.A.P.is polifásico se asocia, con un grado variable de lesión del nervio mediano, como sucede en el aplastamiento y en los grupos de injerto nervioso. En el grupo de la escisión, no hay C.M.A.P.La onda y la morfología de la flexor carpi radialis dependen de la recuperación del nervio mediano. Estas dos imágenes muestran estos músculos.en los grupos Sham y Escisión.

Como se muestra en este artículo, el nervio de la mediana de la rata es un modelo conveniente de lesión y reparación del nervio periférico. Múltiples estrategias estandarizadas están disponibles para evaluar la recuperación motora y sensorial. Muchos de ellos no son invasivos, lo que permite una evaluación diaria.

Por último, los entornos experimentales de fisioterapia, pueden simular la recuperación en el contexto clínico, facilitando la estipulación de resultados para la especie humana.