Un modelo preclínico de rata para el estudio de la lesión por isquemia-reperfusión en microcirugía reconstructiva

La lesión por isquemia-reperfusión es la principal causa de fallo del colgajo en la microcirugía reconstructiva. Este video describe un modelo animal preclínica para el estudio de esta fisiopatología. Este modelo de colgajo de piel libre basado en los vasos epigástricos caudal superficiales en la rata puede permitir la evaluación de diferentes terapias y compuestos para contrarrestar los daños relacionados con la lesión de isquemia-reperfusión.

Las reconstrucciones microquirúrgicas son ideales para una amplia variedad de defectos. Sin embargo, estos procedimientos garantizan un período obligatorio de isquemia seguido de la reperfusión. Este período suele ser bien tolerado, y la tasa de éxito de los procedimientos microquirúrgicos supera el 90%Sin embargo, solo el 73,7% de los colgajos que requieren revisión quirúrgica pueden ser completamente seguros.

Además, en los casos de replantación de lesiones por avulsión de dedos, la tasa de éxito es de aproximadamente el 60% y en los casos de re-trasplante de tejido compuesto, los porcentajes de proyección de lesiones que sufren isquemia-reperfusión aumentan ya que la lesión activa la inmunidad innata. Por lo tanto, el estudio de este fenómeno fisiopatológico es de interés. Para comenzar este procedimiento, utilice un marcador quirúrgico para dibujar un colgajo de tres centímetros por seis centímetros, asegurándose de que uno de los lados de seis centímetros coincida con la línea media del abdomen.

A continuación, haga una incisión cutánea de seis centímetros en la línea media del abdomen, dos incisiones perpendiculares de tres centímetros, así como una de seis centímetros paralelas a la primera incisión. Para comenzar a diseccionar la solapa de piel designada, usa tijeras y fórceps Adson para levantar la solapa. Tire suavemente de la solapa del área craneal hacia el área caudal.

Disecciona el pediculo de la solapa sin tocarlo o agarrando la adventitia lo menos posible para evitar dañar la pared del recipiente. Usar 8-0 suturas de nylon para ocluir por ligaduras los vasos safenosos, vasos femorales circunflejos laterales y los vasos femorales caudales proximales. Sujete el pediculo vascular y luego córtelo para iniciar el período de isquemia de ocho horas.

Utilice una solución salina heparinizada para perfumar el colgajo y, a continuación, retire la sangre estancada de la microcirculación. Utilice suturas de nylon 10-0 para realizar las anastomosas microquirúrgicas. Después de ocho horas de isquemia, reperfuse la solapa quitando las abrazaderas microvasculares, y compruebe la patencia vascular.

En primer lugar, evalúe el flujo sanguíneo utilizando un caudalímetro de ultrasonido de tiempo de tránsito y sondas microquirúrgicas. Coloque el recipiente de destino en la ventana de detección ultrasónica de la sonda de flujo para cuantificar el volumen de flujo. Cuando se logra un buen acoplamiento y el recipiente se coloca en la ventana acústica sin ninguna tensión, haga clic en el botón de grabación en la pantalla para almacenar los datos.

Después de esto, utilice 4-0 suturas absorbibles para cerrar la piel. Para evaluar la microcirculación de la solapa, utilice el análisis de contraste de motas láser. Haga una nueva grabación para cada muestra y para cada estudio de seguimiento haciendo clic en el archivo, nueva grabación.

Se abrirá una nueva ventana que muestra el panel de configuración. Aquí, edite la información para el nombre del proyecto, el asunto, el operador y el nombre de la grabación. Ajuste la distancia de trabajo moviendo el láser en relación con el tejido.

Acercar o alejar la cabeza del láser hacia el tejido de interés. En la configuración de la imagen, estandarice el área de medición introduciendo la anchura y la altura deseadas. Establezca la densidad de puntos en alta.

En la configuración de captura de imagen, seleccione la velocidad de fotogramas y la duración de la grabación. A continuación, haga clic en el botón de grabación para iniciar la grabación. El panel de configuración se sustituye por el panel de grabación y los datos se guardan automáticamente.

Tome instantáneas durante el procedimiento para permitir una comparación adicional. Después de esto, utilice el software ImageJ para medir las áreas de supervivencia y necrosis colocando primero una regla en el sitio de la solapa y tomando imágenes de control para la medición macroscópica. En la caja de herramientas ImageJ, seleccione la línea recta y dibuje una línea sobre un centímetro de la regla.

Haga clic en analizar, establecer escala y, en el cuadro de texto para la distancia conocida, introduzca el valor de un centímetro. Haga clic en la herramienta de selección de polígonos y dibuje las líneas poligonales sobre la solapa para calcular el área viable. Haga clic en analizar, medir para obtener el valor del área.

Luego, coloca un apósito postoperatorio en el animal antes de la vivienda para evitar la automutilación. Siete días después de la cirugía, fotografíe el área quirúrgica para permitir mediciones macroscópicas de las áreas de supervivencia y necrosis del colgajo. Utilizando la técnica de análisis de contraste de motas láser descrita anteriormente, visualice y cuantifique las diferencias de perfusión para evaluar la microcirculación de la solapa.

Después del análisis macroscópico, retire las suturas 4-0, levante el colgajo y utilice ultrasonido de tiempo de tránsito para reevaluar el flujo sanguíneo del pediculo vascular. Realice el muestreo de tejido dividiendo longitudinalmente la solapa en dos partes que miden 1,5 centímetros por seis centímetros. Inmediatamente después de la creación de las anastomosas microquirúrgicas, obtuvimos valores de flujo sanguíneo más altos que los flujos mínimos recomendados en la literatura.

Por lo tanto, todas las anastomosas microquirúrgicas fueron patentes una semana después de la cirugía. La observación de la depravación microcirculatoria del flujo sanguíneo durante el insulto isquémico fue posible con la técnica de análisis de contraste de manchas láser. Esto incluye la hiperperfusión inmediata durante la reperfusión del colgajo y perioperatoriamente, las diferentes áreas con menos perfusión tenían un mayor riesgo de necrosis de colgajo postoperatorio que de hecho fueron necrotizadas siete días después del final del estudio.

El área de supervivencia del colgajo después de ocho horas de isquemia y su posterior reperfusión fue de alrededor del 40%Los resultados publicados anteriormente muestran diferencias estadísticamente significativas cuando este modelo se compara con colgajos donde no se infligió ningún insulto isquémico. Recuerde diseccionar el pediculo de la solapa sin tocarlo o agarrando la adventitia lo menos posible para evitar dañar la pared del vaso, así como realizar análisis microquirúrgicas adecuadas para evitar complicaciones debidas a la técnica quirúrgica. Intraoperatoriamente, la tecnología de ultrasonido de tiempo de tránsito nos permite cuantificar el flujo sanguíneo de las anastomosas microquirúrgicas y así predecir la perfusión de colgajos.

Después de la cirugía láser, el análisis de contraste de motas láser permite una semi-continuidad de mapeo de flujo en tiempo real dentro de flaps libres. Es una técnica prometedora, sin embargo se necesita más investigación. Este video ha descrito el protocolo de un modelo adecuado para evaluar los agentes terapéuticos para contrarrestar la lesión por isquemia-reperfusión en el campo de la microcirugía reconstructiva.