Cuantificación absoluta del metabolismo de síntesis de proteínas sin células por cromatografía líquida de fase inversa-espectrometría de masas

La síntesis de proteínas libres de células es una tecnología emergente en sistemas y biología sintética para la producción in vitro de proteínas. Los sistemas de síntesis de proteínas libres de células no tienen pared celular, por lo que tenemos acceso directo a metabolitos. En este protocolo, cuantificamos las mediciones absolutas de 40 metabolitos implicados en el metabolismo central del carbono y la energía, lo que nos permite caracterizar el metabolismo libre de células.

El protocolo se basa en la metástasis de los compuestos con anilina, lo que permite una mejor separación y una mayor resolución de espectrometría de masas. Además, utilizamos estándares internos con un isotópico que etiquetamos anilina, para la cuantificación absoluta de los metabolitos. Los metabolitos etiquetados coelute, que elimina los efectos de la supresión del hierro.