Detección de especies totales reactivas de oxígeno en células adherentes por 2',7'-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate Staining

Este método se puede utilizar para analizar especies celulares reactivas de oxígeno en células adherentes con solo un microscopio de fluorescencia, y cuantificar la intensidad reactiva de las especies de oxígeno con lector de placas de fluorescencia. Este protocolo es simple, eficiente y rentable. Comience por sembrar dos veces 10 a la quinta células de cáncer colorrectal HCT116 en DMEM en cada pozo de una placa de 24 pozos.

Incubar las células durante la noche a 37 grados centígrados. Al día siguiente, sustituya el medio de cultivo por 100 sulfatos ferrosos micromolares, o 10 medios micromolares que contengan doxorubicina, e incubar la placa durante otras 24 horas. Prepare la solución DCFH-DA disolviendo 4,85 miligramos de DCFH-DA en un mililitro de DMSO para hacer una solución de stock de 10 milimolar.