9 de julio de 2020
Aquí, presentamos un protocolo para administrar de forma segura y eficaz gas anestésico a ratones utilizando un sistema digital de anestesia de bajo flujo con ventilador integrado y módulos de monitoreo fisiológico.
Este protocolo destaca los mejores usos para una suite de anestesia y monitoreo fisiológico con todo incluido que incluye un vaporizador electrónico de bajo flujo, un ventilador integrado, un oxímetro de pulso y una almohadilla térmica de infrarrojo lejano. Esta metodología es útil para cualquier instalación con espacio limitado en la mesa de trabajo o en el laboratorio. Un sistema todo en uno también elimina la necesidad de tanques de gas comprimido y equipos de monitoreo fisiológico separados.
Luke Schepers, estudiante de doctorado en Ingeniería Biomédica de la Universidad de Purdue, demostrará el procedimiento. Para configurar el vaporizador de bajo flujo, seleccione una fuente de gas portador y retire la tapa roja del puerto de entrada en la parte posterior del sistema para permitir que el sistema tome aire de la habitación. Si usa una fuente de gas comprimido, use un regulador de presión y un reductor de presión ajustados a 15 libras por pulgada cuadrada.
Y conecte el dispositivo al puerto de gas del compresor en la parte posterior del sistema. Conecte el recipiente de carbón al puerto de escape. Y conecte el conector de accesorios a los puertos inspiratorio y espiratorio en la parte frontal del sistema.
Conecte la cámara de inducción a las ramas con pinzas azules y el cono de la nariz a las ramas con pinzas blancas. Para configurar el ventilador integrado, conecte el tubo del conector de intubación a las ramas con las pinzas amarillas. Para calibrar el espacio muerto del ventilador en la pantalla de funcionamiento de ventilación, toque Configuración y calibración y pruebas, luego seleccione Medir espacio muerto y presione Dial B.To configurar el oxímetro de pulso integrado, conecte el sensor del puerto de estadísticas del mouse en la parte posterior del sistema.
Para configurar la almohadilla calefactora de infrarrojo lejano, conecte la almohadilla calefactora al puerto de alimentación de la almohadilla en la parte frontal del sistema. Luego conecte un sensor al puerto del sensor del cuerpo y el otro al puerto del sensor de la almohadilla y asegure el sensor de la almohadilla a la almohadilla térmica. Para configurar los ajustes del sistema para la administración de anestesia en la pantalla Anest Run, toque Configuración y seleccione el agente anestésico.
Toque, escriba anest y gire el dial B para seleccionar isoflurano o sevoflurano. Para establecer este tamaño de jeringa, toque Tamaño de la jeringa y gire el dial B para seleccionar un tamaño. Toque Atrás para volver a la pantalla Anest Run y use el adaptador de la tapa del frasco para llenar la jeringa con anestésico.
Conecte la jeringa al sistema de anestesia y toque Quitar para mover el bloque de empuje hacia atrás según sea necesario. Para cebar la jeringa, mantenga presionado el cebador para mover el bloque de empuje hacia adelante hasta que el bloque toque la parte superior del émbolo de la jeringa. Para configurar la ventilación mecánica, abra la pestaña Pantalla de ejecución de ventilación y presione Configuración.
Presione Peso corporal e ingrese el peso del animal. A continuación, pulse Prioridad para seleccionar el volumen o la ventilación controlada por presión. La frecuencia respiratoria y los volúmenes corrientes adecuados se ajustarán automáticamente.
Para configurar los parámetros de oximetría de pulso, abra la pestaña de la pantalla Oxy run y presione Configuración. presione FC mínima y gire el dial B para establecer la lectura de frecuencia cardíaca mínima permitida. Para establecer los parámetros de calentamiento en la pantalla de funcionamiento en caliente, presione Configuración y seleccione un método de calentamiento y un ajuste de temperatura objetivo.
Para anestesiar el ratón desde la pantalla Anest Run, toque Inducción para iniciar el flujo de aire. El caudal de inducción predeterminado es de 500 mililitros por minuto. Gire el dial A para ajustar el caudal según sea necesario.
Coloque el mouse en la cámara de inducción y cierre bien la tapa. Ajuste el dial de concentración de agente anestésico al 3% para isoflurano. El caudal de inducción predeterminado es de 500 mililitros por minuto.
Gire el dial A para ajustar el caudal según sea necesario. Presione Entregar para comenzar la administración de anestésicos. Una vez que el animal esté suficientemente anestesiado, toque de nuevo la inducción, luego enjuague la cámara para reducir el gas anestésico residual en la cámara.
Abra los clips que conducen al cono de la nariz y cierre los clips que conducen a la cámara. Toque el cono de la nariz para comenzar el flujo de aire e inmediatamente coloque el cono de la nariz en el animal. Centre al animal en la almohadilla de calentamiento infrarrojo y luego inserte el sensor del animal como una sonda rectal para controlar la temperatura corporal.
Para iniciar la ventilación mecánica, coloque al animal anestesiado en la etapa de intubación y utilice un hilo fijado a la etapa de intubación vertical para suspender al animal de sus incisivos superiores. Muestra suavemente la lengua del animal hacia un lado y utiliza las luces proporcionadas en el kit de innovación para visualizar la tráquea. Inserte con cuidado el tubo endotraqueal.
La colocación correcta se puede verificar conectando una pequeña cámara de aire al tubo y verificando la inflación pulmonar. Toque Detener el cono de nariz para detener el flujo de aire, cierre los clips al cono de nariz y abra los clips al tubo de ventilación. Conecte el tubo endotraqueal al tubo de ventilación y toque Iniciar ventilador para comenzar la ventilación.
Para comenzar el monitoreo fisiológico, sujete ligeramente el sensor a una pata trasera del animal, el oxímetro de pulso comenzará a leer automáticamente la frecuencia cardíaca y la saturación de oxígeno en sangre. Toque la pestaña de la pantalla Oxy run para ver los datos de oximetría de pulso. La frecuencia cardíaca y la saturación de oxígeno en sangre se pueden controlar durante el mantenimiento a través de la simetría de salida de pulso.
En este análisis representativo, la frecuencia cardíaca y la saturación de oxígeno en sangre del animal se mantuvieron estables y se observaron pocos cambios significativos en cualquiera de las mediciones para todos los grupos. Y con la saturación de oxígeno en sangre manteniéndose entre el 82 y el 99%, esta técnica permite a los investigadores administrar anestesia con caudales más bajos y sin necesidad de gas comprimido. Los caudales más bajos conducen a un menor desperdicio de gas y menos exposición para el personal de investigación.
Este protocolo describe un método para la administración segura y eficaz de gas anestésico a ratones utilizando un sistema digital de anestesia de bajo flujo. El sistema integra un ventilador y módulos de monitoreo fisiológico, lo que lo hace adecuado para instalaciones con espacio limitado.
En la investigación preclínica, los sistemas de administración de anestesia deben equilibrar el bienestar animal, la integridad de los datos y la eficiencia operativa, especialmente en entornos con limitaciones de espacio. Este sistema integrado de bajo flujo facilita la desactivación mecanicista al permitir un monitoreo fisiológico estable durante la evaluación de compuestos, reduciendo la variabilidad provocada por artefactos anestésicos. Su diseño todo en uno mejora la continuidad del flujo de trabajo y la utilización de recursos en las etapas iniciales de descubrimiento, donde la sedación reproducible es fundamental para la validación de dianas y el cribado fenotípico.
El sistema se integra en el continuo de descubrimiento desde la prueba de hipótesis hasta la optimización del fármaco líder, donde se requiere una anestesia constante para imágenes, electrofisiología o intervenciones quirúrgicas.