Name: Un método mínimamente invasivo para la instilación intratraqueal de medicamentos en roedores neonatales para tratar la enfermedad pulmonar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 21 s
Description: Aprende un método mínimamente invasivo para instilar fármacos intratraquealmente en roedores neonatales mediante visualización directa. Esta técnica reduce el dolor y la hemorragia, mejorando la supervivencia en estudios de enfermedades pulmonares.

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Este trabajo fue apoyado en parte por R01HD090887-01A1 del NICHD a AH. Los autores también reconocen las instalaciones proporcionadas por el laboratorio del Dr. Peter Mc Farlane, como el sistema de anestesia / almohadilla térmica por inhalación. Se agradece la valiosa asistencia de la Sra. Catherine Mayer en la creación del sistema. El organismo financiador no desempeñó ningún papel en el diseño del estudio, la recopilación, el análisis y la interpretación de los datos ni en la redacción del manuscrito.

Todos los experimentos fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (protocolo # 2020-0035) en la Universidad Case Western Reserve. Todos los animales fueron tratados de acuerdo con las directrices de los NIH para el cuidado y uso de animales de laboratorio.
1. Animales
<ol><li>Obtener comercialmente ratas Sprague Dawley preñadas.</li>
	<li>Mantener a los animales en una instalación veterinaria aprobada con un ciclo de luz-oscuridad de 14 h / 10 h y 45-60% de humedad relativa.</li>
</ol>2. Preparación del compuesto de prueba
<ol><li>Utilice el colorante azul Evans como compuesto de prueba para evaluar la eficacia del procedimiento de instilación intratraqueal.</li>
	<li>Preparar una solución al 0,25% (p/v) del colorante en solución salina tamponada con fosfato (pH 7,2) y esterilizar con filtro con un filtro de jeringa de 0,45 μm.</li>
</ol>3. Administración de anestesia
<ol><li>Anestesiar a las crías de rata utilizando anestesia gaseosa (3% de isoflurano en oxígeno al 100%), utilizando un sistema de administración modificado adaptado para neonatos de ratas pequeñas.</li>
	<li>Verifique la pérdida de los reflejos de la cola y el pedal y la respiración superficial para garantizar la profundidad adecuada de la anestesia para llevar a cabo el procedimiento.</li>
</ol>4. Instilación intratraqueal (ITI)
<ol><li>Use cachorros de rata en el día 5 postnatal (PN 5) para la ITI. El peso promedio de un cachorro de rata PN 5 es de 12 gramos.</li>
	<li>Sujete al cachorro de rata anestesiado en una plataforma plana inclinada con cinta de etiquetado de laboratorio. El cachorro está sujeto en un ángulo de aproximadamente 45 ° en la posición supina.</li>
	<li>Abra la boca del neonato y tire suavemente de la lengua hacia un lado con una pinza roma.</li>
	<li>Utilice un pequeño espéculo de otoscopio de 2 mm de diámetro conectado al otoscopio para sujetar la lengua suavemente y para una visualización adecuada de la laringe.</li>
	<li>Utilice el sistema iluminador de garganta, es decir, el otoscopio de funcionamiento y la lente de aumento para una visualización adecuada de las cuerdas vocales (Figura 1).</li>
	<li>Coloque a los animales en un ángulo de 45° en un plano inclinado. Se utilizan las tapas de barra con cable de las jaulas de ratón (Figura 2). NOTA: Posicionar al animal en un ángulo de 45° proporciona una mejor visualización de la abertura traqueal sin la interferencia de la epiglotis.</li>
	<li>Tome una punta de pipeta de ángulo largo que se utiliza para cargar geles de western blot. Corte la base de la punta de la pipeta con una cuchilla quirúrgica para que quepa bien en la punta de la jeringa de 1 cc.</li>
	<li>Use la jeringa estéril de 1 ml colocada en una punta de pipeta de ángulo largo para administrar 30-50 μL de la sustancia en el pulmón. Invierta la jeringa y aspire casi 0,9 cc de aire en la jeringa de 1 ml conectada a la punta de la pipeta seguida del tinte o la sustancia que se va a administrar. Esto permite que el aire detrás del tinte se empuje hacia la tráquea después de que se administre el tinte como se muestra en la Figura 3. La administración intratraqueal se logra visualizando la luz laríngea (cuerdas vocales) e insertando la punta de la pipeta ajustada a una jeringa en la luz traqueal.</li>
	<li>Use el espéculo del otoscopio para sostener la lengua y exponer las cuerdas vocales. El espéculo cumple el papel de la hoja de un laringoscopio. Doble la punta de la pipeta a un ángulo de 30° para facilitar la introducción del agente a través del espéculo en forma de cono en la abertura traqueal.</li>
	<li>Introduzca la punta de la pipeta en la abertura traqueal hasta el punto de aproximadamente 2 mm más allá de las cuerdas vocales. Empuje el pistón de la jeringa para administrar el tinte o el fármaco a través del espéculo del otoscopio operativo como se muestra en la Figura 3. La introducción de aire en el pulmón poco después de la administración del agente evita que la sustancia regrese a la cavidad laríngea.</li>
	<li>Después de administrar al cachorro con el tinte o solución salina normal, coloque a los cachorros en una almohadilla térmica de líquido circulante integrada (38 ° C) hasta que sus movimientos respiratorios sean regulares. Después de la recuperación completa de la anestesia, reúna a los cachorros con la presa.</li>
</ol>5. Caracterización de la entrega de ITI
<ol><li>Después de itI, sacrificar a las crías de rata administrando anestesia excesiva (ketamina 100 mg / kg y xilazina 10 mg / kg) / tiopentona seguida de exanguinación en un momento apropiado después de la administración. La eutanasia se realizó como parte del experimento para recolectar tejido pulmonar para demostrar la eficacia.</li>
	<li>Asegure al cachorro de rata sacrificado en una tabla de disección y limpie el pecho y el abdomen con alcohol etílico al 70%.</li>
	<li>Para evaluar la distribución del tinte en todo el pulmón, retire los pulmones del animal mediante la técnica estéril y muestre los pulmones según corresponda para la obtención de imágenes (Figura 4A, B).</li>
</ol>

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 <a target="_blank" href="https://www.mayo.edu/research/labs/pulmonary-cell-biology/projects/neonatal=lung-disease">https://www.mayo.edu/research/labs/pulmonary-cell-biology/projects/neonatal=lung-disease</a> (2020).</li>
<li>Martínez-Burnes, J., López, A., Lemke, K., Dobbin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transoral+intratracheal+inoculation+method+for+use+with+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transoral intratracheal inoculation method for use with neonatal rats.</a> Comparative Medicine. 51 (2), 134-137 (2001).</li>
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<li>Nardiello, C., Mižíková, I., Morty, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+ahead%3A+where+to+next+for+animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Looking ahead: where to next for animal models of bronchopulmonary dysplasia.</a> Cell and Tissue Research. 367 (3), 457-468 (2017).</li>
<li>Sugimoto, M., Ando, M., Senba, H., Tokuomi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+defenses+in+neonates%3A+Effects+of+bronchial+lavage+fluids+from+adult+and+neonatal+rabbits+on+superoxide+production+by+their+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Reticuloendothelial+Society%22%5BJournal%5D)">Lung defenses in neonates: Effects of bronchial lavage fluids from adult and neonatal rabbits on superoxide production by their alveolar macrophages.</a> Journal of the Reticuloendothelial Society. 27 (6), 595-606 (1980).</li>
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<li>Moreira, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+human+umbilical+cord+Wharton%27s+jelly+mesenchymal+stromal+cells+restores+lung+alveolarization+and+vascularization+in+experimental+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of human umbilical cord Wharton's jelly mesenchymal stromal cells restores lung alveolarization and vascularization in experimental bronchopulmonary dysplasia.</a> Stem Cells Translational Medicine. 9 (2), 221-234 (2020).</li>
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<li>Linderholm, A. L., Franzi, L. M., Bein, K. J., Pinkerton, K. E., Last, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+comparison+of+intranasal+and+intratracheal+administration+of+coarse+PM+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Pharmacology%2C+Toxicology+and+Genotoxicology%22%5BJournal%5D)">A quantitative comparison of intranasal and intratracheal administration of coarse PM in the mouse.</a> Integrative Pharmacology, Toxicology and Genotoxicology. 1 (1), 5-10 (2015).</li>
<li>Guerra, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+a+naked+plasmid+expressing+stromal+derived+factor-1+improves+lung+structure+in+rodents+with+experimental+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of a naked plasmid expressing stromal derived factor-1 improves lung structure in rodents with experimental bronchopulmonary dysplasia.</a> Respiratory Research. 20 (1), 255(2019).</li>
<li>Thomas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+particle+size+on+the+pathology+and+efficacy+of+vaccination+in+a+murine+model+of+inhalational+anthrax%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Influence of particle size on the pathology and efficacy of vaccination in a murine model of inhalational anthrax.</a> Journal of Medical Microbiology. 59, Pt 12 1415-1427 (2010).</li>
<li>Sakurai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combination+of+the+aerosolized+PPAR-%CE%B3+agonist+pioglitazone+and+a+synthetic+surfactant+protein+B+peptide+mimic+prevents+hyperoxia-induced+neonatal+lung+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neonatology%22%5BJournal%5D)">A combination of the aerosolized PPAR-γ agonist pioglitazone and a synthetic surfactant protein B peptide mimic prevents hyperoxia-induced neonatal lung injury in rats.</a> Neonatology. 113 (4), 296-304 (2018).</li>
<li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e2702(2011).</li>
<li>Brain, J. D., Knudson, D. E., Sorokin, S. P., Davis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+distribution+of+particles+given+by+intratracheal+instillation+or+by+aerosol+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research%22%5BJournal%5D)">Pulmonary distribution of particles given by intratracheal instillation or by aerosol inhalation.</a> Environmental Research. 11 (1), 13-33 (1976).</li>
<li>Pritchard, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+dust+in+the+rat+lung+following+administration+by+inhalation+and+by+single+intratracheal+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research%22%5BJournal%5D)">The distribution of dust in the rat lung following administration by inhalation and by single intratracheal instillation.</a> Environmental Research. 36 (2), 268-297 (1985).</li>
<li>Ruzinski, J. T., Skerrett, S. J., Chi, E. Y., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deposition+of+particles+in+the+lungs+of+infant+and+adult+rats+after+direct+intratracheal+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Deposition of particles in the lungs of infant and adult rats after direct intratracheal administration.</a> Laboratory Animal Science. 45 (2), 205-210 (1995).</li>
<li>Sun, B., Curstedt, T., Song, G. W., Robertson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+improves+lung+function+and+morphology+in+newborn+rabbits+with+meconium+aspiration%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+the+Neonate%22%5BJournal%5D)">Surfactant improves lung function and morphology in newborn rabbits with meconium aspiration.</a> Biology of the Neonate. 63 (2), 96-104 (1993).</li>
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<li>Carlon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+mouse+lung+by+fetal+intratracheal+injection+of+rAAV2%2F6.2%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%3A+The+Journal+of+the+American+Society+of+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the mouse lung by fetal intratracheal injection of rAAV2/6.2.</a> Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18 (12), 2130-2138 (2010).</li>
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<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80 (3), 415-424 (2016).</li>
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<li>Mowat, V., Alexander, D. J., Pilling, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+rodent+and+nonrodent+laryngeal+and+tracheal+bifurcation+sensitivities+in+inhalation+toxicity+studies+and+their+relevance+for+human+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">A comparison of rodent and nonrodent laryngeal and tracheal bifurcation sensitivities in inhalation toxicity studies and their relevance for human exposure.</a> Toxicologic Pathology. 45 (1), 216-222 (2017).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La instilación intratraqueal es un método excelente que ofrece varias ventajas sobre los métodos existentes para las intervenciones de enfermedades respiratorias, así como el desarrollo de modelos de enfermedad. Es un método rápido y con experiencia, se puede realizar con una velocidad promedio de 2-3 minutos por animal. Las consideraciones clave para una intubación exitosa son la sedación adecuada del animal, su posicionamiento correcto, especialmente la cabeza, así como la profundidad precisa de colocación / tamaño de ...

Los recién nacidos prematuramente tienen pulmones poco desarrollados que requieren muchas terapias intervencionistas, como la ventilación a largo plazo. Estas intervenciones sitúan a los neonatos supervivientes en un alto riesgo de secuelas posteriores1. Los modelos animales experimentales sirven como una herramienta importante para simular diversas condiciones de enfermedad, estudiar la patobiología de las enfermedades y evaluar las intervenciones terapéuticas. A pesar de que una amplia gama de modelos animales, desde ratones, ratas y conejos hasta corderos y cerdos prematuros están disponibles, los ratones y las ratas son los más utilizados. 
La principal ventaja de usar ratones y ratas es el período de gestación relativamente corto y el costo reducido. También están fácilmente disponibles, son fáciles de mantener en entornos libres de enfermedades, genéticamente homogéneos y tienen una preocupación relativamente menos ética 2,3. Otra ventaja importante del modelo de roedor es que al nacer el cachorro neonatal se encuentra en la etapa canalicular tardía / saccular temprana del desarrollo pulmonar, que es morfológicamente equivalente al pulmón de un bebé humano neonatal prematuro de 24 semanas que desarrolla displasia broncopulmonar4. Además, a medida que su desarrollo pulmonar progresa rápidamente hasta su finalización dentro de las primeras 4 semanas de vida, es factible estudiar la maduración pulmonar postnatal en un marco de tiempo razonable4. A pesar de estas ventajas, el pequeño tamaño de los ratones y las crías de rata es una fuente de preocupación para varias intervenciones, lo que obliga a la mayoría de los investigadores a usar animales adultos en lugar de cachorros5. Los pulmones neonatales se encuentran en una etapa de desarrollo y la respuesta de un neonato a un agente incitador difiere de la de un adulto. Esto hace que sea apropiado utilizar modelos animales neonatales para estudiar las condiciones de la enfermedad neonatal humana.
Existen diferentes métodos para administrar medicamentos / agentes biológicos al pulmón. Esto incluye la instilación intranasal 6,7 o intratraqueal 8,9,10, así como la inhalación deaerosoles 11,12. Cada enfoque tiene sus propios desafíos técnicos, ventajas y limitaciones13. Se prefiere la vía intratraqueal de administración de agentes terapéuticos para estudiar el impacto terapéutico directo en el órgano evitando los efectos sistémicos. Esta vía también podría utilizarse para estudiar la patología pulmonar causada por agentes incitadores. Existen técnicas invasivas y mínimamente invasivas para hacer esto y es fácil de realizar en adultos. Sin embargo, en los cachorros, debido al pequeño tamaño del animal, existen desafíos técnicos asociados con el proceso de intubación. El presente estudio presenta un método de instilación intratraqueal (ITI) simple, consistente y no quirúrgico en crías de rata que podría usarse para estudiar la eficacia de diversas intervenciones terapéuticas neonatales, así como para generar modelos animales que simulan enfermedades respiratorias neonatales.

<table><tbody><tr><td>Evans Blue dye</td><td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA</td><td>314-13-6</td><td>Confirmación de la administración de fármaco en los pulmones</td></tr><tr><td>Clorhidrato de ketamina</td><td>Hospira. Inc, Lake Forest, IL, EE. UU.</td><td>Dispensado de un centro de cuidado de animales</td><td>Para sedación</td></tr><tr><td>Otoscopio</td> quirúrgico <td>Welch Allyn, Hillrom, Chicago, IL, EE. UU</td><td>. 21770- 3.5V</td><td>Para la visualización de las cuerdas vocales</td></tr><tr><td>Otoscopio Mango recargable</td><td>Welch Allyn, Hillrom, Chicago, IL, EE. UU.</td><td>71050-C</td><td></td></tr><tr><td>Punta de pipeta (carga de gel)</td><td>Fisherbrand</td><td>02-707-139</td><td>Administración del medicamento</td></tr><tr><td>Plataforma para la sujeción (plano inclinado)</td><td>Centro</td><td>de cuidado de animales Dispensado desde Centro de cuidado de animales</td> Se <td>puede utilizar el techo alambrado de la jaula de ratones</td></tr><tr><td>3M Micropore Surgical White Paper (cinta adhesiva)</td><td>3M, St. Paul, MN, USA</td><td>1530-2</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lock SyringeJeringas (1 ml)</td><td>BD Franklin Lakes, NJ , USA</td><td>NBD2515</td><td>Administración del medicamento</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Hospira. Inc, Lake Forest, Illinois, EE. UU</td><td></td><td>. Para sedación</td></tr></tbody></table>

un método mínimamente invasivo para la instilación intratraqueal de medicamentos en roedores neonatales para tratar la enfermedad pulmonar

A Minimally Invasive Method for Intratracheal Instillation of Drugs in Neonatal Rodents to Treat Lung Disease

El tratamiento de roedores neonatales con medicamentos inculcados directamente en la tráquea podría servir como una herramienta valiosa para estudiar el impacto de un medicamento administrado localmente. Esto tiene un impacto traslacional directo porque el surfactante y los medicamentos se administran localmente en los pulmones. Aunque la literatura tiene muchas publicaciones que describen la intubación transoral mínimamente invasiva de ratones y ratas adultos en experimentos terapéuticos, falta este enfoque en cachorros de ratas neonatales. El pequeño tamaño de la región orotraqueal / faringe en los cachorros dificulta la visualización de la luz laríngea (cuerdas vocales), lo que contribuye a la tasa de éxito variable de la administración intratraqueal de fármacos. Por la presente, demostramos la intubación oral efectiva de cachorro de rata neonatal, una técnica que no es traumática y mínimamente invasiva, por lo que se puede utilizar para la administración en serie de medicamentos. Utilizamos un otoscopio operativo con un sistema de iluminación y una lente de aumento para visualizar la abertura traqueal de los recién nacidos de rata. Luego, el medicamento se instila con una jeringa de 1 ml conectada a una punta de pipeta. La precisión del método de administración se demostró mediante la administración de tinte azul Evans. Este método es fácil de entrenar y podría servir como una forma efectiva de inculcar medicamentos en la tráquea. Este método también podría usarse para la administración de inóculo o agentes para simular condiciones de enfermedad en animales y, también, para estrategias de tratamiento basadas en células para diversas enfermedades pulmonares.

La instilación del azul de Evans reveló la distribución multifocal del colorante que involucra todos los lóbulos pulmonares (Figura 4A, B). Nuestro resultado, como se muestra en la Figura 4 , demuestra la eficacia de la distribución a todos los lóbulos. La imagen se toma inmediatamente después de itI del tinte en la tráquea. Se logró una eficacia del 100% en la inculcación del tinte en la tráquea seguida de su propagación en todos los lóbulos de...

Esta técnica de inculcar medicamentos directamente en la tráquea de roedores neonatales es importante para estudiar el impacto de los medicamentos o biológicos administrados localmente en las enfermedades pulmonares neonatales. Además, este método también se puede utilizar para inducir lesiones pulmonares en modelos animales.

Un método mínimamente invasivo para la instilación intratraqueal de medicamentos en roedores neonatales para tratar la enfermedad pulmonar

Treatment of neonatal rodent with drugs instilled directly into the trachea could serve as a valuable tool to study the impact of a locally administered ...

Este protocolo demuestra que es posible inculcar material de investigación en la tráquea de crías de ratas neonatales, de cinco días de edad, mediante visualización directa. Este método mejora la fiabilidad de la administración de material de investigación o fármaco en la tráquea mediante visualización directa. Al evitar la inyección en la tráquea, este método reduce el dolor y, lo que es más importante, el sangrado en la tráquea, lo que permite una mejor supervivencia.Se requiere el desarrollo de habilidades finas para realizar este protocolo, incluido el posicionamiento apropiado del animal, el uso correcto del autoscopio operativo para visualizar las cuerdas vocales y la eficacia de la administración en los pulmones. Demostrando el procedimiento estarán Tara Sudhadevi, becaria postdoctoral de mi laboratorio, y Alison Ha, una estudiante graduada. Antes de comenzar el experimento, confirme una pérdida del reflejo de la cola y el pedal en un cachorro de rata anestesiado de cinco días de edad y use cinta de etiquetado de laboratorio para sujetar al cachorro en posición supina en una plataforma plana inclinada a 45 grados.Use fórceps contundentes para tirar suavemente de la lengua hacia un lado, y con la ayuda de un espéculo de otoscopio de dos milímetros de diámetro, sostenga suavemente la lengua en su lugar para que la laringe sea visible. Usando el otoscopio de operación con el espéculo del tamaño correcto, ubique las cuerdas vocales a través de la lente de aumento del otoscopio. Para la instilación intratraqueal, cargue una jeringa de un mililitro equipada con una punta de pipeta de carga en gel de ángulo largo con 0,9 centímetros cúbicos de aire, seguida de 30 a 50 microlitros de la sustancia de interés.Doble la punta de la pipeta a un ángulo de 30 grados e inserte la punta de la pipeta cargada a través del espéculo a unos dos milímetros más allá de las cuerdas vocales. Empuje el pistón de la jeringa para administrar la sustancia de interés y el aire a través del espéculo hacia las cuerdas vocales. Cuando se haya entregado toda la sustancia, coloque al cachorro en una almohadilla térmica de fluido circulante integrada de 38 grados Celsius con monitoreo hasta la respiración regular, antes de reunir al cachorro con la presa.Para evaluar la distribución de la sustancia dentro de una muestra de tejido pulmonar, limpie el pecho y el abdomen de las crías de rata sacrificadas con alcohol etílico al 70% y use una técnica estéril para extirpar los pulmones de acuerdo con los protocolos estándar para su evaluación visual. En este estudio, la eficacia de la técnica de instilación intratraqueal se evaluó mediante el examen visual del tejido pulmonar recogido de un cachorro de rata de cinco días de edad inculcado con tinte azul Evans. La instilación fue casi 100% eficiente, ya que el tinte se extendió al pulmón inmediatamente después de la administración y se distribuyó a través de todos los lóbulos del tejido pulmonar.El tinte no se observó dentro de ningún tejido fuera de los pulmones, lo que confirma la capacidad de la técnica para ser utilizada para la entrega selectiva de una terapéutica de interés para los pulmones. Colocar al animal inicialmente en el ángulo correcto sobre una superficie firme es esencial para el éxito del siguiente paso de visualizar las cuerdas vocales utilizando el autoscopio operativo.

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Medicine

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Intratraqueal instilaciones solutos entregar directamente a los pulmones. Este procedimiento objetivos de la entrega de los instilado en las regiones distales de los pulmones, y por lo tanto incorpora a menudo en los estudios dirigidos a estudiar los alvéolos. Ofrecemos un protocolo detallado para la supervivencia de realizar instilaciones intratraqueal en ratones.

La instilación directa traqueal de solutos en pulmón de ratón

Hemos desarrollado un enfoque quirúrgico novedoso para la administración intratraqueal de agentes bioactivos en el feto de ratón. La ruta de entrega es más eficiente en la orientación de los pulmones fetales de ratón que el comúnmente utilizado intraamniótica inyección. Este procedimiento hasta la fecha no se ha descrito en un modelo de ratón.

Un nuevo enfoque quirúrgico para la administración intratraqueal de agentes bioactivos en un modelo de ratón fetal

Este video demuestra el establecimiento de una infección pulmonar en un modelo de roedor inmunocompetente a través de la intubación y la instalación de suspensiones bacterianas en los lóbulos pulmonares. Este modelo permite realizar estudios de eficacia antibacteriana en animales inmunocompetentes.

Instilación intrabronquial de Streptococcus pneumoniae en modelos de roedores inmunocompetentes

El uso de un modelo que imita el estado de las enfermedades pulmonares en los seres humanos es crítico para el estudio de la fisiopatología y / o la etiología de una enfermedad en particular y para el desarrollo de la intervención terapéutica. Aquí un método intubación endotraqueal no invasivo que puede entregar directamente materiales exógenos a los pulmones del ratón se presenta.

No Invasiva Intratraqueal Intubación para Estudiar la Patología y Fisiología de pulmón de ratón

La instilación de reactivos intratraqueal mediada por intubación (IMIT) es un método excelente y no invasivo para estudiar las enfermedades respiratorias, así como un método para instilar reactivos terapéuticos directamente en el pulmón. Es un método rápido y altamente reproducible que es adecuado para pruebas preclínicas.

La intubación mediada intratraqueal (IMIT) instilación: A, Sistema de Entrega de pulmón-específica no invasiva

En este artículo se presenta un método rápido y sencillo para la administración de bleomicina directamente en la tráquea ratón a través de la intubación. Las principales ventajas de este método son que es altamente reproducible, fácil de dominar, y no requiere equipo especializado ni largos tiempos de recuperación.

Un método mejorado para la rápida intubación de la tráquea en ratones

El objetivo de este artículo es describir un método refinado de intubación del ratón de laboratorio. El método no es invasivo y, por lo tanto, ideal para estudios que requieren monitorización en serie de la función respiratoria y/o inscripción de tratamientos en el pulmón.

Intubación orotraqueal repetida en ratones

Se describe un protocolo para realizar el trasplante intratraqueal de células estromales mesenquimales (MSC) a través de la inyección intratraqueal en ratas neonatales. Esta técnica es una opción clínicamente viable para la administración de células madre y fármacos en pulmones de ratas neonatales para evaluar su eficacia.

Instilación intratraqueal de células madre en ratas neonatales a término

Este protocolo presenta cómo la posición óptima de un ratón y la inserción de un otoscopio basado en una cámara por vía transoral permite la visualización de la glotis, una intubación rápida con un traumatismo tisular mínimo y un suministro constante de líquido a los pulmones.

Metodología mejorada para la administración de líquido al pulmón de ratón: intubación mediante un otoscopio de consumo

En este estudio, se ha demostrado que una técnica no invasiva de instillación endotraqueal desarrolla AL en ratas utilizando un laringoscopio básico para asegurar una entrega precisa de LPS a los pulmones. El LPS se administra mediante un tubo endotraqueal mediante un laringoscopio. La magnitud de la lesión pulmonar se evalúa en varios momentos.

Administración endotraqueal no invasiva de lipopolisacáridos para inducir daño pulmonar agudo en roedores

Aprende un método mínimamente invasivo para instilar fármacos intratraquealmente en roedores neonatales mediante visualización directa. Esta técnica reduce el dolor y la hemorragia, mejorando la supervivencia en estudios de enfermedades pulmonares.

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Un método mínimamente invasivo para la instilación intratraqueal de medicamentos en roedores neonatales para tratar la enfermedad pulmonar

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