Name: Un método de seccionamiento simple y seco para obtener la sección de resina de tamaño de semilla completa y sus aplicaciones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Aprenda un método simple de seccionamiento en seco para obtener secciones de resina de tamaño de semilla completa usando LR White. Esta técnica permite visualizar células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en granos de maíz maduros.

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La financiación fue proporcionada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (32071927), el Proyecto de Talento de la Universidad de Yangzhou y el Desarrollo del Programa Académico Prioritario de las Instituciones de Educación Superior de Jiangsu.

1. Preparación de semillas incrustadas en resina (Figura 1)
<ol><li>Fijar seis granos maduros de maíz en 10 ml de glutaraldehído con fosfato del 2,5% (0,1 M, pH7,2) a 4 oC durante 48 h. Los investigadores pueden elegir otras mezclas fijativas, concentraciones fijativas, y condiciones de fijación de acuerdo con sus objetivos de investigación y tipos de tejido.</li>
	<li>Saque los granos y los corte longitudinal o transversalmente a 2-3 mm de espesor utilizando una hoja afilada de doble cara, y fijelos en 10 ml de glutaraldehído con búfer de fosfato (0,1 M, pH 7,2) de nuevo durante 48 h.</li>
	<li>Lave las muestras tres veces con 10 ml de tampón de fosfato de 0,1 M (pH 7.2) durante 30 minutos cada vez.</li>
	<li>Deshidratar las muestras en grados crecientes de solución acuosa de etanol (10 ml) del 30% al 50%, 70%, 90% una vez y 100% tres veces durante 30 minutos cada vez.</li>
	<li>Infiltrar las muestras en grados de aumento de 10 ml de solución de resina LR White diluidas con etanol del 25% al 50%, 75% una vez y 100% dos veces a 4oC durante 12 horas cada vez.</li>
	<li>Prepare los pedestales para las muestras antes de incrustarlos. Añadir 0,25 ml de resina blanca 100% LR en un tubo centrífugo de 2 ml, y polimerizarlo a 60 oC durante 48 h.</li>
	<li>Añadir sucesivamente la resina blanca LR pura (0,5 ml) y la muestra infiltrada en el tubo de centrífuga con un pedestal. Enderezar las muestras con la aguja anatómica y polimerizarlas a 60oC en un horno durante 48 h.</li>
</ol>2. Seccionamiento seco para la preparación de la sección de tamaño de semilla entera (Figura 1)
<ol><li>Saque los granos incrustados del tubo de centrífuga y corte el exceso de resina alrededor de la muestra utilizando una cuchilla afilada.</li>
	<li>Sujete el bloque de resina en el soporte de muestra de ultramicrotoma (EM UC7), y recorte la resina superflua en la superficie de la muestra y alrededor de la muestra con una hoja.</li>
	<li>Pulir la superficie de la muestra finamente con un cuchillo de vidrio hasta que se pueda formar una sección completa.</li>
	<li>Coloque un pequeño gancho de cobre alrededor de 2 mm por encima del borde de la hoja antes de cortar y corte la muestra en una sección de 2 m. El papel del gancho es evitar el rizado hacia arriba de la sección.</li>
	<li>Coloque el gancho debajo de la sección para apoyarlo cuando la sección sea larga.</li>
	<li>Agregue 100 l de agua en un portaobjetos sin receta, y transfiera cuidadosamente la sección completa e ininterrumpida al agua con las pinzas.</li>
	<li>Con el fin de suavizar la sección arrugada, calentar y secar la muestra sobre la mesa aplanada a 50 oC durante la noche.<ol>
<li>Si la sección se desmorona o se desgarra, extienda el tiempo para cada infiltración de resina de la muestra de 12 h a 24 h o 48 h.</li>
		<li>Si la sección tiene algunas líneas paralelas al cuchillo, sujete firmemente el bloque de muestra. Si la sección tiene algunas líneas verticales al cuchillo, por favor use un cuchillo nuevo.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Tinción y observación de la sección
NOTA: Para observar la estructura tisular y morfología de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos, manche las secciones con manchas específicas según el propósito de la investigación. Aquí, utilizamos el iluminador fluorescente 28, solución de yodo, y Coomassie azul brillante R250 para manchar las paredes celulares, gránulos de almidón y cuerpos proteicos, respectivamente.
<ol><li>Para observar la morfología de las células, manchar la sección con 40 ml de 0,1% (p/v) de aclarador fluorescente 28 solución acuosa en un frasco de tinción de vidrio compacto de 70 ml a 45 oC durante 10 min, y luego enjuáguelo con agua corriente durante 5 min. Observe y fotografíe la sección bajo un microscopio de fluorescencia equipado con una cámara CCD.</li>
	<li>Para observar la morfología de los gránulos de almidón, manche la sección con 40 l de solución de yodo (0,07% (p/v) I2 y 0,14% (p/v) KI en 25% (v/v) glicerol) durante 1 min, y cubra la muestra que contiene solución de yodo con un cubreobjetos. Visuale y fotografíe la muestra bajo un microscopio de luz equipado con una cámara CCD.</li>
	<li>Para observar la morfología de los cuerpos proteicos, sumerja la sección con 40 ml de ácido acético al 10% (v/v) en un frasco de tinción de vidrio compacto de 70 ml durante 10 min a 45oC, y luego mancharlo en 40 mL de 1% (p/v) Coomassie brillante azul R250 en 25% (v/v) isopropanol y 10% (v/v) ácido acético durante 15 min a 45 oC. Lavar las secciones manchadas con agua corriente durante 5 min, y secar. Observe y fotografíe la sección bajo un microscopio de luz equipado con una cámara CCD.</li>
</ol>4. Análisis cuantitativo de los parámetros morfológicos
<ol><li>Procesar y analizar cuantitativamente las imágenes fotografiadas para el área, el eje largo/corto y la redondez de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones de semillas utilizando software de análisis de morfología (software Image-Pro Plus 6.0) siguiendo exactamente los procedimientos de Zhao et al.9.</li>
</ol>

<ol><li>Cai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+structure+and+spatial+distribution+in+endosperm+of+high-amylose+rice+starch+granules+with+different+morphologies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).</li>
<li>He, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+defective+effect+of+starch+branching+enzyme+IIb+from+weak+to+strong+induces+the+formation+of+biphasic+starch+granules+in+amylose-extender+maize+endosperm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The defective effect of starch branching enzyme IIb from weak to strong induces the formation of biphasic starch granules in amylose-extender maize endosperm.</a> Plant Molecular Biology. 103 (3), 355-371 (2020).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradually+decreasing+starch+branching+enzyme+expression+is+responsible+for+the+formation+of+heterogeneous+starch+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gradually decreasing starch branching enzyme expression is responsible for the formation of heterogeneous starch granules.</a> Plant Physiol. 176 (1), 582-595 (2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dek35+encodes+a+PPR+protein+that+affects+cis-splicing+of+mitochondrial+nad4+intron+1+and+seed+development+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">Dek35 encodes a PPR protein that affects cis-splicing of mitochondrial nad4 intron 1 and seed development in maize.</a> Molecular Plant. 10 (3), 427-441 (2017).</li>
<li>Hu, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+structure+characteristics+to+form+ultrahigh+oil+content+in+rapeseed%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Seed structure characteristics to form ultrahigh oil content in rapeseed.</a> PLoS One. 8 (4), 62099(2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maize+VKS1+regulates+mitosis+and+cytokinesis+during+early+endosperm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Maize VKS1 regulates mitosis and cytokinesis during early endosperm development.</a> Plant Cell. 31 (6), 1238-1256 (2019).</li>
<li>Xu, A., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+comparison+and+applications+of+different+sections+in+investigating+the+microstructure+and+histochemistry+of+cereal+kernels%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Comprehensive comparison and applications of different sections in investigating the microstructure and histochemistry of cereal kernels.</a> Plant Methods. 16, 8(2020).</li>
<li>Zhao, L., Pan, T., Cai, C., Wang, J., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+whole+sections+of+mature+cereal+seeds+to+visualize+the+morphology+of+endosperm+cell+and+starch+and+the+distribution+of+storage+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cereal+Science%22%5BJournal%5D)">Application of whole sections of mature cereal seeds to visualize the morphology of endosperm cell and starch and the distribution of storage protein.</a> Journal of Cereal Science. 71, 19-27 (2016).</li>
<li>Zhao, L., Cai, C., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+processing+method+for+investigating+the+morphology+of+cereal+endosperm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">An image processing method for investigating the morphology of cereal endosperm cells.</a> Biotech & Histochemistry. 95 (4), 249-261 (2020).</li>
<li>Borisjuk, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+architecture+shapes+embryo+metabolism+in+oilseed+rape%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Seed architecture shapes embryo metabolism in oilseed rape.</a> The Plant Cell. 25 (5), 1625-1640 (2013).</li>
<li>Lott, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+bodies+in+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Nordic+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Protein bodies in seeds.</a> Nordic Journal of Botany. 1, 421-432 (1981).</li>
<li>Jing, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+endosperm+cells+and+starch+granules+in+common+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22Cereal+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Development of endosperm cells and starch granules in common wheat.</a> Cereal Research Communications. 42 (3), 514-524 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Las semillas son el recurso renovable más importante para alimentos, forraje y materia prima industrial, y son ricas en materiales de almacenamiento como el almidón y las proteínas. La morfología y cantidad de células y el contenido y configuración de los materiales de almacenamiento afectan al peso y la calidad de las semillas7,12. Aunque la estareología y la tecnología de análisis de imágenes pueden medir el tamaño y la cantidad de células en una región de teji...

Las semillas vegetales contienen materiales de almacenamiento como almidón y proteínas y proporcionan energía y nutrición a las personas. La forma, el tamaño y la cantidad de los materiales celulares y de almacenamiento determinan el peso y la calidad de las semillas. Las células y materiales de almacenamiento en diferentes regiones de semillas tienen morfologías significativamente diferentes, especialmente para algunos cultivos de cereales de alta amilasa con inhibición de la enzima ramificada de almidón IIb1,2,3. Por lo tanto, es muy importante investigar las morfologías de las células y materiales de almacenamiento en diferentes regiones de semillas.
El seccionamiento de parafina es un buen método para preparar la sección de tamaño de semilla entera y puede exhibir la estructura tisular de la semilla y la acumulación de material de almacenamiento en diferentes regiones desemillas 4,5,6. Sin embargo, las secciones de parafina suelen tener un espesor de 6-8 m con baja resolución; por lo tanto, es muy difícil observar claramente y analizar cuantitativamente la morfología de los materiales celulares y de almacenamiento. Las secciones de resina suelen tener un espesor de 1-2 m y una alta resolución y son muy adecuadas para observar y analizar la morfología de los materiales celulares y de almacenamiento7. Sin embargo, el método de seccionamiento rutinario de resina tiene dificultades para preparar la sección de tamaño de semilla completa, especialmente para semillas con un gran volumen y alto contenido de almidón; por lo tanto, no hay manera de observar y analizar la morfología de las células y materiales de almacenamiento en diferentes regiones de la semilla. La resina LR White es una resina acrílica y exhibe baja viscosidad y fuerte permeabilidad, lo que lleva a sus buenas aplicaciones en la preparación de la sección de resina de semillas, especialmente para granos maduros de cereales con gran volumen y alto contenido de almidón. Además, la muestra incrustada en resina LR White se puede teñir fácilmente con muchos tintes químicos para exhibir claramente la morfología de las células y materiales de almacenamiento bajo el microscopio ligero o fluorescente7. En nuestro artículo anterior, hemos reportado un método de seccionamiento seco para preparar las secciones de tamaño de semilla entera de granos de cereales maduros incrustados en resina LR White. El método también puede preparar la sección de tamaño de semilla entera del grano de cereales en desarrollo, germinado y cocido8. La sección obtenida de tamaño de semilla entera tiene muchas aplicaciones en la observación y análisis de micromorfología, especialmente para ver y analizar cuantitativamente las diferencias morfológicas de los materiales celulares y de almacenamiento en diferentes regiones desemillas 8,9.
Esta técnica es adecuada para los investigadores que desean observar la microestructura del tejido y la forma y el tamaño de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones de semillas utilizando microscopio de luz. Las imágenes de secciones de tamaño de semilla entera teñidas específicamente para exhibir células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos pueden ser analizadas por un software de análisis morfológico para medir cuantitativamente los parámetros morfológicos de células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones de semillas. Con el fin de demostrar la aplicabilidad técnica y las aplicaciones de sección de tamaño integral, hemos investigado las semillas maduras de maíz y colza y los granos de arroz en desarrollo, germinados y cocidos en este estudio. El protocolo contiene cuatro procesos. Aquí, utilizamos el grano de maíz maduro, que es el más difícil en la preparación de las secciones de tamaño de semilla entera debido al gran volumen y alto contenido de almidón, como una muestra para exhibir los procesos paso a paso.

<table><tbody><tr><td>Ácido acético</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A501931</tr><tr><td>Tarro de vidrio compacto (5 plazas)</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>E678013</tr><tr><td>Coomassie azul brillante R-250</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A100472</tr><tr><td>Cubreobjetos</td><td>Sangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F518211</tr><tr><td>Cuchilla de doble cara</td><td>Gillette Shanghai Co., Ltd.</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>Absoluto de etanol</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500737</tr><tr><td>Mesa de aplanamiento</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>Olympus</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Abrillantador fluorescente 28</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>910090</td><td></td></tr><tr><td>Tiras de vidrio</td><td>Leica</td><td>840031</td><td></td></tr><tr><td>Solución de glutaraldehído al 50% en agua</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A600875</tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A600232</tr><tr><td>Yodo</td><td>Sangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500538</tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A507048</tr><tr><td>Microscopio</td> óptico <td>Olympus</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>LR Resina blanca</td><td>Agar Scientific</td><td>AGR1281A</td><td></td></tr><tr><td>Oven</td><td>Shanghai Jing Hong Laboratory Instrument Co., Ltd.</td><td>9023A</td><td></td></tr><tr><td>Yoduro de potasio</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A100512</tr><tr><td>Slide</td><td>Sangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>F518101 Sangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F519022</tr><tr><td>Fosfato de sodio dibásico dodecahidrato</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A607793</tr><tr><td>Fosfato de sodio monobásico dihidratado</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A502805</tr><tr><td>Ultramicrótomo</td><td>Leica</td><td>EM UC7</td><td></td></tr></tbody></table>

un método de seccionamiento simple y seco para obtener la sección de resina de tamaño de semilla completa y sus aplicaciones

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

La morfología, el tamaño y la cantidad de células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en semillas determinan el peso y la calidad de las semillas. Son significativamente diferentes entre las diferentes regiones de semillas. Con el fin de ver claramente las morfologías de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos, y analizar cuantitativamente sus parámetros morfológicos con precisión, se necesita la sección de tamaño de semilla completa. Aunque la sección de parafina de tamaño de semilla entera puede investigar la acumulación de materiales de almacenamiento en semillas, es muy difícil analizar cuantitativamente los parámetros morfológicos de las células y materiales de almacenamiento debido a la baja resolución de la sección gruesa. La sección de resina delgada tiene alta resolución, pero el método de seccionamiento rutinario de resina no es adecuado para preparar la sección de tamaño de semilla entera de semillas maduras con un gran volumen y alto contenido de almidón. En este estudio, presentamos un método de seccionamiento seco simple para preparar la sección de resina de tamaño de semilla completa. La técnica puede preparar las secciones transversales y longitudinales de tamaño integral de semillas en desarrollo, maduras, germinadas y cocidas incrustadas en resina LR White, incluso para semillas grandes con alto contenido de almidón. La sección de tamaño de semilla entera se puede teñir con brillo fluorescente 28, yodo y Coomassie azul brillante R250 para exhibir específicamente la morfología de células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos claramente, respectivamente. La imagen obtenida también se puede analizar cuantitativamente para mostrar los parámetros morfológicos de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones de semillas.

Método de seccionamiento en seco simple para obtener una sección de tamaño de semilla completa Establecemos un método de seccionamiento seco simple para preparar una sección de semillas de tamaño de semilla entera incrustada en resina LR-blanca (Figura 1). El método puede preparar secciones transversales y longitudinales de tamaño de semilla entera con espesor de 2 m(Figura 2-5, Figura Complementaria 1-4<...

Esta técnica permite la preparación rápida y sencilla de la sección de resina de tamaño de semilla entera para la observación y análisis de células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones de la semilla.

Un método de seccionamiento simple y seco para obtener la sección de resina de tamaño de semilla completa y sus aplicaciones

The morphology, size and quantity of cells, starch granules&#160;and protein bodies in seed determine the weight and quality of seed. They are ...

La ciencia morfológica y la calidad de las células, los gránulos de almidón y los cuerpos proteicos en el núcleo determinan el peso y la calidad de la semilla. En este estudio, presentamos como una población simple de un núcleo entero incrustado en resina LR White y establecemos un método simple de succión en seco de granos enteros. Elegimos la resina LR White como medio incrustado por dos razones principales.En primer lugar, es de baja viscosidad y fuerte permeabilidad, lo que lleva a sus buenas aplicaciones en la preparación de estas poderosas secciones de semillas, especialmente para granos maduros de cereales con un gran volumen y alto contenido de almidón. En segundo lugar, la muestra incrustada en resina LR White se puede teñir fácilmente con muchos tintes químicos para exhibir claramente la morfología de las muestras bajo luz con microscopio fluorescente. Las secciones preparadas se pueden teñir específicamente para exhibir las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos claramente en la aparición de kernel entero, y los parámetros de morfología también se pueden analizar cuantitativamente.El método contiene estudios. Aquí, utilizamos granos de maíz maduros con mayor volumen y alto contenido de almidón como muestra para exhibir los procesos paso a paso. Para empezar, recorta los granos en una botella simple.Añadir unos 10 milímetros de 2,5% glutaraldehído con búfer de fosfato. un pH más 7.2 y colóquelo a 4 grados centígrados durante 48 horas para fijar ambos. A continuación, saque estos granos y los corte longitudinal o transversalmente, con dos a tres milímetros de espesor.Necesitas una hoja afilada de doble cara. Y arréglalos por otras 48 horas. A continuación, lave las muestras tres veces con unos 10 milímetros, por lo que 0,1 M tampón de fosfato, pH 7,2 durante 30 minutos cada vez.Para hidratar las muestras paso a paso, remojarlas en unos 10 milímetros de 30%solución acuosa de etanol durante 30 minutos primero, y sucesivamente remojarlas en 10 milímetros, por lo que 50%70%90% una vez, y 100%tres veces. Para infiltrarse en una muestra paso a paso, recuperarlos sucesivamente con 10 milímetros de solución de resina LR White diluida con etanol de 25%50%75% una vez, y 100%dos veces a cuatro grados centígrados durante 12 horas cada vez. Antes de incrustar, necesitamos preparar los pedestales para las muestras.Añadir 250 microlitros de resina lr blanca pura en tubo centrífugo de dos milímetros y polimerizarlo a seis grados centígrados durante 48 horas. A continuación, añadir sucesivamente 500 microlitros de resina blanca LR pura e infiltrar la muestra en el tubo de centrífuga con un pedestal. Después de enderezar las muestras con aguja anatómica, poner la resina a seis grados centígrados en un horno durante 48 horas.Saque los granos incrustados del tubo de centrífuga y corte el exceso de resina alrededor de una muestra usando una cuchilla afilada. Coloque el bloque de resina en el soporte de muestra de microtono y recorte la resina superflua en la superficie de la muestra y alrededor de la muestra con la hoja. Pulir aún más la superficie de la muestra finalmente con un cuchillo de vidrio hasta que se pueda formar una sección completa.Ahora es el momento de preparar esta increíble sección con dos micras de espesor. Antes de cortar, coloque un pequeño cobre habló unos dos milímetros por encima del borde de la hoja para evitar que una sección se enrosque. A medida que la sección se alarga, ponga un spoke debajo de la sección para apoyarlo.A continuación, agregue los 100 microlitros de agua en el tobogán no proligido y transfiera cuidadosamente la sección completa e ininterrumpida al agua con los tratantes. Calentar y secar a 50 grados centígrados para suavizar la sección arrugada. Por último, dos consejos importantes necesitan atención.En primer lugar, si la sección se desmorona o se desgarra, extienda el tiempo para cada infiltración de resina de la muestra. En segundo lugar, si la sección tiene algunas líneas paralelas al cuchillo, sujete el bloque de muestra firmemente. Si la sección tiene algunas líneas verticales al cuchillo, por favor use un cuchillo nuevo.Para observar la morfología de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos, podemos manchar las secciones con aclarador fluorescente 28, solución de yodo, y Coomassie azul brillante R250 respectivamente. Para otras manchas específicas, base en la investigación de la propuesta. Aquí utilizamos solución de yodo para manchar gránulos de almidón como ejemplo.Añadir 40 microlitros de solución de yodo para sumergir la sección. Y guárdalo en el frasco por un minuto. Y luego cubra la muestra con una funda.Y borrar el exceso de solución de agente a su alrededor. Observe y fotografíe la muestra inmediatamente bajo un microscopio iluminado equipado con una cámara CCTV. Podemos procesar y analizar cuantitativamente las imágenes fotografiadas para el área, el acceso largo o corto, y la redondez de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones para el uso del software de análisis de morfología.Establecemos un método de seccionamiento seco simple para retener secciones de tamaño de kernel entero en resina LR White. El método puede preparar secciones transversales y longitudinales de todo el núcleo con dos micras. o ejemplos, la semilla entera madura de la colza se puede secuescionar transversal y longitudinalmente.Las secciones de un grano entero maduro de maíz con mayor volumen también se pueden preparar con éxito. Además, el núcleo en desarrollo, el núcleo cocido y el núcleo germinado también se pueden investigar utilizando el método. Las secciones preparadas de kernels enteros tienen las siguientes aplicaciones.En primer lugar, las secciones de todo el núcleo se pueden utilizar para observar la estructura tisular de las semillas. Por ejemplo, las secciones de embrión entero de colza manchada de safranina pueden exhibir claramente que es radical, hiper casual, interior y externo Las secciones de todo el núcleo se pueden utilizar para observar y analizar la morfología de las células. Por ejemplo, las secciones transversales de embrión entero de colza se tiñen con brillo fluorescente 28, y los aceites celulares se tiñen específicamente.La micro morfología de las células en cualquier región de embrión entero se puede mostrar con un alto aumento. Los parámetros morfológicos de las células parénquimales, se pueden analizar cuantitativamente utilizando software de análisis de morfología y mostrar algunas diferencias en diversas regiones del embrión. Las secciones transversales de grano entero de maíz teñido con brillo fluorescente 28 también pueden exhibir como morfología de las células, y los parámetros morfológicos de las células son diferentes en diversas regiones de endospermo.secciones de grano entero se pueden teñir con solución de yodo para exhibir su morfología de gránulos de almidón, por ejemplo, las secciones transversales y longitudinales de los granos de maíz teñidos con yodo pueden exhibir su morfología de gránulos de almidón claramente. Los gránulos de almidón en diversas regiones muestran una morfología, tamaño y cantidad significativamente diferentes en las células de endospermo. Así que el análisis cuantitativo de los parámetros morfológicos de los gránulos de almidón muestra que son significativamente diferentes en diversas regiones para el endospermo.Las secciones se pueden utilizar para observar y analizar la morfología de los cuerpos proteicos. Por ejemplo, la proteína de almidón se tiñe de azul usando Coomassie azul brillante R250. La distribución espacial de la proteína de almidón en todo el embrión de la colza se puede observar en su bajo aumento, y la micro estructura se puede exhibir claramente con un alto aumento.Además, los parámetros de índice de errores de números y morfología de los cuerpos proteicos en las regiones elegidas también se pueden analizar cuantitativamente. Esta técnica proporciona la primera y sencilla preparación de secciones de resina de granos enteros a partir del desarrollo y las semillas maduras. Las aplicaciones seccionales en la estructura tisular de todo el núcleo y luego investigar la morfología de las células, gránulos de almidón y los cuerpos proteicos en diferentes regiones de un núcleo entero.Las imágenes adquiridas se pueden analizar cuantitativamente para mostrar los parámetros morfológicos de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos y compararlos en diferentes regiones de kernel entero.

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Investigación

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Biología

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Este estudio presenta procedimientos confiables y fáciles para la obtención de secciones ultrafinas seriales de un microorganismo sin equipo costoso en microscopía electrónica de transmisión.

Un método para la obtención de secciones seriadas ultrafinas de microorganismos en microscopía electrónica de transmisión

Aquí, presentamos un protocolo para mejorar la parafina secciones. Este método combina el corte y flotando con una cámara termostática simple para evitar el proceso de transferencia requerido por el método convencional. Como resultado, la eficacia y el número de secciones de la parafina intacto mejoraron grandemente.

El método flotante para tejido parafina-encajado de seccionamiento y corte

Este protocolo permite la preparación de secciones transversales de semillas de cereales (por ejemplo, arroz) para el análisis de la morfología del endospermo y los gránulos de almidón mediante microscopía electrónica de barrido.

Seccionamiento transversal de arroz maduro (Oryza sativa L.) Núcleos para imágenes de microscopía electrónica de barrido utilizando puntas de pipeta como soporte de inmovilización

Este protocolo tiene como objetivo proporcionar procedimientos detallados para recolectar, fijar y mantener muestras de plantas micoheterótrofas, aplicando diferentes técnicas de microscopía como microscopía electrónica de barrido y transmisión, microscopía de luz, confocal y fluorescencia para estudiar la colonización fúngica en tejidos vegetales y semillas germinadas con hongos micorrícicos.

Técnicas de microscopía para interpretar la colonización fúngica en tejidos de plantas micoheterótrofas y germinación simbiótica de semillas

La evaluación de las diferencias anatómicas entre las secciones transversales de las hojas C3 y C4 ayuda a comprender la eficiencia de la fotosíntesis. Este artículo describe la preparación y el examen de las secciones transversales de hojas semifinas y a mano alzada, junto con las advertencias en la preparación de las especies de cultivo Triticum aestivum y Zea mays.

Evaluación de rasgos estructurales en Triticum aestivum y Zea mays para la diferenciación fotosintética de C3 y C4 utilizando secciones a mano alzada y semidelgadas

Aprenda un método simple de seccionamiento en seco para obtener secciones de resina de tamaño de semilla completa usando LR White. Esta técnica permite visualizar células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en granos de maíz maduros.

Un método de seccionamiento simple y seco para obtener la sección de resina de tamaño de semilla completa y sus aplicaciones

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