Name: Extracción y disección del cerebro de cerdo domesticado (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Aprende la extracción y disección del cerebro de cerdo doméstico para estudios de neuroanatomía comparativa. Este protocolo detalla técnicas precisas para preservar regiones cerebrales clave en investigación biomédica.

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A los autores les gustaría reconocer a Jim Knoblauch y Martin-Booth Hodges, del Colegio de Servicios de Comunicación y Tecnología de la Información de Ciencias Agrícolas, del Consumidor y Ambientales, por su experiencia en el rodaje, grabación y edición de audio y vídeo.

Los procedimientos relacionados con temas animales han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso animal (IACUC) de la Universidad de Illinois en Urbana-Champaign
NOTA: Antes de la eutanasia, el cerdo fue anestesiado a través de inyección intramuscular con una combinación de telazol:ketamina:xylazine (50.0 mg de tiletamina HCl más 50.0 mg de zolazepam HCl reconstituido con 2,50 ml de ketamina HCl (100 g/L) y 2,50 ml de xilazina (100 g/L) y se administra a 0,06 mg/kg BW). Una vez anestesiado, el cerdo fue eutanasiado mediante administración intracardiaca de pentobarbital sódico (390 mg/ml administrado a 1 ml/5 kg de BW). Para la disección cerebral, se recomienda que el método de eutanasia sea elegido en función del procedimiento analítico deseado del tejido. El método de eutanasia debe causar el menor daño posible al cerebro.
1. Extracción del cerebro del cerdo
<ol><li>Después de la eutanasia humana, decapitar al cerdo cortando por encima de la nuca, entre la primera y la segunda vértebra (atlas y eje, respectivamente).</li>
	<li>Asegure la cabeza en un banco inmovilizado vise modificado para incluir picos. Asegúrese de que la cabeza esté completamente inmovilizada antes de proceder.<ol>
<li>Usando un bisturí, haz un corte sagital a lo largo de la línea media del cráneo que continúa hacia la parte posterior de la cabeza.</li>
		<li>Haga un segundo corte (transversal) en la parte posterior de la cabeza.</li>
		<li>Haga un tercer corte (transversal) en el extremo posterior del hocico y en línea con los ojos. Corta la piel lo más lejos posible del cráneo para asegurar un fácil acceso al cráneo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando una sierra ósea, hacer dos cortes anteriores a posteriores laterales a la línea media, extendiéndose desde los ojos hasta el ápice de la curvatura del cráneo. Envuelve la sierra hacia la línea media y corta lo suficientemente profundo como para penetrar en el cráneo.<ol>
<li>Repita el proceso anterior en los lados perpendiculares, creando una "ventana" rectangular en el cráneo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando un gancho de carne, saque la sección rectangular del cráneo. Comience colocando el gancho en una de las esquinas de la sección y aplique presión hacia arriba para aflojar la pieza del cráneo. Tener cuidado de colocar el anzuelo de carne sólo a nivel del cráneo para evitar penetrar inadvertidamente el tejido cerebral.</li>
	<li>Si alguna capa meningeal permanece en el cerebro, utilice fórceps y tijeras contundentes (o alternativamente, un bisturí) para eliminar suavemente las capas sin cortar en el cerebro.</li>
	<li>Use un bisturí para cortar músculo y grasa en la parte posterior de la cabeza, exponiendo la parte posterior del cráneo.<ol>
<li>Haz dos cortes transversales a lo largo de la parte posterior del cráneo. Asegúrese de no cortar en el tejido cerebral.</li>
		<li>Asegure la cabeza colocando una mano firme en el hocico y aplique una presión hacia atrás para extraer la parte posterior del cráneo, exponiendo el cerebelo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Retire la cabeza del vicio del banco y colóquela en una alfombra quirúrgica.</li>
	<li>Usa una herramienta larga y delgada, como el extremo contundente de un bisturí, para extirpar el cerebro. Invierta la cabeza y use un movimiento suave para sacar al cerebro de la cavidad del cráneo sin dañar la superficie del cerebro. NOTA: Será necesario cortar los nervios craneales para extirpar el cerebro. Hazlo suavemente y no intentes sacar el cerebro con fuerza. El cerebro se caerá por sí solo cuando esté correctamente y completamente separado del cráneo y la columna vertebral.</li>
</ol>2. Disección del cerebro del cerdo
NOTA: Puede ser útil utilizar un atlas cerebral o una guía de disección de fibra14 como representación visual durante los procedimientos de disección. Asegúrese de que las muestras de tejido diseccionado se almacenen correctamente de acuerdo con las necesidades específicas del proyecto al retirar cada muestra (descrita con más detalle a continuación). Además, tenga en cuenta que para los propósitos de este video, todas las regiones cerebrales mostradas fueron diseccionadas del hemisferio derecho, pero esto puede diferir según el laboratorio basado en objetivos experimentales.
<ol><li>Para extirpar el tronco encefálico (predominantemente la médula), hacer un corte coronal caudal al cerebelo.</li>
	<li>Para extirpar el cerebelo, haga un corte coronal posterior a la corteza. Aísle las regiones deseadas (por ejemplo, vermis, flocculus, etc.) del cerebelo de esta muestra. Asegúrese de no incluir ninguna porción del tallo cerebral en esta muestra.</li>
	<li>Separa los dos hemisferios del cerebro haciendo un corte sagital medio a lo largo de la fisura longitudinal. Haga este corte como un movimiento continuo para evitar causar daños en la corteza.</li>
	<li>Para extraer el cerebro medio, disecciona una cantidad deseada de tejido sólo ventral al colliculi superior e inferior.</li>
	<li>Para eliminar el hipocampo, coloque el extremo contundente de un bisturí en la parte posterior del cuerpo calloso y enrolle suavemente el hipocampo hacia fuera, usando un movimiento "J" a partir de la parte posterior del cuerpo calloso; un cuerno de hipocampo entero tiene "forma de frijol".</li>
	<li>El estriado (se muestra principalmente el núcleo de caudato) es una región de rayas grises y blancas justo debajo del cuerpo calloso y anterior al hipocampo. Biselar el bisturí y eliminar esta región, revelando tejido estriado al retirarse.</li>
	<li>Para extraer la corteza prefrontal medial, diseccione el tejido del giro frontal al cuerpo calloso, eliminando la porción más medial de esa sección. La corteza derecha debe permanecer después de la eliminación de la corteza prefrontal medial.</li>
	<li>Para eliminar el tálamo, retire la estructura similar a una bombilla en el centro de la superficie midsagittal del cerebro y rostral al cerebro medio. El tálamo tiene una forma esférica y se verá ligeramente más oscuro que el tejido circundante.</li>
</ol>3. Post-disección
<ol><li>Una vez finalizada la disección, conservar las muestras de tejido correctamente para análisis posteriores. La omisión de este paso dará lugar a una autolisis y degradación significativas en tan solo 20 minutos.</li>
	<li>Deje intacta cada región cerebral en el momento de la disección si se realizarán análisis estructurales, o picar los tejidos para crear una muestra de tejido homogéneo antes de la preservación. Los métodos comunes de conservación de muestras para los tejidos cerebrales incluyen la criopreservación y la fijación química utilizando agentes de enlace cruzado15.</li>
	<li>Para ensayos de laboratorio estándar (por ejemplo, expresión génica o proteica), sumérjase en nitrógeno líquido o soluciones que estabilicen el material genético antes del almacenamiento a largo plazo a -80 °C para proporcionar métodos de conservación convenientes y rentables.</li>
	<li>Si mantener la estructura tisular es una prioridad, preservar los tejidos cerebrales a través de métodos tradicionales de fijación (por ejemplo, el uso de fijadores a base de aldehído para reenlazar proteínas), ya sea sin o con perfusión del animal u órgano de interés antes de la disección del tejido.</li>
</ol>

<ol><li>Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Swine in cardiovascular research.</a> Laboratory Animal Science. 36 (4), 348-350 (1986).</li>
<li>Yen, J. Anatomy of the Digestive System and Nutritional Physiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYen%2C+J+%22Biology+of+the+Domestic+Pig%22">Biology of the Domestic Pig</a>. , 31-63 (2001).</li>
<li>Pond, W. G. Of Pigs and People. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPond%2C+WG+%22Swine+Nutrition%22">Swine Nutrition</a>. , 3-24 (2001).</li>
<li>Odle, J., Lin, X., Jacobi, S. K., Kim, S. W., Stahl, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Suckling+Piglet+as+an+Agrimedical+Model+for+the+Study+of+Pediatric+Nutrition+and+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">The Suckling Piglet as an Agrimedical Model for the Study of Pediatric Nutrition and Metabolism.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 419-444 (2014).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+G%C3%B6ttingen+minipig+as+a+model+of+diabetes%2C+with+special+focus+on+type+1+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of the Göttingen minipig as a model of diabetes, with special focus on type 1 diabetes research.</a> ILAR Journal. 45 (3), 303-313 (2004).</li>
<li>Lehmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minipig+in+general+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">The minipig in general toxicology.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 25, 59-62 (1998).</li>
<li>Richer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sacrococcygeal+and+transsacral+epidural+anesthesia+in+the+laboratory+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Radiologic+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Sacrococcygeal and transsacral epidural anesthesia in the laboratory pig.</a> Surgical Radiologic Anatomy. 20, 431-435 (1998).</li>
<li>Lind, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+Modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 31 (5), 728-751 (2007).</li>
<li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 311, 79-83 (1979).</li>
<li>Aurich, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsurgical+training+model+with+nonliving+swine+head.+Alternative+for+neurosurgical+education%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Microsurgical training model with nonliving swine head. Alternative for neurosurgical education.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 29 (6), 405-409 (2014).</li>
<li>Bassi, T., Rohrs, E., Fernandez, K., Ornowska, M., Reynolds, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+excision%3A+An+easier+method+to+harvest+the+pig%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct brain excision: An easier method to harvest the pig's brain.</a> Interdisciplinary Neurosurgery. 14, 37-38 (2018).</li>
<li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+the+pig+CNS+for+histological+analysis%3A+A+manual+for+decapitation%2C+skull+opening%2C+and+brain+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Exposure of the pig CNS for histological analysis: A manual for decapitation, skull opening, and brain removal.</a> Journal of Visualized Experiments. 122, e55511(2017).</li>
<li>Pascalau, R., Szabo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+dissection+and+sectional+study+of+the+major+porcine+cerebral+white+matter+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomia%2C+Histologia%2C+Embryologia%22%5BJournal%5D)">Fibre dissection and sectional study of the major porcine cerebral white matter tracts.</a> Anatomia, Histologia, Embryologia. 46, 378-390 (2017).</li>
<li>McFadden, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+in+brain+banking%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica+Communications%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146(2019).</li>
<li>Félix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1(1999).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros competidores.

Las técnicas descritas en este documento fueron diseñadas para cerdos de aproximadamente 4 semanas de edad. Es fundamental realizar estos pasos inmediatamente después de que el cerdo ha sido eutanasiado humanamente para asegurar que se mantenga la integridad de la estructura del tejido cerebral, especialmente cuando se consideran ensayos bioquímicos posteriores. Es útil utilizar un atlas o guías de disección de fibra16 al aprender por primera vez las técnicas. Se recomienda que el experimentador p...

El cerdo ha sido bien documentado y aceptado como un modelo animal traducible para la investigación en sistemas cardiovasculares1,sistemas gastrointestinales2,nutrición3,4,diabetes5,toxicología6,y técnicas quirúrgicas7. El uso del cerdo en neurociencia está empezando a aumentar, ya que PubMed busca las palabras clave "modelo de animales cerebrales porcinos" resultan en cuatro veces más resultados de 1996-2005 que el período anterior de 10 años8,y aún más resultados en la actualidad. Una razón primaria por la que la popularidad del modelo porcino se está expandiendo se debe a sus similitudes en el crecimiento, la estructura y la función del cerebro en comparación con los seres humanos. En comparación con el cerebro humano, el cerebro del cerdo exhibe patrones girostrales similares, vascularización y distribución de materia gris y blanca9. Además, el cerebro del cerdo se ha utilizado en procedimientos de neuroimagen, evocado registro potencial, y en el establecimiento de técnicas de neurocirugía8,9. A diferencia de otros modelos animales, sin embargo, el cerdo y la experiencia humana perinatal crecimiento cerebral estimula, en lugar de pre- o post-natal crecimiento estimula. Al nacer, el cerebro humano y porcino pesa aproximadamente el 27 y el 25 por ciento de su peso cerebral adulto, respectivamente, en comparación con el cerebro de rata que pesa el 12 por ciento de su peso cerebral adulto y el cerebro del mono rhesus en el 76 por ciento del peso adulto10.
Una de las razones por las que el cerdo sólo ha sido adoptado lentamente como un modelo animal para la neurociencia es porque muchos investigadores no están familiarizados con el animal en este contexto. Los investigadores pueden no ser conscientes de sus usos potenciales en el campo o pueden no conocer las técnicas adecuadas necesarias para utilizar un modelo de este tipo. Como el uso del cerdo como modelo biomédico y preclínico gana atención y uso en neurociencia, es necesario establecer procedimientos estandarizados de eliminación de tejidos para garantizar una comparación precisa de los datos a través de estudios. Aunque las técnicas de disección y cirugía que involucran el cerebro del cerdo se han publicado en otros lugares11,12,13, hay una necesidad de protocolos simples y estandarizados para recoger tejido cerebral de cerdo, especialmente para su uso en ensayos bioquímicos. Como tal, el objetivo de este video es proporcionar el conocimiento necesario para permitir a los investigadores realizar una extracción y disección cerebral estandarizada. Este video ilustra una técnica adecuada para extirpar el cerebro del cerdo manteniendo intacta la corteza y el tronco encefálico, y posteriormente revisar los métodos para diseccionar varias regiones clave del cerebro.

<table><tbody><tr><td>#22 Hojas de bisturí para mangos #4 Ted</td><td>Pella, inc.</td><td>549-4S-22</td><td></td></tr><tr><td>Sierra para huesos Satterlee de 11 1/2"</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI13425</td><td></td></tr><tr><td>Rompecráneos de 5 1/2" con extremo de cincel (gancho para carne)</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI37636</td><td></td></tr><tr><td>Banco de taller de alta resistencia de 5 pulgadas Vise</td><td>Pony</td><td>29050</td><td></td></tr><tr><td>Cuchillo de carnicero 25cm</td><td>Victorinox</td><td>5.7403.25</td><td>Afilar antes de usar</td></tr><tr><td>CM40 Caída de servicio ligero Abrazaderas C forjadas</td><td>Bessey</td><td>00655BC3120</td><td></td></tr><tr><td>Diamante Afilado Cuchillo Shaper</td><td>Chef' s Choice</td><td>436-3</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Mango de hoja de bisturí de acero inoxidable #4</td><td>Pinza de tejido ThermoScientific</td><td>5334</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Henry Schein</td><td>101-5132</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla de disección</td><td>de vinilo Carolina 629006</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

extracción y disección del cerebro de cerdo domesticado

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

El uso del cerdo como modelo animal preclínico y traducible ha sido bien documentado y aceptado por campos de investigación que investigan sistemas cardiovasculares, sistemas gastrointestinales y nutrición, y el cerdo está siendo utilizado cada vez más como un gran modelo animal en neurociencia. Además, el cerdo es un modelo aceptado para estudiar el neurodesarrollo, ya que muestra patrones de crecimiento y desarrollo cerebral similares a lo que ocurre en los seres humanos. Como un modelo animal menos común en neurociencia, los procedimientos quirúrgicos y de disección en cerdos pueden no ser tan familiares o bien practicados entre los investigadores. Por lo tanto, un protocolo visual estandarizado que detalla métodos consistentes de extracción y disección puede resultar valioso para los investigadores que trabajan con el cerdo. El siguiente video muestra una técnica para extirpar el cerebro del cerdo mientras mantiene intacta la corteza y el tronco encefálico y revisa los métodos para diseccionar varias regiones cerebrales comúnmente investigadas, incluyendo el tronco encefálico, cerebelo, midbrain, hipocampo, estriado, tálamo y corteza prefrontal medial. El propósito de este video es proporcionar a los investigadores las herramientas y conocimientos necesarios para realizar consistentemente una extracción y disección cerebral en el cerdo de cuatro semanas de edad.

Esta sección describe ejemplos de resultados obtenidos después de la extracción correcta y la disección de un cerebro de cerdo de 4 semanas de edad. La Figura 1 describe la forma de cada región cerebral para su uso como guía durante la disección. Parte del tronco encefálico puede permanecer en el cráneo después de la extirpación del cerebelo (Figura 1B). Esto se puede eliminar mientras se aísla la región deseada del cerebelo. La Tabla 1 muestra ...

Este protocolo detalla la técnica para la extirpación del cerebro del cerdo en su totalidad y la disección de varias regiones cerebrales comúnmente estudiadas en neurociencia.

Extracción y disección del cerebro de cerdo domesticado

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

El siguiente video es una demostración de extirpación y disección del cerebro del cerdo. Puede ser útil referirse a un atlas, o guía de disección de fibra antes o durante el procedimiento. Un cuchillo de carnicero grande es mejor para la decapitación, ya que permitirá un corte limpio entre el atlas y el eje.Asegúrese de que el cuchillo esté afilado antes de comenzar con un nuevo sujeto. Se utiliza un gancho de carne para eliminar el cráneo. Una herramienta larga y delgada, como un mango de bisturí, se utiliza para extraer el cerebro del cráneo.Un vicio con tornillos o protuberancias es necesario para asegurar la cabeza mientras corta el cráneo. Una vez que el animal ha sido eutanasiado humanamente de acuerdo con los protocolos establecidos proceder de la siguiente manera. Corte justo por encima de la nuca, entre los hombros y la parte superior de la cabeza.Asegure al cerdo y saque los años del camino durante la decapitación. Use un bisturí para hacer incisiones para separar la piel del cráneo. Hacer un corte inicial en el centro del cráneo que continúa a la parte posterior de la cabeza.El segundo corte transversal debe estar en la parte posterior de la cabeza. El tercer corte también transversal comenzará en la parte posterior de este hocico, y en línea con los ojos para garantizar un fácil acceso al cráneo. Utilice una sierra ósea para hacer a cortes anteriores a posteriores laterales a la línea media.Comience marcando ligeramente el área para el corte con la sierra, y luego comience a aserr hasta que encuentre menos resistencia del cráneo. Bisele ligeramente la sierra hacia la línea media mientras corta, ya que esto asegurará que usted está cortando la parte más delgada del cráneo. Si el corte está demasiado cerca de la oreja será difícil extirpar el cráneo.Pero si el corte está demasiado cerca de la línea media, la abertura será demasiado pequeña para extirpar el cerebro. Repita este proceso en los lados perpendiculares para crear una ventana rectangular. Asegúrese de que cada esquina de la ventana esté completamente cortada, de modo que se pueda extraer parte del cráneo para revelar el cerebro debajo.A continuación, utilice un gancho de carne o un instrumento curvo para sacar la sección rectangular del cráneo fuera de posición. Comience colocando el gancho en una de las esquinas y aplicando presión para arrancar la tapa del cráneo. En algunos casos, las meninges permanecerán en el cerebro.Y si esto ocurre cuidadosamente utilizar fórceps y tijeras contundentes, o alternativamente un bisturí para eliminar las meninges sin cortar el cerebro. Como referencia, el cerebro debe tener el siguiente aspecto antes y después de que se hayan eliminado las capas meningeales. Cortar a través del músculo y la grasa en la parte posterior de la cabeza para prepararse para la exposición del cerebelo.Para exponer el cerebelo hacer dos cortes transversales a lo largo de la parte posterior del cráneo. Al hacer estos cortes, tener cuidado de no cortar en el cerebro expuesto. Una vez que se han hecho los cortes coloque una mano en el hocico, y otra en el cráneo, y aplique presión hacia atrás para tirar de la parte posterior del cráneo lejos del resto de la cabeza.Como se resalta aquí, el cerebelo está escondido detrás de las capas meningeales restantes. Utilice el extremo de un instrumento contundente como un mango del bisturí para separar cuidadosamente el cerebro del cráneo, teniendo cuidado de evitar dañar el cerebro en el proceso. Invierta ligeramente la cabeza para ayudar a persuadir al cerebro fuera del cráneo, y use un movimiento suave para cortar los nervios craneales y eliminar el cerebro.Este proceso requiere paciencia y práctica para eliminar todas las conexiones restantes entre el cerebro y la cavidad craneal. Invertir la cabeza del cerdo puede ser útil durante este proceso. Continúe usando movimientos de barrido con el instrumento contundente para liberar el cerebro.Como se destaca aquí, el cerebelo y el tronco encefálico pueden ser difíciles de extirpar, ya que están metidos en la cavidad del cráneo. Ten cuidado al extirpar el cerebelo y la médula, o tronco encefálico. El cerebro debe caerse por sí solo cuando está completamente separado del cráneo.La cavidad craneal debe verse como se muestra después de la extirpación del cerebro. En preparación para la disección de la región cerebral aseguran contenedores preetiquetados están organizados, y en proximidad. Los métodos de conservación de ejemplo incluyen muestras de congelación instantánea en nitrógeno líquido o sumergirlas en una solución conservante.Una vez extraído de la cavidad craneal, todo el cerebro debe tener el siguiente aspecto. Para extirpar la médula o el tronco encefálico, hacer un corte coronal caudal al cerebelo. Para extirpar el cerebelo, haga un corte coronal posterior a la corteza.Para separar los hemisferios hacer un corte midsagittal a lo largo de la fisura longitudinal usando un movimiento continuo para evitar daños. Para los propósitos de este video sólo mostraremos disecciones del hemisferio derecho. Para eliminar el aspecto de cerebro medio para el superior, y colliculi inferior que son dos protuberancias en la parte posterior del cerebro.Retire la cantidad deseada de tejido cerebral sólo ventral a estas regiones. Para eliminar el hipocampo coloque el mango del bisturí en la parte posterior del cuerpo calloso, y enrolle suavemente el hipocampo. Todo el cuerno del hipocampo tendrá forma de frijol.El hipocampo debe desplegarse fácilmente al recoger el dedo en un movimiento j, a partir del cuerpo posterior calloso. Para eliminar el estriado o el núcleo de caudato, despeje la parte anterior del cuerpo calloso. El núcleo de caudato es la región estriada o a rayas que es de color gris y blanco y se encuentra justo debajo del cuerpo calloso.Con el mango del bisturí en ángulo eliminar esta región que incluye predominantemente el núcleo de caudato. Después de extraer este tejido usted debe ser capaz de ver un patrón estriado donde se había localizado la región cerebral. Para extraer el tejido diseccionado de corteza prefrontal medial del giro frontal al cuerpo calloso tomando la porción más medial de esa sección.La corteza derecha debe permanecer después de la eliminación de la corteza prefrontal medial. Para eliminar el tálamo, retire la bombilla como estructura en el centro de la superficie midsagittal. El tálamo tiene una forma esférica obvia, y se verá ligeramente más oscuro que el tejido circundante.Una vez finalizadas las muestras de tejido de disección, las muestras deben conservarse correctamente en función de resultados experimentales específicos. Aquí se muestran las regiones cerebrales diseccionadas, incluyendo el tamaño relativo y la forma esperada al trabajar con cerdos jóvenes. Al dominar estas técnicas, toda la extracción cerebral, y el procedimiento de disección tomará menos de 15 minutos por sujeto, y producir resultados consistentes.

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Investigación

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Neurociencia

Se describe un modelo de rata de trastorno de estrés postraumático (TEPT), que revela las alteraciones persistentes en la función neuroendocrina y el retraso a largo plazo, la respuesta temor exagerado, característicos de pacientes con TEPT. El modelo animal y los métodos descritos aquí son útiles para la correlación de biomarcadores en núcleos cerebrales, que son mecanicista, pero no se puede medir en los pacientes, con biomarcadores en la sangre periférica de células blancas, que pueden.

Biomarcadores en un modelo animal para Revelar correlatos neurales, hematológicas y conductuales de estrés postraumático

Este video muestra un método para preparar cultivos organotípicos de cortes de hipocampo a partir del cerebro de un cachorro de rata. Describe los pasos involucrados en la disección del hipocampo, el corte y las condiciones de cultivo necesarias para promover la viabilidad y el crecimiento celular en las rodajas del hipocampo, generando en última instancia cultivos de cortes organotípicos.

Preparación de cultivos organotípicos de cortes a partir del hipocampo de un cachorro de rata

Este video muestra el proceso de formación de la neurosfera y su expansión a partir del tejido del hipocampo. Las células madre neurales y progenitoras del tejido del giro dentado del ratón postnatal proliferan y forman neuroesferas primarias, que luego se resiembran para formar neuroesferas secundarias.

Formación y expansión de neurosferas a partir de un tejido del hipocampo

La investigación sobre la neurotoxicidad del desarrollo inducida por la anestesia (AIDN) se ha centrado en los roedores, que no son ampliamente aplicables a los seres humanos. Los modelos de primates no humanos son más relevantes, pero son costo prohibitivos y difíciles de usar para la experimentación. El lechón, por el contrario, es un modelo animal clínicamente relevante y práctico, ideal para el estudio de la neurotoxicidad anestésica.

Uso de un Modelo de Cochinillo para el Estudio de la Neurotoxicidad de Desarrollo inducida por Anestesia (AIDN): Un Enfoque de Neurociencia Translacional

El objetivo de este documento y vídeo de instrucción es describir cómo exponer y retirar el cerebro de cerdo y la glándula pituitaria postmortem en un estado intacto, adecuado para el análisis macroscópico e histológico posterior.

La exposición del cerdo del SNC para el análisis histológico: Un Manual para decapitación, Apertura cráneo, cerebro y Remoción

Este artículo describe una metodología detallada para obtener secciones tangenciales aplastadas de cortezas mamíferas y visualizar los módulos corticales mediante histoquímica y métodos inmunohistoquímicos.

Visualización de módulos corticales en cortezas mamíferos aplanados

Presentamos un protocolo práctico, paso a paso, rápido para la extracción del cerebro del ratón y la disección de regiones discretas del tejido cerebral fresco. La obtención de regiones cerebrales para el análisis molecular se ha convertido en una rutina en muchos laboratorios de neurociencia. Estas regiones cerebrales se congelan inmediatamente para obtener datos transcriptómicos de alta calidad para el análisis a nivel de sistema.

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Este artículo presenta un protocolo paso a paso para la implantación directa de cánulas en la cisterna magna de cerdos.<br...

Implantación directa de cánula en la Cisterna Magna de Cerdos

Aquí, presentamos un método para la evaluación del rendimiento y la seguridad a largo plazo de las matrices de electrodos subdurales blandos en un modelo minipig, describiendo el método y las herramientas quirúrgicas, las imágenes de resonancia magnética postoperatoria, la electrofisiología de la corteza auditiva, las propiedades electroquímicas del implante y la inmunoquímica postmortem.

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Este protocolo describe la realización de una craniectomía utilizando un taladro neumático de alta velocidad en un cerdo Landrace danés de 3 meses de edad. El acceso se realiza a través del hueso frontal y revela la duramadre ventral y los hemisferios cerebrales subyacentes. Este procedimiento permite acceder a una gran parte del cerebro del cerdo.

Acceso al cerebro porcino a través de una craneectomía con taladro neumático de alta velocidad

Se describe un método innovador para construir matrices cerebrales expansibles que corten cortes coronales o sagitales para su aplicación en lechones neonatales. Este enfoque económico utiliza placas acrílicas talladas con plantillas de moldura cerebral en gel de agarosa, se aplica a múltiples especies y permite la expansión para acomodar el crecimiento cerebral.

Fabricación de una matriz cerebral expansible personalizable a través de las etapas de desarrollo

Aprende la extracción y disección del cerebro de cerdo doméstico para estudios de neuroanatomía comparativa. Este protocolo detalla técnicas precisas para preservar regiones cerebrales clave en investigación biomédica.

Extracción y disección del cerebro de cerdo domesticado

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