Name: Un modelo de ratón para la pancreatitis crónica a través de la infusión de TNBS del conducto biliar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Aprende a crear un modelo de pancreatitis crónica en ratones mediante infusión de TNBS en el conducto biliar. Este protocolo optimizado permite estudiar la patogénesis y tratamiento de la enfermedad pancreática.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este estudio fue apoyado por el Departamento de Asuntos de Veteranos (VA-ORD BLR & D Merit I01BX004536), y el Instituto Nacional de Salud otorga subvenciones # 1R01DK105183, DK120394 y DK118529 a HW. Agradecemos al Dr. Hongju Wu por compartir experiencias técnicas.

Todos los procedimientos se llevaron a cabo con la aprobación de los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica de Carolina del Sur y el Centro Médico Ralph H. Johnson. En este estudio se utilizaron ratones machos C57BL/6J entre 8-10 semanas de edad. Los ratones fueron alojados bajo un ciclo estándar de 12 luces / 12 oscuros con acceso ad libitum a los alimentos y al agua.
1. Preparación de TNBS solución inyectable
<ol><li>Preparar etanol al 10% en solución salina al 0,9%. Disolver TNBS (ver Tabla de Materiales)en etanol al 10% a una concentración final de 7,5 mM añadiendo 7,5 μL de TNBS en 1 mL de etanol al 10%. PRECAUCIÓN: El TNBS presenta un peligro químico. Prepare la solución dentro de una campana extractora de humos y use equipo de protección personal como guantes, gafas y una bata de laboratorio para evitar el contacto directo con TNBS.</li>
	<li>Cargue 50 μL de solución de TNBS al 0,75% en una jeringa de insulina con una aguja calibre 31. Cargue 50 μL de etanol al 10% en solución salina en una jeringa del mismo tamaño que el control del vehículo. Coloque las jeringas sobre hielo y protéjalas de la luz hasta que sea necesario.</li>
</ol>2. Preparación y cirugía del ratón
<ol><li>Afeitar el vello de la zona quirúrgica abdominal.</li>
	<li>Inyecte una dosis preventiva del analgésico (por ejemplo, buprenorfina 0,1 mg/kg p.i.) antes de la cirugía.</li>
	<li>Inducir y mantener al ratón bajo anestesia general con 1,5-2% de isoflurano y 1 L/min de oxígeno. Confirme la anestesia pellizcando los dedos de los dedos de los dedos de los los días y observando al animal por falta de reflejo.</li>
	<li>Coloque el ratón en una almohadilla quirúrgica calentada durante la cirugía. Aplique ungüento veterinario en cada ojo cuando el ratón esté bajo anestesia.</li>
	<li>Desinfectar el sitio quirúrgico limpiando el área quirúrgica 3 veces con 2% de yodo, seguido de alcohol al 70%(Tabla de Materiales).</li>
	<li>Realizar una laparotomía con micro tijeras para generar una incisión de 0,5-1 cm.</li>
	<li>Exponga suavemente el duodeno y localice el conducto biliar común utilizando hisopos de algodón(Tabla de materiales).</li>
	<li>Coloque un microclip hemo recto(Tabla de Materiales)sobre el conducto común proximal para evitar el flujo de TNBS o soluciones de vehículos hacia el hígado y la vesícula biliar (Figura 1A,B).</li>
	<li>Exponga suavemente el duodeno e inserte la aguja en el conducto pancreático a través de la papila de Vater.</li>
	<li>Una vez que la aguja esté dentro del conducto, coloque un micro clip hemo curvo(Tabla de materiales)sobre el duodeno que rodea la aguja(Figura 1A)para asegurar la aguja en su lugar y evitar que la solución inyectada entre en el duodeno.</li>
	<li>Infundir gradualmente la solución (TNBS o vehículo) en el conducto pancreático en el transcurso de un minuto. NOTA: TNBS necesita ser infundido lentamente durante un minuto de tiempo, y es fácil controlar la velocidad de infusión cuando el páncreas se perfunde con una jeringa de insulina con una aguja de 5/16 pulgadas y 31G. Mantenga la mano lo más estable posible para evitar pinchar el conducto biliar. Si TNBS se inyecta con éxito, el color amarillo puede ser visible dentro del páncreas.</li>
	<li>Después de la infusión, retire cuidadosamente la micro pinza cerca del hígado y luego retire la micro pinza que sostiene la aguja y el duodeno.</li>
	<li>Devuelva cuidadosamente el duodeno a su posición original.</li>
	<li>Deje 0,5 ml de solución salina estéril tibia (36-37 ° C) en la cavidad abdominal antes del cierre, para ayudar a que el duodeno vuelva a su posición original y ayudar con la recuperación de la peristalsis.</li>
	<li>Cierre la incisión en la capa muscular con sutura continua con un punto 5-0. Cierre la piel con sutura interrumpida con una puntada de 4-0.</li>
	<li>Coloque la jaula que contiene ratones en una almohadilla térmica para permitir la recuperación de la anestesia.</li>
	<li>Confirme que los ratones están calientes y son capaces de movimiento espontáneo antes de devolverlos a la sala de espera.</li>
	<li>Continúe proporcionando un analgésico (por ejemplo, buprenorfina 0,1 mg/kg i.p.) cada 12 h y calor suplementario durante 48 h después de la cirugía.</li>
</ol>3. Supervisión del comportamiento del ratón
<ol><li>Retire las suturas en el día 7 después de la cirugía.</li>
	<li>Monitoree la salud y el comportamiento del ratón diariamente durante la primera semana después de la cirugía. Esté atento a los signos de angustia, como vocalización, postura encorvada de la espalda o reducción de la locomoción. Mide el peso corporal cada dos días.</li>
	<li>Utilizar monofilamentos de Von Frey (VFF) para medir la hipersensibilidad mecánica abdominal antes, y 2, 3 semanas después de la cirugía como se describe9,14.<ol>
<li>Aplique VFFs de diferentes fuerzas aplicadas en orden ascendente a la zona abdominal superior 10x cada 1-2 s. Considere la elevación, retracción o lamido del abdomen (respuesta de abstinencia) como una respuesta positiva.</li>
		<li>Aplicar un estímulo más fuerte si no se observa una respuesta positiva, y un estímulo más débil si se observa una respuesta positiva. El umbral de retirada es la fuerza a la que el ratón responde el 50% de las veces.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Recolección y análisis histológico del tejido pancreático
<ol><li>Sacrifique a los ratones bajo anestesia por dislocación cervical y diseccione cuidadosamente el páncreas del intestino y otros órganos.</li>
	<li>Fije el páncreas en paraformaldehído al 10% durante 24 h, incrute parafina, corte secciones de tejido de 5 μm de espesor y colóquelas en portaobjetos de vidrio para teñirlos.</li>
	<li>Realizar la tinción de hematoxilina-eosina y tricrómica de Masson utilizando métodos estándar como se informó anteriormente4.</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

Todos los autores declaran que no tienen conflicto de intereses.

La infusión de TNBS en las vías biliares para inducir pancreatitis crónica es técnicamente un desafío en ratones, ya que hasta el 22,5% de los ratones pueden morir dentro de los 3-4 días posteriores a la infusión del medicamento10. Aquí, este informe refinó el procedimiento basado en estudios previos y redujo la mortalidad temprana de ratones a <10%. Por ejemplo, el aumento del volumen de medicamentos (de 35 μL a 50 μL) puede garantizar que los medicamentos lleguen a todo el páncreas. El uso de un...

La pancreatitis crónica (PC) es una enfermedad inflamatoria crónica caracterizada por la atrofia del páncreas, fibrosis, dolor abdominal y eventual pérdida de las funciones exocrina y endocrina1. Los tratamientos médicos y quirúrgicos actuales no son curativos, sino que se llevan a cabo para aliviar los síntomas que son la consecuencia de la enfermedad: dolor abdominal refractario, disfunción endocrina y exocrina. Por lo tanto, se necesitan urgentemente tratamientos más efectivos2. Los modelos animales proporcionan una herramienta esencial para desarrollar una mejor comprensión de la enfermedad e investigar posibles terapias3. Se han desarrollado múltiples modelos de ratón para PC, de los cuales se utilizan comúnmente modelos de ceruleína y / o alcohol. Se ha demostrado que la ceruleína, un oligopéptido que estimula la secreción pancreática, induce de forma reproducible un modelo de PC con atrofia pancreática, fibrosis, entre otros4. Otro modelo común utiliza inyecciones seriadas de L-arginina, que produce insuficiencia exocrina similar a la observada en pacientes humanos5. La PC también puede ser inducida por ligadura completa o parcial del conducto pancreático, así como por hipertensión del conducto pancreático6,7. A pesar de la variedad de modelos animales disponibles para la PC, ninguno de estos modelos reproduce eficazmente el dolor abdominal experimentado por los pacientes conPC 8.
Estudios previos mostraron que la inyección pancreática local de ácido 2,4,6 -trinitrobenceno sulfónico (TNBS) replica el dolor persistente experimentado por los pacientes con PC9,10,11. Los ratones tratados con TNBS demostraron hipersensibilidad abdominal y un aumento de los comportamientos relacionados con el dolor, así como una "hipersensibilidad generalizada" a los estímulos dolorosos, un fenómeno que se ha observado en pacientes con PC10. Además de imitar con precisión el dolor CP, el modelo TNBS también replica otras características patológicas de la condición humana como la fibrosis, la infiltración de células mononucleares y el reemplazo de células acinares con tejido graso10,12. Sin embargo, la infusión de TNBS a través del conducto biliar es un procedimiento técnicamente desafiante en ratones que puede causar la muerte. Hasta donde sabemos, no existe un protocolo visual que muestre cómo se realiza la infusión de conductos biliares. En este artículo, demostramos el procedimiento de la infusión de ducción biliar de TNBS para generar un modelo de ratón CP. Este procedimiento ayudará a generar valiosos modelos animales para el estudio de la PC y otras enfermedades pancreáticas y se puede utilizar para infundir otros materiales (por ejemplo, virus, células) en el páncreas13.

<table><tbody><tr><td>10% Formalina tamponada neutra v/v</td><td>Fisher Scientific</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>Almohadillas de preparación con alcohol, estériles</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de anestesia animal</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>Clorhidrato de buprenorfina, inyección</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga, 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, absoluto (200 pruebas), grado de biología molecular</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de microdisección extrafinas 4" rectas afiladas</td><td>Roboz Surgical Instrumento Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Graefe 4" punta extra delicada</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>Amazon</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Hegar-Baumgartner Portaagujas 5.25"</td><td>Roboz Instrumento Quirúrgico Co.</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de insulina con aguja de calibre 31</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>Almohadillas de preparación de yodo</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip de aplicación de pinzas 5.5"</td><td>Roboz Instrumento Quirúrgico Co.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip, recto fuerte curvo 1x6mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip, recto, ancho de clip de 0,75 mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>Solución de ácido picrilsulfónico, TNBS, 1M en H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de polipropileno 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de polipropileno 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio, solución intravenosa al 0,9%</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>Paño quirúrgico estéril</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Cassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>Filamentos Von Frey</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo de ratón para la pancreatitis crónica a través de la infusión de tnbs del conducto biliar

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

La pancreatitis crónica (PC) es una enfermedad compleja que involucra inflamación pancreática y fibrosis, atrofia glandular, dolor abdominal y otros síntomas. Se han desarrollado varios modelos de roedores para estudiar la CP, de los cuales el modelo de infusión de ácido sulfónico trinitrobenceno (TNBS) del conducto biliar 2,4,6 replica las características del dolor neuropático observado en la PC. Sin embargo, la infusión de medicamentos para las vías biliares en ratones es técnicamente desafiante. Este protocolo demuestra el procedimiento de infusión de TNBS de conducto biliar para la generación de un modelo de ratón CP. TNBS se infundió en el páncreas a través de la ampolla de Vater en el duodeno. Este protocolo optimizó el volumen de medicamentos, las técnicas quirúrgicas y el manejo de medicamentos durante el procedimiento. Los ratones tratados con TNBS mostraron características de PC reflejadas por las reducciones de peso corporal y páncreas, los cambios en los comportamientos asociados al dolor y la morfología pancreática anormal. Con estas mejoras, la mortalidad asociada con la inyección de TNBS fue mínima. Este procedimiento no solo es crítico en la generación de modelos de enfermedad pancreática, sino que también es útil en la administración local de medicamentos pancreáticos.

Los procedimientos de infusión de conductos biliares se optimizaron para reducir la mortalidad de ratones asociada con este procedimiento10. TNBS se administró por primera vez en un volumen total de 35 μL o 50 μL. La inyección de TNBS en un volumen de 50 μL podría llegar a todo el páncreas e inducir un fenotipo de enfermedad más homogéneo(Figura 1B). Además, la inyección de TNBS utilizando una jeringa de insulina con aguja 31G podría controlar mejor la velocidad de in...

La pancreatitis crónica (PC) es una enfermedad caracterizada por inflamación y fibrosis del páncreas, a menudo asociada con dolor abdominal intratable. Este artículo se centra en refinar la técnica para generar un modelo de ratón de CP mediante infusión de conductos biliares con ácido sulfónico trinitrobenceno 2,4,6 (TNBS).

Un modelo de ratón para la pancreatitis crónica a través de la infusión de TNBS del conducto biliar

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

La pancreatitis crónica es una enfermedad compleja que involucra inflamación pancreática, fibrosis, dolor abdominal y otros síntomas. El modelo de infusión TNBS del conducto biliar replica el dolor neuropático observado en pacientes con pancreatitis crónica. Este protocolo de infusión de TNBS de conducto biliar ha sido optimizado para inducir la generación de un modelo de pancreatitis crónica en ratones.Como la fusión de fármacos del conducto biliar en ratones es técnicamente desafiante, su visualización será útil para los investigadores nuevos en el método. Antes y dos y tres semanas después de la cirugía, use monofilamentos de Von Frey para aplicar diferentes niveles de fuerza en orden ascendente al área abdominal superior de un ratón negro C57 de ocho a 10 semanas de edad, 10 veces durante uno o dos segundos por aplicación. Considere elevar la retracción o lamer el abdomen como una respuesta positiva.A continuación, cargue una jeringa de insulina equipada con una aguja de calibre 31 con 50 microlitros de una solución TNBS al 0,75 por ciento recién preparada. Cargue una segunda jeringa con 50 microlitros de etanol al 10 por ciento en solución salina como control del vehículo y coloque ambas jeringas en hielo protegido de la luz. Después de confirmar la falta de respuesta al reflejo del pedal, retire el vello de la región abdominal del ratón anestesiado afeitándose o aplicando crema depilación y coloque el ratón en una almohadilla quirúrgica calentada bajo un microscopio de disección.Aplique ungüento veterinario en cada ojo y desinfecte el sitio quirúrgico con tres toallitas secuenciales de dos por ciento de yodo y tres toallitas de etanol al 70 por ciento use micro tijeras para hacer una incisión de 0.5 a un centímetro en un movimiento continuo y use hisopos de algodón para exponer suavemente el duodeno y localizar el conducto biliar común. Para evitar el flujo del tratamiento hacia el hígado y la vesícula biliar, use el microscopio para colocar un micro hemoclip recto sobre el conducto común proximal e inserte la aguja de la jeringa cargada con TNBS a través de la papila del vater en el conducto pancreático. Use un micro hemoclip curvo para asegurar la aguja e infunda la solución en el conducto pancreático en el transcurso de un minuto.Cuando se haya entregado toda la solución, retire cuidadosamente las micro abrazaderas y confirme que el duodeno ha vuelto a su posición original. Antes del cierre de la cavidad abdominal, agregue 500 microlitros de solución salina estéril de 36 a 37 grados Celsius para ayudar a que el duodeno vuelva a su posición original y para ayudar con la recuperación de la peristalsis. Use una sutura continua con un punto de cinco O para cerrar la incisión en la capa muscular y cierre la piel con una sutura interrumpida con un punto de cuatro O.Luego coloque el mouse en una jaula de recuperación en una almohadilla térmica con monitoreo hasta la recostación completa. Monitoree la salud y el comportamiento del ratón diariamente durante la primera semana después de la cirugía para detectar signos de angustia, como vocalizar, una postura de espalda encorvada o reducir la locomoción y medir el peso corporal cada dos días. Como se ha observado, la inyección de 50 microlitros de tinta como se ha demostrado da como resultado la infiltración de todo el páncreas, permitiendo la inducción de un fenotipo de enfermedad más homogéneo.En este análisis representativo, en los primeros tres días después de la cirugía, los ratones en el grupo de control perdieron alrededor del seis por ciento de su peso corporal original antes de recuperarse gradualmente y ganar más del 100% de su peso corporal original para el día 21. En contraste, los ratones que recibieron TNBS perdieron alrededor del 15 por ciento de su peso corporal original durante los primeros cinco días después de la cirugía y recuperaron poco menos del 100 por ciento de su peso corporal original para el día 21. En comparación con los ratones de control, los animales inyectados con TNBS mostraron un aumento de la hipersensibilidad mecánica abdominal durante la segunda y tercera semana después de la cirugía.El tamaño y el peso por peso corporal de los páncreas se redujeron significativamente en ratones TNBS en comparación con los páncreas cosechados de animales de control, lo que sugiere una marcada atrofia pancreática en animales tratados con TNBS consistente con los hallazgos en humanos con pancreatitis crónica grave y a largo plazo. El análisis histológico de las secciones de tejido pancreático de ratones tratados con etanol de control mostró una morfología normal, mientras que las secciones de tejido de ratones tratados con TNBS exhibieron una realización vacua con una pérdida masiva de células acinares que fueron reemplazadas por infiltración de células grasas y fibrosis. Evitar que el TNBS inyectado entre en la vejiga gal y el intestino es importante ya que un TNBS tiene efectos dañinos para el tejido.Durante la infusión, mantenga la mano lo más estable posible para evitar la punción que actúa ese conducto biliar. Además de inducir el desarrollo de pancreatitis crónica, este arte de ratones de infusión de conductos biliares se puede utilizar para el desarrollo de otros modelos de enfermedad pancreática. Este modelo de ratón de pancreatitis crónica TNBS se puede utilizar para estudiar tanto la patogénesis como el tratamiento de la pancreatitis crónica, así como otras enfermedades pancreáticas.

a-mouse-model-for-chronic-pancreatitis-via-bile-duct-tnbs-infusion

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video describe el procedimiento para la generación de un modelo de ratón con pancreatitis biliar aguda mediante infusión pancreática de taurocolato de sodio. Este modelo ayuda a estudiar los cambios fisiopatológicos inducidos por el taurocolato de sodio en el páncreas.

Modelo de pancreatitis biliar aguda: un método para generar un modelo de ratón de pancreatitis biliar aguda mediante infusión de conducto pancreático

Los modelos animales para la pancreatitis aguda grave permiten el estudio de los cambios fisiopatológicos en la etapa inicial, facilitando la observación de la evolución de los eventos inflamatorios. Aquí proporcionamos un protocolo para la inducción de pancreatitis biliar aguda grave por infusión retrógrada de taurocolato de sodio en el conducto pancreático de ratones C57BL/ 6 anestesiados.

Taurocolato de sodio inducido pancreatitis aguda grave en ratones C57BL/6

Aquí se describe un modelo de ratón de pancreatitis aguda grave. El procedimiento presentado aquí es muy rápido, simple y accesible, lo que potencialmente permite el estudio de los mecanismos moleculares y las diferentes intervenciones terapéuticas en la pancreatitis aguda de una manera conveniente.

Establecimiento de un modelo de pancreatitis aguda grave en ratones mediante inyección retrógrada de taurocolato de sodio en el conducto biliopancreático

Establecimos un modelo de ratón de fibrosis hepática crónica, que proporciona un modelo animal adecuado para el estudio mecanicista de fibrosis hepática inducida por virus de la atresia biliar (BA) y una plataforma para futuros tratamientos de BA.

Un modelo de ratón de fibrosis hepática crónica para el estudio de la atresia biliar

La administración intraperitoneal de fármacos es un enfoque no invasivo seguro y eficaz para inducir la lesión pancreática. Este estudio comparó cinco protocolos distintos de inyección intraperitoneal en ratones para inducir diversos grados de lesión pancreática y estableció un modelo de lesión pancreática grave para investigar los cambios patológicos y las estrategias de tratamiento para la pancreatitis aguda grave (PAS).

Preparación de un modelo de pancreatitis aguda grave en ratones mediante una combinación de caeruleina e inyección intraperitoneal de lipopolisacáridos

El presente protocolo describe un enfoque novedoso para modelar la pancreatitis obstructiva crónica, que implica la visualización del conducto pancreático y la electrocoagulación del conducto pancreático para causar obstrucción del conducto pancreático.

Un modelo de pancreatitis crónica obstructiva establecido mediante electrocoagulación

Un protocolo para la canalización de la glándula salival submaxilar del ratón a través de conductos de Wharton se describe. Para este experimento, la solución de azul tripán se usa como un tintorero para demostrar cómo esta técnica efectiva entrega infusiones en la glándula blanco, y sugerir la fiabilidad de este nuevo enfoque como un potencial clínico de drogas / terapia celular para la regeneración de las glándulas salivales.

Canulación de la glándula salival submaxilar del ratón a través del conducto de Wharton

Un método para visualizar y cuantificar la estructura 3-dimensional de la vena portal hepática del ratón o del conducto biliar intrahepático se describe. Esta técnica de colada de resina también se puede aplicar a otros sistemas de conductos o vascular y...

3-Dimensional resina de moldeo e Imagen de la vena portal del ratón o Sistema vías biliares intrahepáticas

Se describe un protocolo para infusiones de glucosa y crónicas Intralipid en ratas. Este modelo puede ser utilizado para estudiar el impacto del exceso de nutrientes en la función del órgano y los parámetros fisiológicos.

Un modelo de infusión de nutrientes crónica en la rata

Hipertensión ocular crónica se induce mediante fotocoagulación con láser de la malla trabecular en los ojos de ratón. La presión intraocular (PIO) es elevada durante varios meses después del tratamiento con láser. La disminución de la agudeza visual y la sensibilidad al contraste de los animales experimentales se vigila por medio de la prueba de optomotor.

Un modelo de ratón inducida por láser de la hipertensión ocular crónica a Caracterizar los defectos visibles

Aprende a crear un modelo de pancreatitis crónica en ratones mediante infusión de TNBS en el conducto biliar. Este protocolo optimizado permite estudiar la patogénesis y tratamiento de la enfermedad pancreática.

Un modelo de ratón para la pancreatitis crónica a través de la infusión de TNBS del conducto biliar

Explorar más videos