Name: Trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo blanco epididimario (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Aprende el trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo blanco epididimario en ratones. Este método simplifica la detección de islotes injertados y mejora la viabilidad celular.

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Este estudio fue financiado por una subvención para la investigación científica (C) (19K09839, NS) del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología de Japón.

El siguiente procedimiento se realiza en tres pasos. El primer paso incluye la inducción de diabetes en los ratones receptores y el aislamiento de los islotes donantes. El segundo paso implica la preparación de los islotes antes del trasplante. En el tercer paso, se realiza el trasplante de islotes en el tejido adiposo epididimario y el recubrimiento de los islotes utilizando el tejido adiposo. Después de eso, se evaluaron los efectos terapéuticos. El manejo de los ratones y los procedimientos experimentales realizados en este estudio cumplen con los "Principios de cuidado de animales de laboratorio" (Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio, publicación de los Institutos Nacionales de Salud8ª edición, 2011), y el protocolo experimental fue aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Fukuoka (número de aprobación: 186018).
1. Preparación quirúrgica
<ol><li>Inducción de diabetes: Inducir diabetes en ratones machos receptores de 20-25 g de peso corporal, de 8-12 semanas de edad, mediante inyección intravenosa de solución de estreptozotocina de 18 mg / ml preparada en tampón de citrato 0.1M (180 mg / kg de peso corporal). Los ratones con niveles de glucosa en sangre superiores a 400 mg / dL se consideran diabéticos. Use ratones diabéticos dentro de 1 semana después de la inducción de diabetes antes de la atrofia excesiva del tejido adiposo blanco epididimario para cubrir los islotes.</li>
	<li>Aislamiento de islotes: Realizar aislamiento de islotes murinos un día antes del trasplante siguiendo el método27 de Gotoh para el aislamiento de islotes.</li>
	<li>En resumen, digiera el tejido pancreático usando solución de colagenasa. Aislar los islotes mediante centrifugación por gradiente de densidad utilizando una solución de separación celular adecuada. Luego, cultive islotes durante la noche en una incubadora a 22 °C y 5% deCO2 (se ha informado que el cultivo a <37 °C previene la muerte de los islotes 28,29,30,31). NOTA: Manipule los cultivos de islotes purificados en un armario de seguridad. Filtrar-esterilizar todas las soluciones utilizadas para el aislamiento y cultivo de islotes utilizando un filtro de 0,22 μm.</li>
</ol>2. Preparación de islotes para trasplante
<ol><li>Reúna los instrumentos y materiales apropiados como se indica en la Figura 1A.</li>
	<li>Como las enzimas digestivas como la amilasa y la lipasa pueden provocar lesiones en los islotes aislados y trasplantados y puede producirse una pérdida de islotes al quedar atrapados en tejidos fibrosos contaminantes dentro de la placa de cultivo, antes del trasplante, use fórceps para seleccionar a mano cualquier componente adicional de los islotes del páncreas, incluidos los tejidos acinares y fibrosos (Figura 1B), bajo un microscopio de disección. Después de la recolección, use un colador de celdas para filtrar las células acinares individuales.</li>
	<li>Transfiera los islotes filtrados a una nueva placa de cultivo que contenga cualquier medio de cultivo o solución tampón apropiada (por ejemplo, DMEM con bajo nivel de glucosa, RPMI1640, CMRL1066 o HBSS) suplementada con suero bovino o albúmina para evitar la fijación de islotes al plástico y agite el plato para colocar los islotes en el centro del plato (Figura 1C). Usando una micropipeta P200 y el microscopio, escoja los islotes individuales en un tubo de recolección apropiado (Figura 1D).</li>
	<li>Coloque un filtro celular nuevo de 40 μm encima de un tubo de plástico de 50 ml (Figura 1E izquierda y centro) y lave el filtro con medio nuevo (Figura 1E derecha).</li>
	<li>Utilice una pipeta de 1000 μL para añadir los islotes al colador para separar los islotes y las células acinares individuales (Figura 1 F1 y Figura 1F2). NOTA: Los islotes purificados en el filtro celular serán aproximadamente 100% puros.</li>
	<li>Utilice fórceps para invertir el colador en una nueva placa de cultivo no tratada de 60 o 100 mm de tamaño que contenga medio de cultivo o una solución tampón adecuada complementada con suero bovino o albúmina (Figura 1 F3 y Figura 1F4). Use medio fresco / tampón para enjuagar los islotes en un nuevo plato de cultivo. Luego agregue suficiente medio/tampón a la placa de cultivo para alcanzar un volumen total de aproximadamente 20 ml.</li>
	<li>Contar los islotes bajo un microscopio y dividir el número de islotes por igual entre tubos centrífugos de plástico individuales de 1,5 ml de acuerdo con el número de animales donantes (Figura 1G). Por ejemplo, doscientos equivalentes de islotes (IEQ) de 100-200 μm de dos ratones se agregarían a cada uno de los dos tubos.</li>
	<li>Centrifugar los islotes a 2.100 x g en 1 minuto a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante. Alrededor de 20-30 μL de solución residual normalmente permanecerán en el tubo (Figura 1H).</li>
</ol>3. Trasplante de islotes sobre tejido adiposo epididimario y recubrimiento con tejido adiposo blanco epididimario
<ol><li>Antes de la cirugía, recoja una máquina de anestesia para animales pequeños, microscopio estéreo, fuente de luz, micropipeta de 50-200 μL con puntas de micropipeta de 200 μL, hisopos de algodón, un juego de sutura 4-0 e instrumentos quirúrgicos desinfectados (Figura 2A). Autoclave las tijeras de cobre, tijeras oftálmicas, pinzas de Pean, pinzas y portaagujas. Después del autoclave, sumerja el equipo en una solución de povidona yodada al 1% (Figura 2A). Use hisopos de algodón para la movilización del tejido adiposo blanco del epidídimo y para la hemostasia en casos de sangrado. Utilice una micropipeta con puntas de 50-200 μL para el trasplante de islotes.</li>
	<li>Administrar anestesia al ratón receptor diabético utilizando un agente anestésico inhalado (2% de isoflurano en oxígeno). Aplique lubricante oftálmico en ambos ojos para evitar que se seque. Luego coloque el ratón en posición supina (Figura 2B izquierda) y retire el vello del abdomen para prevenir la infección usando cortapelos y/o crema depilatoria. Desinfecte el abdomen y la región inguinal utilizando al menos tres rondas alternas de una solución de povidona yodada seguida de etanol al 70% (Figura 2B derecha). Antes de la cirugía, confirme la profundidad de la anestesia a través de la ausencia de un reflejo de pellizco del dedo del pie. Proporcione soporte térmico intraoperatorio usando una almohadilla térmica y use una cortina quirúrgica para asegurar el área quirúrgica estéril.</li>
	<li>Incise la piel en el área mediana inferior (Figura 2C izquierda). Se recomienda una incisión en la piel de aproximadamente 2 cm de longitud. Sujete la pared abdominal izquierda con los fórceps de Pean (también se pueden usar fórceps atraumáticos o retractor) y tire del tejido hacia el lado izquierdo del ratón para asegurar el campo quirúrgico (Figura 2C derecha). Después de la laparotomía, disminuya el porcentaje de isoflurano a 1.0-1.5% para el mantenimiento de la anestesia.</li>
	<li>Use un hisopo de algodón para movilizar el intestino delgado y grueso hacia el lado derecho del ratón (es decir, el lado izquierdo del operador). El tejido adiposo blanco del epidídimo izquierdo en la cavidad abdominal se encuentra en el área inguinal izquierda. Movilizar el tejido adiposo blanco del epidídimo y el testículo izquierdo hacia el exterior del abdomen (Figura 2D izquierda) y estirar el tejido (2D derecha).</li>
	<li>Utilice una micropipeta P200 equipada con una punta de pipeta de 200 μL para recoger todo el volumen de islotes de un tubo de 1,5 ml con pipeteo suave (figura 2E izquierda), teniendo cuidado de que no queden islotes en el tubo en el momento de la recolección. Permitir que los islotes recogidos se asienten en la punta de la pipeta por gravedad (Figura 2e derecha).</li>
	<li>Coloque la punta de la micropipeta ligeramente sobre el tejido adiposo distendido. Teniendo cuidado de evitar el lavado excesivo del medio/tampón en la punta, siembre cuidadosamente los islotes en el tejido (Figura 2F izquierda). Después de la siembra, confirme una colocación correcta de los islotes bajo un microscopio de disección (Figura 2F derecha).</li>
	<li>Cubrir los islotes con el tejido adiposo blanco del epidídimo (Figura 2G). No es necesario el uso de suturas o agentes bioaglutinantes.</li>
	<li>Coloque el testículo izquierdo debajo del tejido adiposo blanco del epidídimo y devuelva los tejidos a la cavidad intraperitoneal (Figura 2H). Cierre la piel en dos capas (peritoneo, luego músculo y piel) usando una sutura 4-0 (se pueden usar suturas como nylon o suturas absorbibles) (Figura 2I). Inyecte ácido acetilsalicílico (300 mg/kg; SQ) cerca de la herida para analgesia postoperatoria. Luego coloque el mouse debajo de una lámpara de calor y monitoree hasta que se recupere por completo.</li>
</ol>4. Monitorización después del trasplante de islotes (Resumen)
<ol><li>Evaluar los efectos terapéuticos del trasplante de islotes mediante monitorización de la glucemia, prueba de tolerancia a la glucosa y evaluación histológica en el día postoperatorio (POD) 28.<ol><li>Controle la glucosa en sangre, incluidas las mediciones de glucosa en sangre en la prueba de tolerancia a la glucosa, utilizando un pequeño medidor de glucosa.</li>
		<li>Recoja las muestras de sangre (un poco de microlitros) de la vena de la cola. En cuanto a la evaluación histológica, se detectaron insulina murina (para detectar islotes injertados) y factor von Willebrand (para detección de vasos, que es evidencia para injerto de islotes) en islotes trasplantados en el tejido adiposo epididimario recuperado mediante inmunohistoquímica.</li>
	</ol></li>
</ol>

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El método de trasplante de islotes cubiertos de grasa incorpora técnicas de dos técnicas de trasplante diferentes: trasplante de islotes intraperitoneales y trasplante de islotes de tejido intraadiposo. Como la membrana superficial del tejido adiposo blanco del epidídimo se considera el tejido adiposo blanco que está cubierto por el peritoneo y que está unido al epidídimo, el método de trasplante de islotes cubierto de grasa se puede clasificar anatómicamente como un tipo de trasplante de islotes intraperitoneales. Sin e...

El trasplante de islotes es una terapia de reemplazo celular para pacientes con diabetes mellitus grave. Informes recientes han demostrado que las tasas de independencia de la insulina a los tres años después del trasplante mejoran hasta un 44%1 y que aproximadamente el 80% de los receptores que reciben más de 600.000 equivalentes totales de islotes logran la independencia de la insulina2. Además, en el informe más reciente del Registro Colaborativo de Trasplantes de Islotes, se reveló que los niveles de glucosa en sangre en ayunas se mantuvieron en 60-140 mg / dL durante un período de 5 años en más del 70% de los pacientes que se sometieron solo a un trasplante de islotes. El estudio también determinó que alrededor del 90% de los pacientes que recibieron trasplante de islotes solo o trasplante de islotes después del trasplante de riñón no desarrollaron ningún evento hipoglucémico grave durante más de 5 años3.
Aunque los resultados clínicos de este tratamiento han ido mejorando, aún deben abordarse algunas limitaciones, incluida la necesidad de establecer un sitio de trasplante óptimo. El hígado es un sitio de trasplante típico para el trasplante clínico de islotes porque es el órgano más grande que puede acomodar un gran volumen de islotes. Sin embargo, en algunos pacientes el hígado no está disponible (p. ej., debido a hipertensión portal, hepatitis y/o cirrosis4) y, por lo tanto, otros sitios, incluyendo el espacio subcapsular renal5,6, la bolsa omental 7,8,9,10, el mesenterio 11, el tracto gastrointestinal 12, el músculo esquelético 13, el tejido subcutáneo 13, la médula ósea 14 y el bazo 15 ,16,17, han sido considerados como sitios alternativos de trasplante.
Aunque el trasplante de islotes intraperitoneales se puede realizar fácilmente bajo anestesia local, lo que hace que la cavidad intraperitoneal sea un sitio atractivo para el trasplante clínico de islotes, después del trasplante, los islotes se dispersan por toda la cavidad intraperitoneal, lo que dificulta la detección del injerto de islotes y la confirmación exitosa del injerto. Por lo tanto, la cavidad intraperitoneal no es ampliamente reconocida como un sitio de trasplante clínico ideal. En cambio, se utiliza con frecuencia como modelo de control para estudios preclínicos para investigar la efectividad de los islotes encapsuladostrasplantados 18 y los islotes de bioingeniería19. Sin embargo, es difícil lograr una comparación exacta entre la bioingeniería y los islotes de control debido a los desafíos para realizar una evaluación precisa del injerto.
En contraste, el uso de tejido adiposo blanco intraperitoneal en la bolsa omental8, mesenterio y otras localizaciones extrahepáticas ha sido bien reportado 10,20,21,22,23 y muchos de los estudios que investigaron la función de los islotes de bioingeniería trasplantados usando tejido adiposo blanco pudieron reportar resultados terapéuticos prometedores 20,24,25, 26. Como el uso de tejido adiposo epididimario facilita la detección de islotes trasplantados, se desarrolló el "método de trasplante de islotes cubiertos de grasa", que utiliza tejido adiposo epididimario, para superar las limitaciones del trasplante de islotes intraperitoneales. En este trabajo, se describe el trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo epididimario.

<table><tbody><tr><td>4-0 Nylon</td><td>Alfresa</td><td>ER2004NA45-KF2</td><td>Cierre</td>abdomen</tr><tr><td>Alexa 488-burro conjugado anti-conejillo de</td> indias <td>Jackson Immunoresearch</td><td>706-546-148</td><td>Anticuerpo secundario para el anticuerpo de insulina</td></tr><tr><td>Alexa 647-conjugado burro anti-conejo Jackson</td><td>Immunoresearch</td><td>711-606-152</td><td>Anticuerpo secundario para el factor de von Willebrand</td></tr><tr><td>anticuerpo DMEM, glucosa baja, piruvato</td><td>ThermoFisher Scientific 11885084</td><td></td><td>Islotes de cultivo, islotes de trasplante</td></tr><tr><td>Eosina</td><td>Fujifilm Wako Chemicals</td><td>051-06515</td><td>Uso para la tinción de tejidos por eosina</td></tr><tr><td>Tubos Eppendorf Safe-Lock, 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td><td>islotes colectores&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga cónicos Falcon 15 mL</td><td>Corning</td><td>352095</td><td>islotes colectores</td></tr><tr><td>Falcon 40 &micro; m Filtro de células</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td>Uso para separar islotes de otro tejido pancreático</td></tr><tr><td>Falcon 50 mL Tubos de centrífuga cónicos</td><td>Corning</td><td>352070</td><td>Descartar medio excesivo/tampón</td></tr><tr><td>anti-insulina para conejillos de indias</td><td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td><td>IR002</td><td>Anticuerpo primario para insulina murina</td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td><td>30002</td><td>Uso para teñir tejido con solución de hematoxilina</td></tr><tr><td>isodina 10%</td><td>Shionogi&Co., Ltd.</td><td>sin número de catálogo</td><td>Uso para la desinfección</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Fujifilm Wako Chemicals</td><td>095-06573</td><td>Uso para anestesia</td></tr><tr><td>Labcon 1000 &micro; L ZapSilk Puntas de pipeta de baja retención Labcon</td><td></td><td>1177-965-008</td><td>Uso para separar islotes de otros tejidos pancreáticos</td></tr><tr><td>Labcon 200 &micro; L ZapSilk Puntas de pipeta de baja retención</td><td>Labcon</td><td>1179-965-008</td><td>Uso para sembrar islotes en tejido adiposo blanco epididimario</td></tr><tr><td>Mintsensor</td><td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,</td><td>8AEB02E</td><td>Uso para monitorear la glucosa en sangre</td></tr><tr><td>Pipeman P-1000</td><td>Gilson</td><td>F123602</td><td>Uso para separar islotes de otro tejido pancreático</td></tr><tr><td>Pipeteen P-200</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td>Uso para sembrar islotes en el tejido adiposo blanco del epidídimo</td></tr><tr><td>Conejo anti-vWF</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td>Anticuerpo primario para el factor de von Willebrand murino</td></tr></tbody></table>

trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo blanco epididimario

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

El trasplante de islotes es una terapia de reemplazo celular para la diabetes mellitus grave. La cavidad intraperitoneal suele ser el sitio de trasplante para este procedimiento. Sin embargo, el trasplante de islotes intraperitoneales tiene algunas limitaciones, incluida la eficacia deficiente del trasplante, la capacidad de detección difícil del injerto y la falta de capacidad de injertectomía para el análisis posterior al trasplante. En este documento, el "trasplante de islotes cubiertos de grasa", un método de trasplante de islotes intraperitoneales que utiliza tejido adiposo blanco epididimario, se utiliza para evaluar los efectos terapéuticos de los islotes de bioingeniería. La simplicidad del método radica en la siembra de islotes en el tejido adiposo blanco del epidídimo y el uso del tejido para cubrir los islotes. Si bien este método se puede clasificar como una técnica de trasplante de islotes intraperitoneal, comparte características con el trasplante de islotes de tejido intraadiposo. Sin embargo, el método de trasplante de islotes cubiertos de grasa demuestra efectos terapéuticos más sólidos que el trasplante de islotes de tejido intraadiposo, incluida la mejora de los niveles de glucosa en sangre e insulina plasmática y el potencial de extracción del injerto. Recomendamos la adopción de este método para evaluar los mecanismos de injerto de islotes en tejido adiposo blanco y los efectos terapéuticos de los islotes de bioingeniería.

Para comparar la eficacia del trasplante del trasplante de islotes cubiertos de grasa con la del trasplante intraperitoneal de islotes, se implantó el mismo número de islotes en el peritoneo en el espacio paracólico izquierdo de los animales diabéticos receptores de control. Se observó que los niveles de glucosa en sangre de ratones con trasplante de islotes cubiertos de grasa disminuyeron gradual y significativamente en comparación con los ratones trasplantados con islotes intraperitoneales (p = 0,0023; <strong class="x...

Este método de trasplante de islotes cubiertos de grasa es adecuado para la detección de islotes injertados en la cavidad intraperitoneal. En particular, no requiere el uso de agentes bioaglutinantes o suturas.

Trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo blanco epididimario

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Este protocolo permite evaluar el mecanismo de injerto de islotes en tejido adiposo blanco. La principal ventaja de este método de trasplante de islotes cubiertos de grasa es que es técnicamente fácil de replicar. El método se puede aplicar a otros modelos de enfermedad.Por ejemplo, se puede utilizar para crear un modelo de ratón de cáncer. Demostrando el procedimiento estará Naoaki Sakata, profesor asociado de la Universidad de Fukuoka. Bajo un microscopio de disección, use una micropipeta P 200 para eliminar cualquier componente adicional de los islotes de las digestiones del páncreas, incluidos los tejidos acinares y fibrosos.Luego use un colador celular para filtrar células acinares individuales. Transfiera los islotes filtrados a una nueva placa de cultivo que contenga el medio de cultivo apropiado o la solución tampón complementada con suero bovino o albúmina, y agite el plato para colocar los islotes en el centro. Con una micropipeta P 200, coloque los islotes individuales en un tubo de recolección apropiado.Coloque un nuevo filtro celular de 40 micrómetros encima de un tubo de plástico de 50 mililitros. Utilice una pipeta de 1000 microlitros para añadir los islotes al colador para separar los islotes y las células acinares individuales. Use fórceps para invertir el colador en una nueva placa de cultivo no tratada de 60 o 100 mililitros que contenga medio de cultivo o una solución tampón apropiada, complementada con suero bovino o albúmina.Use medio fresco o amortiguador para enjuagar los islotes en una nueva placa de cultivo, luego agregue suficiente medio o tampón a la placa de cultivo para alcanzar un volumen total de aproximadamente 20 mililitros. Cuente los islotes bajo un microscopio y divida el número de islotes por igual entre tubos centrífugos de plástico individuales de 1,5 mililitros de acuerdo con el número de animales donantes. Centrifugar los islotes a 2, 100 G durante un minuto a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante.Alrededor de 20 a 30 microlitros de solución residual normalmente permanecerán en el tubo. Después de quitar el vello del abdomen para prevenir la infección, coloque al ratón en posición supina. Después de desinfectar el abdomen y la región inguinal, incide la piel en el área mediana inferior, creando una incisión en la piel de aproximadamente dos centímetros de longitud.Sujete la pared abdominal izquierda con fórceps o retractores y tire del tejido hacia el lado izquierdo del ratón para asegurar el campo quirúrgico. Use un hisopo de algodón para movilizar el intestino delgado y grueso hacia el lado derecho del ratón. El tejido adiposo blanco epidérmico izquierdo en la cavidad abdominal se encuentra en el área inguinal izquierda.Movilice el tejido adiposo blanco epidérmico y el testículo izquierdo hacia el exterior del abdomen y estire el tejido. Utilice una micropipeta P 200 para recoger todo el volumen de islotes de un tubo de 1,5 mililitros, teniendo cuidado de que no queden islotes en el tubo después de la recogida. Permita que los islotes recogidos se asienten en la punta de la pipeta por gravedad.Coloque la punta de la micropipeta ligeramente sobre el tejido adiposo distendido, teniendo cuidado de evitar el lavado excesivo del medio o tampón en la punta. Siembra cuidadosamente los islotes en el tejido. Después de la siembra, confirme la colocación correcta de los islotes bajo un microscopio de disección.Cubra los islotes con el tejido adiposo blanco epidérmico, luego coloque el testículo izquierdo debajo del tejido adiposo blanco episomal y devuelva los tejidos a la cavidad intraperitoneal. Cierre la piel en dos capas con una sutura 4-o. Cuando termine, coloque el mouse bajo una lámpara de calor y monitoréelo hasta que se recupere por completo.Para comparar la eficacia del trasplante del trasplante de islotes cubiertos de grasa con la del trasplante intraperitoneal de islotes, se implantó el mismo número de islotes en el peritoneo en el espacio paracólico izquierdo de los animales diabéticos receptores de control. Se observó que los niveles de glucosa en sangre de ratones con trasplante de islotes cubiertos de grasa disminuyeron gradual y significativamente en comparación con los ratones trasplantados con islotes intraperitoneales. La prueba de tolerancia a la glucosa intraperitoneal se realizó un mes después del trasplante.La glucosa en sangre en ratones con trasplante de islotes cubiertos de grasa se mantuvo en niveles más bajos que los observados en ratones trasplantados con islotes intraperitoneales. Se utilizó el examen histológico para evaluar el injerto de islotes en el tejido adiposo blanco epidérmico. En animales receptores de trasplante de islotes cubiertos de grasa, la tinción de hematoxilina eoceno reveló la presencia de islotes dentro del tejido adiposo blanco epidérmico.Además, la tinción de anticuerpos conjugados con fluorescencia de islotes positivos para insulina facilitó la detección de microvasos positivos para el factor von Willebrand dentro del tejido adiposo blanco epidérmico de todos los ratones receptores. Para tener éxito con este procedimiento, asegúrese de permitir que los islotes se asienten completamente en la punta de la pipeta y siembrarlos en el tejido adiposo sin derramarse.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

El protocolo fue desarrollado para ofrecer de forma limpia y fácil de islotes o células bajo la cápsula renal de ratones. Las células se concentran en pastillas en el tubo final utilizado para trasplantar las células en la cápsula renal. La facilidad de esta técnica reduce el estrés de las células y el ratón.

El trasplante de islotes pancreáticos en la cápsula renal de ratones diabéticos

El trasplante de islotes aislados se ha propuesto ser un tratamiento potencial para la diabetes tipo 1. Aquí se describe un método para aislar los islotes de páncreas de ratón y trasplantarlas en el espacio subcapsular del riñón.

Un método para el aislamiento de los islotes murinos y Trasplante Renal subcapsular

Este protocolo demuestra el aislamiento de los islotes murinos y la siembra en un andamio decelularizado. Los islotes soportados por el andamio fueron trasplantados en la almohadilla de grasa epididimal de ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina (STZ). Los islotes sobrevivieron en el sitio del trasplante e invirtieron la condición hiperglucémica.

Transplante de islotes en el cojín de grasa epididimal de ratones diabéticos

Se introduce un método para el trasplante omental de islotes en un ratón. Los islotes aislados se mezclan con hidrogel y la mezcla se coloca en la bolsa omental de un ratón diabético. Luego, se controla la glucosa en la sangre, y se realiza el análisis inmuno-histoquímico.

Un método para el trasplante de islotes pancreáticos para el epiplón en ratón

Trasplante de islotes pancreáticos es una manera de lograr normoglycemia en diabetes tipo 1. Este artículo se centra en la técnica de trasplante vía intraportal para mantener niveles normales de glucosa en ratones diabéticos.

Intraportal trasplante de islotes pancreáticos en modelo murino

Aquí, presentamos un protocolo para la validación in vivo de terapia celular basada en hidrogel, ilustrada por el ejemplo del trasplante de islotes pancreáticos. Islote de matriz h-Omental (hOMING) implantación de relleno permite la implantación de una mezcla de células-hidrogel entre las capas omentales, cerca de los vasos sanguíneos, para maximizar el engraftment en un ambiente metabólico adecuado.

Trasplante de islotes intra-Omental utilizando relleno de islote de matriz h-Omental (hOMING)

En este protocolo, se describe un método de aislamiento de islotes murinos y trasplante en el tejido adiposo blanco subcutáneo inguinal. Los islotes murinos sinémicos aislados se trasplantan en un receptor murino utilizando un hidrogel de membrana del sótano. Se controla el nivel de glucosa en sangre de los receptores y se realiza un análisis histológico de los injertos de islos.

Modelo de trasplante de tejido adiposo blanco subcutáneo inguinal (ISWAT) de islotes murinos

Aquí presentamos procedimientos quirúrgicos refinados para realizar con éxito el trasplante intraportal de islotes, un procedimiento quirúrgico clínicamente relevante pero técnicamente desafiante, en ratones.

Minimizar el sangrado de la vena porta posterior a la infusión durante el trasplante intrahepático de islotes en ratones

Proporcionamos un protocolo mínimamente invasivo para el trasplante intramuscular de islotes de células madre pancreáticas derivadas de células madre humanas en ratones inmunodeficientes, para implantación in vivo y análisis posteriores.

Trasplante intramuscular de células endocrinas pancreáticas derivadas de células madre pluripotentes humanas en ratones

Con el fin de comprender los mecanismos celulares y moleculares que subyacen a la formación de neotejido y el desarrollo de estenosis en las válvulas del corazón de la ingeniería tisular, se desarrolló un modelo murino de trasplante heterotópico de válvula cardiaca. Una válvula cardíaca pulmonar fue trasplantado al receptor mediante la técnica de trasplante cardíaco heterotópico.

El trasplante de la válvula pulmonar Utilizando un modelo de ratón de heterotópico trasplante cardiaco

Aprende el trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo blanco epididimario en ratones. Este método simplifica la detección de islotes injertados y mejora la viabilidad celular.

Trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo blanco epididimario

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