Name: Muestreo, identificación y caracterización de la liberación de microplásticos del biberón de polipropileno durante el uso diario (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-24T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: Aprende a cuantificar microplásticos liberados de biberones de polipropileno mediante microscopía óptica, espectroscopía Raman y AFM. Este protocolo rentable simula condiciones de uso real con alta recuperación.

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Los autores agradecen el apoyo financiero a Enterprise Ireland (número de subvención CF20180870) y Science Foundation Ireland (números de subvención: 20/FIP/PL/8733, 12/RC/2278_P2 y 16/IA/4462). También reconocemos el apoyo financiero de la Beca de la Escuela de Ingeniería del Trinity College de Dublín y el Consejo de Becas de China (201506210089 y 201608300005). Además, agradecemos la ayuda profesional de la Prof. Sarah Mc Cormack y los equipos técnicos (David A. McAulay, Mary O'Shea, Patrick L.K. Veale, Robert Fitzpatrick y Mark Gilligan, etc.) del Trinity Civil, Structural and Environmental Department y amber Research Centre.

1. Preparación de agua caliente
<ol><li>Para todos los equipos que entren en contacto con las muestras, utilice vidrio limpio hecho de borosilicato 3.3 para evitar cualquier posible contaminación. Limpie a fondo toda la cristalería. Precaución:Los arañazos o manchas de imperfección preexistentes en la cristalería pueden liberar partículas durante el proceso de calentamiento y agitación. Sugerimos que los usuarios revisen la cristalería y eviten el uso de la cristalería rayada. Nuestra comparación de la cristalería hecha de diferentes vidrios (como soda-cal y borosilicato) mostró que el borosilicato 3.3 libera la menor cantidad de partículas de vidrio (puede ser examinada por espectroscopia Raman), y recomendamos el uso de cristalería de borosilicato 3.3 en todas las pruebas.</li>
	<li>Vierta 360 mL de agua di en un vaso de precipitados de vidrio. Cubra el vaso de precipitados con un disco de vidrio limpio. Luego muévalo a un horno de microondas nuevo y calienta durante 2,5 minutos a plena potencia del horno. Después de agitar suavemente para eliminar cualquier gradiente de temperatura potencial debido a un calentamiento desigual, la temperatura del agua dentro del beaker es de 70 ° C y está lista para la preparación de la muestra.</li>
	<li>Prepare agua de 95 °C para la esterilización por BFB vertiendo 1 L de agua di en cristalería y calentando en un horno de microondas durante 14 minutos. Precaución:Nunca use hervidores de plástico para preparar agua caliente. El propio hervidor de plástico libera millones de diputados en el agua caliente durante el proceso de ebullición13.</li>
</ol>2. Liberación de MP durante la preparación de la fórmula
NOTA: Siguiendo cuidadosamente el proceso estándar de preparación de fórmulas (limpieza, esterilización y mezcla) recomendado por la OMS21,los MPs liberados de los BBF durante la preparación de la fórmula se imitan en los siguientes 3 pasos.
<ol><li>Recoja los nuevos productos BFB de las farmacias y límpielos a fondo después de retirar el producto de su embalaje. Lave cada BFB con agua detergente (repetir 3 veces a temperatura ambiente-RT) y agua destilada (repetida 3 veces, RT). Finalmente, enjuague el BFB 3 veces usando agua DI en RT. Precaución:No limpie el BFB usando sonicación. Aunque la sonicación es ampliamente utilizada en los laboratorios para la mezcla y la limpieza, la sonicación de BFB puede dañar gravemente la superficie de la botella y causar la liberación de MP de los productos de PP dentro de 1 minuto.</li>
	<li>Remoje el BFB en agua di de 95 °C (sección 1.3) para esterilizar la botella. Para evitar la flotación de la BFB, presione ligeramente el exterior de la BFB utilizando una pinza de acero inoxidable y asegúrese de que todo el cuerpo de la botella se sumerja en el agua.<ol>
<li>Después de 5 minutos, saque la botella y muévala a un disco de vidrio limpio. Durante la etapa de secado al aire, invierta la botella en el disco de vidrio hasta que no haya evidencia de gotitas.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verter 180 ml de agua caliente de DI (70 °C, de la sección 1.2, correspondiente a las directrices de la OMS) en la botella secada al aire. Luego cubra la botella inmediatamente usando una placa de Petri de vidrio y colótela en una cama temblorosa.<ol>
<li>Para simular el proceso de mezcla de fórmulas, agite la botella a una velocidad de 180 rpm durante 60 segundos. Después de agitar, mueva la botella a una placa de vidrio limpia y deje que se enfríe.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Preparación de la muestra para la identificación y cuantificación de MP
<ol><li>Sonicar y enjuagar a fondo todas las partes del filtro de vidrio (diámetro de 25 mm, embudo de vidrio, base de soporte de vidrio fritado y matraz receptor) utilizando agua DI.<ol>
<li>Coloque una pieza de filtro de membrana de policarbonato-PC recubierto de oro (tamaño del poro de 0.8 μm, espesor de la capa de recubrimiento au de 40 nm) en el centro de la base de vidrio.</li>
		<li>Monte el embudo de vidrio y la abrazadera de acero inoxidable para fijar el filtro de membrana. Finalmente conecte el filtro de vidrio montado a una bomba de vacío (Figura 2). Precaución:Para asegurarse de que la membrana se adhiere suavemente en la superficie de la base de vidrio, es importante mantener la base de vidrio húmeda. Si es necesario, se deben dejar caer 1-2 gotas de agua DI en la superficie de la base de vidrio antes de colocar el filtro de membrana.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mezcle cuidadosamente la muestra de agua enfriada en el BFB (de la Sección 2.3) y luego transfiera una cierta cantidad de la muestra de agua al embudo de vidrio usando una pipeta de vidrio. Encienda la bomba de vacío para permitir que la muestra de agua se filtre lentamente a través del filtro de membrana.<ol>
<li>Después de filtrar, lave el interior del embudo de vidrio con agua DI para asegurarse de que no haya partículas que se peguen en el embudo. Precaución: Para evitar la superposición de las partículas en la superficie del filtro de membrana, es importante elegir cuidadosamente el volumen correcto de agua que se pasa a través del filtro. Los BBF liberan un gran número de partículas, por lo que se necesitan 3-5 filtros de membrana para filtrar todo el volumen de la muestra de agua.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Desconecte la bomba de vacío y desmonte el filtro de vidrio. Luego saque cuidadosamente el filtro de membrana usando una pinza de acero inoxidable y muévalo a un vidrio de cubierta limpia. Fije el filtro de membrana en el vidrio de la cubierta con un pequeño pedazo de cinta de papel. Guarde inmediatamente la muestra en una placa de Petri de vidrio limpio.</li>
</ol>4. Preparación de la muestra para la caracterización de la topografía AFM
<ol><li>Prepare una oblea de silicio limpia. Deje caer una muestra de agua de 50 μL (del punto 2.3) en la superficie de la oblea de silicio y séquela en un horno a una temperatura de alrededor de 103 °C. Repita este proceso si el nivel de MP en la muestra de agua es bajo.</li>
	<li>Después de 1 hora de secado, mueva la oblea a una placa de Petri de vidrio limpio y deje que se enfríe en un desecador.</li>
	<li>Después de que la oblea se haya enfriado, guarde la muestra en una placa de Petri de vidrio seco y limpio.</li>
</ol>5. Identificación y cuantificación de MP mediante espectroscopia Raman
<ol><li>Calibre el sistema Raman usando una corrección de orden cero y una oblea de silicio. Asegúrese de que la ubicación máxima de la oblea de silicio está en 520,7 cm-1 y que la intensidad máxima es superior a 6000 u.a. cuando la intensidad del láser está en 100%.</li>
	<li>Configure los parámetros del sistema Raman para obtener espectros MP de alta señal a ruido evitando la quema de MPs. Ajuste el sistema de la siguiente manera: láser de excitación de 532 nm, elimine los rayos cósmicos, intensidad del láser del 10% (potencia del láser de 0,18 mW), resolución espectral de 1,5 cm-1,tiempo de exposición de 10-20 segundos, acumulaciones de 10-40 veces y rango espectral de 200-3200 cm-1. La Figura 3 mostró espectros típicos de MPs con tiempos de acumulación de 1 s a 400 s. Precaución:No pruebe las partículas usando 100% láser directamente para evitar la quema rápida (se puede quemar en 1 minuto si la partícula es pequeña). Usar baja intensidad (10-50%) para realizar la prueba primero.</li>
	<li>Coloque la muestra de filtro (de la Sección 3.3) en el centro de la etapa de muestra Raman. Elija cuatro puntos representativos (2 puntos están en el área media, mientras que otros 2 puntos están cerca del borde del área de trabajo, Figura 3C)en el filtro de membrana para realizar la prueba (área total de prueba alrededor de 1,5 mm2).</li>
	<li>Observe y fotografíe las partículas en la superficie del filtro de membrana utilizando un microscopio óptico (100x) seguido de una identificación química mediante espectroscopia Raman.<ol>
<li>Comparar el espectro Raman obtenido con los espectros poliméricos estándar de referencia (a partir de material a granel de BFB y publicación anterior22).</li>
		<li>Determinar la propiedad química de las partículas utilizando los picos intensivos en el rango de 2780-2980, 1400-1640 y 709-850 cm-1,correspondientes a las vibraciones de estiramiento de los grupos CH/CH2/CH3 y C-C asociados a materiales poliméricos (Figura 3).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Analice el tamaño y la cantidad de los MPs identificados usando ImageJ.<ol>
<li>Obtener la concentración de MPs en la muestra de agua en función del área ensayada, el área de trabajo total (227 mm2)y el volumen de muestra filtrada conocido.</li>
		<li>Clasifique los MPs confirmados en 5 grupos en términos del tamaño: 0.8-5 μm, 5-20 μm, 20-50 μm, 50-100 μm y > 100 μm.</li>
		<li>Finalmente, determine la cantidad de MPs en un litro de muestra de agua en función del volumen de muestra filtrada, el número de MPs registrados y el área probada del filtro de membrana.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. Caracterización topográfica de MP utilizando AFM
<ol><li>Equipe el sistema AFM (NT-MDT) con una sonda de modo de roscado. Calibre el sistema utilizando un estándar de altura de paso (SHS). Configure el sistema dentro de condiciones de trabajo óptimas: la velocidad de escaneo es de 1 Hz, el tamaño de escaneo es de 10-50 μm, la frecuencia de ajuste es de alrededor de 160 kHz y la línea de escaneo es de 512 píxeles.</li>
	<li>Fije la oblea de silicio (de la Sección 4.3) en la etapa de muestra de AFM. Observe y fotografíe las partículas objetivo en la superficie de la oblea de silicio, seguidas de la identificación química utilizando el método de la Sección 5.</li>
	<li>Cambie el sistema al modo AFM (la espectroscopia Raman y el AFM se ensamblan en un solo sistema) y pruebe la topografía de los MPs identificados.</li>
	<li>Analice los datos 3D utilizando el software Gwyddion 2.54. Utilice la opción de perfil para obtener las dimensiones de la partícula y las alturas medias, mientras que la vista 3D para obtener la estructura 3D.</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar. La presentación del material en esta publicación no implica la expresión de opinión alguna por parte del Trinity College de Dublín sobre empresas específicas o de productos de ciertos fabricantes y no implica que estén respaldados, recomendados, criticados o de otro modo por el Trinity College de Dublín en lugar de otros de naturaleza similar. Salvo errores y omisiones. Se han tomado todas las precauciones razonables para verificar la información contenida en esta publicación. Sin embargo, el material publicado se distribuye sin garantía de ningún tipo, ya sea expresa o implícita. La responsabilidad de la interpretación y el uso del material recae en el lector. En ningún caso el Trinity College dublinés será responsable de los daños y perjuicios derivados de su uso.

Aunque el estudio de los parlamentarios en el medio marino y de agua dulce ha sido ampliamente reportado y se ha desarrollado el protocolo estándar pertinente17,el estudio de los productos de plástico de uso diario es un área de investigación emergente importante. Las diferentes condiciones ambientales experimentadas por los productos de plástico para el hogar significan que se necesitan cuidados y esfuerzos adicionales para obtener resultados confiables. El protocolo de estudio debe ser consisten...

La mayoría de los tipos de plásticos no son biodegradables, pero pueden descomponerse en pequeños trozos debido a procesos químicos y físicos como la oxidación y la fricción mecánica1,2. Las piezas de plástico menores de 5 mm se clasifican como microplásticos (MPs). Los diputados son omnipresentes y se encuentran en casi todos los rincones del mundo. Se han convertido en una preocupación mundial debido al riesgo potencial para los seres humanos y la vida silvestre3,4. Hasta la fecha, se han encontrado acumulaciones significativas de MPs en peces, aves, insectos5,6, así como mamíferos (ratón, en el intestino, riñón e hígado7,8). Los estudios encontraron que la exposición y acumulación de MPs puede dañar el metabolismo lipídico de los ratones7,8. Una evaluación del riesgo centrada en los peces encontró que los diputados sub-micrón pueden penetrar la barrera sangre-cerebro y causar daño cerebral9. Cabe señalar que hasta la fecha todos los resultados del riesgo de MP se han obtenido de estudios con animales, mientras que el riesgo específico para la salud humana aún se desconoce.
En los últimos 2 años, las preocupaciones sobre la amenaza de mp a la salud humana aumentaron sustancialmente con la confirmación de los niveles de exposición humana a los diputados. La acumulación de MPs se ha encontrado en el colon humano10,la placenta de las mujeres embarazadas11 y las heces adultas12. Una determinación precisa de los niveles de liberación de MP es crucial para identificar las fuentes de exposición, evaluar el riesgo para la salud y evaluar la eficiencia de cualquier medida de control potencial. En los últimos años, algunos estudios de caso informaron que los plásticos de uso diario (es decir, el hervidor de plástico13 y los vasos de un solo uso14)pueden liberar cantidades extremadamente altas de diputados. Por ejemplo, los vasos de papel desechables (con interiores laminados con películas de polietileno-PE o copolímero), liberaron aproximadamente 250 MPs de tamaño micronómico y 102 millones de partículas del tamaño de sub-micras en cada mililitro de líquido después de la exposición a agua caliente de 85-90 °C14. Un estudio de envases de alimentos de polipropileno (PP) informó que hasta 7,6 mg de partículas de plástico se liberan del contenedor durante un solo uso15. Se registraron niveles aún más altos a partir de bolsitas de té hechas de tereftalato de polietileno (PET) y nylon, que liberaron aproximadamente 11.6 mil millones de diputados y 3.1 mil millones de diputados de tamaño nanodimensional en una sola taza (10 mL) de la bebida16. Dado que estos productos de plástico de uso diario están diseñados para la preparación de alimentos y bebidas, la liberación de grandes cantidades de diputados es probable y su consumo es una amenaza potencial para la salud humana.
Los estudios sobre la liberación de MP de productos de plástico para el hogar (es decir, el hervidor de plástico13 y los vasos de un solo uso14)se encuentran en una etapa temprana, pero se espera que este tema reciba una atención cada vez mayor de los investigadores y el público en general. Los métodos requeridos en estos estudios son significativamente diferentes de los utilizados en estudios marinos o de agua dulce a temperatura ambiente donde ya existen protocolos bien establecidos17. Por el contrario, los estudios que implican el uso diario de productos de plástico domésticos implican una temperatura mucho más alta (hasta 100 °C), con en muchos casos repetidos de vuelta a la temperatura ambiente. Estudios previos señalaron que los plásticos en contacto con el agua caliente pueden liberar a millones de diputados16,18. Además, el uso diario de productos de plástico puede cambiar con el tiempo las propiedades del propio plástico. Por lo tanto, es crucial desarrollar un protocolo de muestreo que imite con precisión los escenarios de uso diario más comunes. La detección de partículas de tamaño microdimensionado es otro desafío importante. Estudios anteriores señalaron que los MPs liberan de productos plásticos son menores de 20 μm16,19,20. La detección de este tipo de MPs requiere el uso de filtros de membrana lisa con tamaño de poro pequeño. Además, es necesario distinguir los MPs de los posibles contaminantes capturados por el filtro. La espectroscopia Raman de alta sensibilidad se utiliza para el análisis de composición química, lo que tiene la ventaja de evitar la necesidad de una alta potencia láser que se sabe que destruye fácilmente pequeñas partículas20. Por lo tanto, el protocolo debe combinar procedimientos de manejo sin contaminación con el uso de filtros de membrana óptimos y para un método de caracterización que permita una identificación de MP rápida y precisa.
El estudio reportado aquí se centró en el biberón de alimentación para bebés (BFB) a base de PP, uno de los productos de plástico más utilizados en la vida diaria. Se encontró que un alto número de diputados son liberados de plástico BFB durante la preparación de la fórmula18. Para un estudio adicional de la liberación de MP de plásticos diarios, el método de preparación y detección de muestras para BFB se detalla aquí. Durante la preparación de la muestra, se siguió cuidadosamente el proceso estándar de preparación de la fórmula (limpieza, esterilización y mezcla) recomendado por la OMS21. Al diseñar los protocolos en torno a las directrices de la OMS, nos aseguramos de que la liberación de MP de los BBF imitara el proceso de preparación de la fórmula para bebés utilizado por los padres. El proceso de filtro fue diseñado para recoger con precisión los MPs liberados de BFBs. Para la identificación química de los MPs, las condiciones de trabajo para la espectroscopia Raman se optimizaron para obtener espectros limpios y fácilmente identificables de los MPs, evitando al mismo tiempo la posibilidad de quemar las partículas objetivo. Finalmente, se desarrolló el procedimiento de prueba óptimo y la fuerza aplicada para permitir un mapeo topográfico preciso en 3 dimensiones de los MPs utilizando microscopía de fuerza atómica (AFM). El protocolo(Figura 1)que se detalla aquí proporciona un método fiable y rentable para la preparación y detección de muestras mp, que puede beneficiar sustancialmente a futuros estudios de productos plásticos.

<table><tbody><tr><td>Diagrama en voladizo AFM</td><td>NANOSENSORS</td><td>PPP-NCSTAuD-10</td><td>Para obtener la topografía tridimensional de PP MPs</td></tr><tr><td>Microscopio de fuerza atómica</td><td>Nova</td><td>NT-MDT</td><td>Para obtener la topografía tridimensional de PP MPs</td></tr><tr><td>Detergente</td><td>Fairy Original</td><td>1015054</td><td>Para limpiar el nuevo producto</td></tr><tr><td>Filtro de membrana de policarbonato recubierto de oro-PC-0,8 mmm</td><td>APC, Alemania</td><td>0.8um25mmOro</td><td>Para recolectar microplásticos en el agua y beneficiarse de la prueba Raman</td></tr><tr><td>Gwyddion software</td><td>Gwyddion</td><td>Gwyddion2.54</td><td>Para determinar la topografía de MPs</td></tr><tr><td>Software ImageJ</td><td>Institutos Nacionales de Salud de EE. UU.</td><td>No, de uso gratuito</td><td>Para determinar el tamaño de MP</td></tr><tr><td>Horno de microondas</td><td>De'longhi, Italia</td><td>815/1195</td><td>Preparación de agua caliente</td></tr><tr><td>Microscopio óptico, x100</td><td>Mitutoyo, Japón</td><td>46-147</td><td>Para encontrar y observar la pequeña</td></tr><tr><td>espectroscopia Raman</td> MP Sistema <td>Raman confocal InVia</td> de <td>Renishaw</td><td>Para determinar químicamente el PP-MPs</td></tr><tr><td>Lecho de agitación-SSL2</td><td>Stuart, Reino Unido</td><td>51900-64</td><td>Para imitar el proceso de mezcla durante la preparación de muestras</td></tr><tr><td>Esferas microplásticas de poliestireno estándar Polysciences</td><td>, Europa</td><td>64050-15</td><td>Para validar la robustez de protocolo actual</td></tr><tr><td>Pipeta Tansfer con punta de vidrio</td><td>Macro, Marca</td><td>26200</td><td>Para transferir la muestra de agua al filtro de vidrio</td></tr><tr><td>Limpiador ultrasónico</td><td>Witeg, Alemania</td><td>DH. WUC. D06H</td><td>Para limpiar la cristalería</td></tr><tr><td>Bomba de vacío</td><td>ILMVAC GmbH</td><td>105697</td><td>Para filtrar la muestra de agua</td></tr></tbody></table>

muestreo, identificación y caracterización de la liberación de microplásticos del biberón de polipropileno durante el uso diario

Sampling, Identification and Characterization of Microplastics Release from Polypropylene Baby Feeding Bottle during Daily Use

Los microplásticos (MPs) se están convirtiendo en una preocupación global debido al riesgo potencial para la salud humana. Los estudios de casos de productos de plástico (es decir, vasos y hervidores de plástico de un solo uso) indican que la liberación de MP durante el uso diario puede ser extremadamente alta. Determinar con precisión el nivel de liberación de MP es un paso crucial para identificar y cuantificar la fuente de exposición y evaluar/controlar los riesgos correspondientes derivados de esta exposición. Aunque los protocolos para medir los niveles de MP en el mar o el agua dulce han sido bien desarrollados, las condiciones experimentadas por los productos de plástico domésticos pueden variar ampliamente. Muchos productos de plástico están expuestos a altas temperaturas frecuentes (hasta 100 °C) y se enfrían de nuevo a temperatura ambiente durante el uso diario. Por lo tanto, es crucial desarrollar un protocolo de muestreo que imite el escenario real de uso diario para cada producto en particular. Este estudio se centró en biberones de alimentación para bebés a base de polipropileno ampliamente utilizados para desarrollar un protocolo rentable para los estudios de liberación de MP de muchos productos de plástico. El protocolo desarrollado aquí permite: 1) prevención de la contaminación potencial durante el muestreo y la detección; 2) aplicación realista de escenarios de uso diario y recogida precisa de los diputados liberados de los biberones de alimentación de bebés sobre la base de las directrices de la OMS; y 3) determinación química rentable y mapeo topográfico físico de los diputados liberados por los biberones de alimentación de bebés. Sobre la base de este protocolo, el porcentaje de recuperación utilizando poliestireno MP estándar (diámetro de 2 μm) fue de 92,4-101,2%, mientras que el tamaño detectado fue de alrededor del 102,2% del tamaño diseñado. El protocolo que se detalla aquí proporciona un método confiable y rentable para la preparación y detección de muestras de MP, que puede beneficiar sustancialmente los estudios futuros de la liberación de MP de productos de plástico.

Para validar este protocolo, la muestra de agua se preparó mediante la adición de esferas microplásticas de poliestireno estándar (un diámetro de 2,0 ± 0,1 μm) al agua de DI. La cantidad de MP agregada correspondió a 4.500.000 partículas/L, que es similar al nivel de liberación de MP de BFBs. Siguiendo las secciones 2-3 del protocolo, los MPs fueron recogidos con éxito (Figura 4A) y la tasa de recuperación fue de 92.4-101.2%. Esta tasa de recuperación es comparable a un estudio anterior sobr...

Este estudio detalló un protocolo fiable y rentable para la recogida y detección de microplásticos a partir del uso diario de productos plásticos.

Muestreo, identificación y caracterización de la liberación de microplásticos del biberón de polipropileno durante el uso diario

Microplastics (MPs) are becoming a global concern due to the potential risk to human health. Case studies of plastic products (i.e., plastic single-use ...

Los microplásticos se están convirtiendo en una preocupación mundial debido al riesgo potencial para la salud humana. Este estudio se centró en biberones de alimentación para bebés a base de polipropileno ampliamente utilizados para desarrollar un protocolo rentable adecuado para un estudio de MP de muchos productos de plástico. Este protocolo proporciona los detalles de la preparación, identificación y caracterización de la muestra.Puede beneficiar sustancialmente los estudios futuros de microplásticos liberados de productos plásticos. Microplásticos liberados durante la preparación de la fórmula. Remoje el biberón de alimentación del bebé en agua desionizada de 95 grados Centígrados para esterilizar el biberón.Para evitar que la botella flote, presione ligeramente con una pinza de acero inoxidable para asegurarse de que todo el cuerpo de la botella esté sumergido en el agua. Después de cinco minutos, saque la botella y muévala a un disco de vidrio limpio para esperar el secado al aire. Después del secado al aire, vierta 180 mililitros de agua desionizada de 70 grados Celsius en la botella.Luego cubra la botella inmediatamente usando una placa de Petri de vidrio y colótela en una cama temblorosa. Para estimular el proceso de mezcla de fórmulas, agite la botella a una velocidad de 180 rpm durante 60 segundos. Después de agitar, mueva la botella a una placa de vidrio limpia y deje que se enfríe.Preparación de muestras para identificación y cuantificación de microplásticos. El filtro de membrana es fundamental para la captura, visualización y detección de microplásticos. Utilizamos el filtro de membrana de policarbonato recubierto de oro para capturar microplásticos.Coloque un pedazo de filtro de membrana en el medio de una base de vidrio. Luego monte el embudo de vidrio y la abrazadera de acero inoxidable para fijar el filtro de membrana y conecte el filtro de vidrio con una bomba de vacío después de agitar suavemente la muestra de agua enfriada en el biberón. Luego transfiera una cierta cantidad de muestra de agua al embudo de vidrio usando una pipeta de vidrio.Encienda la bomba de vacío para permitir que la muestra de agua se filtre lentamente a través del filtro de membrana. Después de filtrar, lave el interior del embudo de vidrio con agua desionizada para asegurarse de que no haya partículas que se peguen al embudo. Desconecte la bomba de vacío y desmonte el filtro de vidrio.Luego, saque cuidadosamente el filtro de membrana usando una pinza de acero inoxidable y muévalo a un vidrio de cubierta limpia. Guarde la muestra en una placa de Petri de vidrio limpio inmediatamente. Identificación y cuantificación de microplásticos.Saque cuidadosamente la muestra de la placa de Petri de vidrio y coloque la muestra de filtro en el medio de la etapa de muestra raman. Elija los puntos representativos en el filtro de membrana. Observe y fotografíe las partículas en la superficie del filtro de membrana usando un microscopio óptico.Configure el sistema Raman y pruebe estas partículas una por una utilizando láser de excitación de 532 nanómetros a una intensidad del 10%. Compare el espectro Raman obtenido con los espectros estándar referenciados. La espectroscopia AFM y Raman se ensamblan en un sistema.Por lo tanto, cambie el sistema al modo AFM y pruebe la topografía de partículas microplásticas interesantes. Resultados de las pruebas de microplásticos. Para validar este protocolo, las esferas estándar de microplásticos de poliestireno se añadieron al agua de DI y se probaron utilizando el protocolo desarrollado.Los microplásticos ps fueron recogidos y detectados con éxito. La partícula dentro de la caja roja fue confirmada como microplástico típico del poliestireno. Siguiendo el protocolo, la tasa de recuperación de microplásticos fue de 92 a 101%Por lo tanto, el protocolo desarrollado es confiable para la prueba de biberón de alimentación del bebé.El protocolo se utilizó para probar los microplásticos liberados de ocho productos populares de biberón para bebés, y encontró que los niveles de microplásticos liberados oscilaban entre 1,3 millones y 16,2 millones de partículas por litro durante la preparación de la fórmula. La imagen topográfica 3D mostró además que la textura superficial de los microplásticos liberados es rica en protuberancias y valles de tamaño nanodimensionado, lo que puede aumentar sustancialmente su capacidad de absorción. conclusión. El estudio mostró que los productos plásticos que se utilizan diariamente son fuentes muy importantes para la exposición a microplásticos humanos.El protocolo que se detalla aquí proporciona un método fiable y rentable para la preparación y detección de muestras de microplásticos, que puede beneficiar sustancialmente a los estudios futuros de liberación de microplásticos de productos plásticos.

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El protocolo a continuación se describe la metodología para: muestreo microplásticos en la superficie del mar, la separación de identificación microplástica y química de las partículas. Este protocolo está en línea con las recomendaciones para el seguimiento microplásticos publicados por el Subgrupo Técnico DMEM sobre Basura Marina.

Protocolo para microplásticos muestreo en la superficie del mar y Análisis de las muestras

Los microplásticos actúan como vector de contaminantes orgánicos potencialmente tóxicos con efectos impredecibles. Este protocolo describe una metodología alternativa para evaluar los niveles de plaguicidas organoclorados adsorbidos en los gránulos de plástico e identificar la estructura química del polímero. El foco está en la extracción de fluido presurizado y en la reflectancia total atenuada de la transformada de Fourier espectroscopía infrarroja.

Extracción de plaguicidas organoclorados de pellets de plástico y análisis de tipos de plástico

Mayoría de microplastic la investigación hasta la fecha se ha producido en los sistemas marinos donde son relativamente bajos niveles sólidos suspendidos. Enfoque está ahora cambiando a sistemas de agua dulce, que pueden presentar sedimentos altas cargas y residuos flotantes. Este protocolo trata de recolectar y analizar muestras de microplastic de ambientes acuáticos que contienen altas cargas sólidas suspendidas.

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Aquí, presentamos un protocolo que muestra un sustrato ópticamente transparente y plano para la captura y el análisis optimizados de partículas contaminantes en el agua potable. Aquí se presenta el Silicon Nanomembrane Analysis Pipeline (SNAP): un canal flexible para la captura, cuantificación e identificación de partículas en medios líquidos.

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Los animales salvajes suelen ser parasitados por una amplia gama de helmintos. Los cuatro tipos principales de helmintos son los "gusanos redondos" (nematodos), los "gusanos de cabeza espinosa" (acantocéfalos), los "trematodos" y las "tenias" (cestodos). Aquí describimos cómo se recolectan los helmintos de un animal vertebrado y cómo se conservan e identifican taxonómicamente.

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Nematodos entomopatógenos son gusanos redondos habitan en el suelo que parasitan una amplia gama de insectos. Demostramos métodos de muestreo utilizados para el aislamiento de estos nematodos del suelo mediante dos técnicas: la de cebado de insectos y la trampa de Blanco modificada, para la recuperación de nematodos de muestras de suelo y cadáveres de insecto infectadas, respectivamente.

Muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Aprende a cuantificar microplásticos liberados de biberones de polipropileno mediante microscopía óptica, espectroscopía Raman y AFM. Este protocolo rentable simula condiciones de uso real con alta recuperación.

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Muestreo, identificación y caracterización de la liberación de microplásticos del biberón de polipropileno durante el uso diario

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