Name: Disección de ovario planario para análisis ultraestructural y tinción de anticuerpos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 8 s
Description: Aprende a diseccionar ovarios de planaria Schmidtea mediterranea para análisis ultraestructural y tinción de anticuerpos. Este método permite obtener imágenes de alta calidad de la biología celular del oocito mediante microscopía electrónica.

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<ol><li>Brubacher, J. L., Vieira, A. P., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea+for+high-resolution+histology+and+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of the planarian Schmidtea mediterranea for high-resolution histology and transmission electron microscopy.</a> Nature Protocols. 9 (3), 661-673 (2014).</li>
<li>Carpenter, K. S., Morita, M., Best, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+the+photoreceptor+of+the+planarian+Dugesia+dorotocephala.+I.+Normal+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of the photoreceptor of the planarian Dugesia dorotocephala. I. Normal eye.</a> Cell Tissue Research. 148 (2), 143-158 (1974).</li>
<li>Ishii, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+protonephridial+flame+cell+of+the+freshwater+planarian+Bdellocephala+brunnea%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the protonephridial flame cell of the freshwater planarian Bdellocephala brunnea.</a> Cell Tissue Research. 206 (3), 441-449 (1980).</li>
<li>Morita, M., Best, J. B., Noel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopic+studies+of+planarian+regeneration%3A+I.+Fine+structure+of+neoblasts+in+Dugesia+dorotocephala%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ultrastructure+Research%22%5BJournal%5D)">Electron microscopic studies of planarian regeneration: I. Fine structure of neoblasts in Dugesia dorotocephala.</a> Journal of Ultrastructure Research. 27 (1), 7-23 (1969).</li>
<li>Hyman, L. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHyman%2C+LH+%22The+invertebrates%3A+Platyhelminthes+and+Rhynchocoela%2C+the+acoelomate+Bilateria%22">The invertebrates: Platyhelminthes and Rhynchocoela, the acoelomate Bilateria</a>. 2, 550(1951).</li>
<li>Higuchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+categorization+of+fluorescence+activated+cell+sorted+planarian+stem+cells+by+ultrastructural+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Characterization and categorization of fluorescence activated cell sorted planarian stem cells by ultrastructural analysis.</a> Development, Growth & Differentiation. 49 (7), 571-581 (2007).</li>
<li>Chong, T., Stary, J. M., Wang, Y., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+markers+to+characterize+the+hermaphroditic+reproductive+system+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular markers to characterize the hermaphroditic reproductive system of the planarian Schmidtea mediterranea.</a> BMC Developmental Biology. 11, 69(2011).</li>
<li>Handberg-Thorsager, M., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+planarian+nanos-like+gene+Smednos+is+expressed+in+germline+and+eye+precursor+cells+during+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">The planarian nanos-like gene Smednos is expressed in germline and eye precursor cells during development and regeneration.</a> Development Genes and Evolution. 217 (5), 403-411 (2007).</li>
<li>Kobayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+D-tryptophan+as+a+bioactive+substance+for+postembryonic+ovarian+development+in+the+planarian+Dugesia+ryukyuensis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The identification of D-tryptophan as a bioactive substance for postembryonic ovarian development in the planarian Dugesia ryukyuensis.</a> Scientific Reports. 7, 45175(2017).</li>
<li>Maezawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+D-amino+acid+oxidase+is+involved+in+ovarian+development+during+sexual+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Planarian D-amino acid oxidase is involved in ovarian development during sexual induction.</a> Mechanisms of Development. 132, 69-78 (2014).</li>
<li>Rouhana, L., Tasaki, J., Saberi, A., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+the+planarian+reproductive+system+through+characterization+of+Schmidtea+mediterranea+CPEB+homologs%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of the planarian reproductive system through characterization of Schmidtea mediterranea CPEB homologs.</a> Developmental Biology. 426 (1), 43-55 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+origin+of+the+germline+stem+cells+as+revealed+by+the+expression+of+nanos-related+gene+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Identification and origin of the germline stem cells as revealed by the expression of nanos-related gene in planarians.</a> Development, Growth & Differentiation. 48 (9), 615-628 (2006).</li>
<li>Tharp, M. E., Collins, J. J., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lophotrochozoan-specific+nuclear+hormone+receptor+is+required+for+reproductive+system+development+in+the+planarian%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A lophotrochozoan-specific nuclear hormone receptor is required for reproductive system development in the planarian.</a> Developmental Biology. 396 (1), 150-157 (2014).</li>
<li>Wang, Y., Zayas, R. M., Guo, T., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nanos+function+is+essential+for+development+and+regeneration+of+planarian+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">nanos function is essential for development and regeneration of planarian germ cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (14), 5901-5906 (2007).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nuclear+hormone+receptor+and+lipid+metabolism+axis+are+required+for+the+maintenance+and+regeneration+of+reproductive+organs%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A nuclear hormone receptor and lipid metabolism axis are required for the maintenance and regeneration of reproductive organs.</a> bioRxiv. , 279364(2018).</li>
<li>Saberi, A., Jamal, A., Beets, I., Schoofs, L., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPCRs+direct+germline+development+and+somatic+gonad+function+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">GPCRs direct germline development and somatic gonad function in planarians.</a> PLoS Biology. 14, 1002457(2016).</li>
<li>Steiner, J. K., Tasaki, J., Rouhana, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+defects+caused+by+Smed-boule+RNA-interference+reveal+that+egg+capsule+deposition+occurs+independently+of+fertilization%2C+ovulation%2C+mating%2C+or+the+presence+of+gametes+in+planarian+flatworms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Germline defects caused by Smed-boule RNA-interference reveal that egg capsule deposition occurs independently of fertilization, ovulation, mating, or the presence of gametes in planarian flatworms.</a> PLoS Genetics. 12, 1006030(2016).</li>
<li>Iyer, H., Issigonis, M., Sharma, P. P., Extavour, C. G., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+premeiotic+function+for+boule+in+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A premeiotic function for boule in the planarian Schmidtea mediterranea.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (25), 3509-3518 (2016).</li>
<li>Rouhana, L., Vieira, A. P., Roberts-Galbraith, R. H., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRMT5+and+the+role+of+symmetrical+dimethylarginine+in+chromatoid+bodies+of+planarian+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">PRMT5 and the role of symmetrical dimethylarginine in chromatoid bodies of planarian stem cells.</a> Development. 139 (6), 1083-1094 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Stary, J. M., Wilhelm, J. E., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+genomic+screen+in+planarians+identifies+novel+regulators+of+germ+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">A functional genomic screen in planarians identifies novel regulators of germ cell development.</a> Genes & Development. 24 (18), 2081-2092 (2010).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcellular+analyses+of+planarian+meiosis+implicates+a+novel%2C+double-membraned+vesiculation+process+in+nuclear+envelope+breakdown%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Subcellular analyses of planarian meiosis implicates a novel, double-membraned vesiculation process in nuclear envelope breakdown.</a> bioRxiv. , 620609(2019).</li>
<li>Grudniewska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+signatures+of+somatic+neoblasts+and+germline+cells+in+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Transcriptional signatures of somatic neoblasts and germline cells in Macrostomum lignano.</a> Elife. 5, 20607(2016).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+free-living+flatworm+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Evodevo%22%5BJournal%5D)">The free-living flatworm Macrostomum lignano.</a> Evodevo. 11, 5(2020).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transgenesis+and+annotated+genome+sequence+of+the+regenerative+flatworm+model+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Efficient transgenesis and annotated genome sequence of the regenerative flatworm model Macrostomum lignano.</a> Nature Communications. 8 (1), 2120(2017).</li>
<li>Maezawa, T., Sekii, K., Ishikawa, M., Okamoto, H., Kobayashi, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaezawa%2C+T+%22Reproductive+and+Developmental+Strategies%3A+The+Continuity+of+Life%22">Reproductive and Developmental Strategies: The Continuity of Life</a>. Kobayashi, K., Kitano, T., Iwao, Y., Kondo, M. , Springer. Japan, Tokyo. 175-201 (2018).</li>
<li>Newmark, P. A., Reddien, P. W., Cebria, F., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ingestion+of+bacterially+expressed+double-stranded+RNA+inhibits+gene+expression+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Ingestion of bacterially expressed double-stranded RNA inhibits gene expression in planarians.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, Suppl 1 11861-11865 (2003).</li>
<li>Orii, H., Mochii, M., Watanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+%22soaking+method%22+for+RNA+interference+in+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">A simple "soaking method" for RNA interference in the planarian Dugesia japonica.</a> Development Genes and Evolution. 213 (3), 138-141 (2003).</li>
<li>Rouhana, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+by+feeding+in+vitro-synthesized+double-stranded+RNA+to+planarians%3A+methodology+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">RNA interference by feeding in vitro-synthesized double-stranded RNA to planarians: methodology and dynamics.</a> Developmental Dynamics. 242 (6), 718-730 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>16% paraformaldehído</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>15710</td><td>Grado EM</td></tr><tr><td>2% acuoso OsO4</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>19152</td><td></td></tr><tr><td>50% de glutaraldehído</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>16320</td><td></td></tr><tr><td>Micrografía Digital</td> de grado EM <td>Gatan Inc.</td><td></td><td>Versión 2.33.97.1, Recopilación de datos TEM</td></tr><tr><td>Resina Epon</td><td>Microscopía Electrónica Sciences</td><td>14120</td><td>Embed 812 Kit, líquido, resina epoxi</td></tr><tr><td></td><td>Etanol Ted Pella</td><td>19207</td><td>Desnaturalizado</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Suero de caballo</td><td>Sigma</td><td>H1138</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de plomo</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica</td><td></td><td></td>6080564</tr><tr><td>Agua MilliQ agua</td><td></td><td></td><td>tratada por ósmosis inversa</td></tr><tr><td>N-acetil-L-cisteína</td><td>Sigma</td><td>A7250</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>sigma</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36965</td><td></td></tr><tr><td>Óxido de propileno</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica</td><td>75569</td><td>Grado EM</td></tr><tr><td>&nbsp; Proteinasa K</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25530049</td><td></td></tr><tr><td>Azul de toluidina O</td><td>Microscopía electrónica Ciencias</td><td>92319</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio electrónico de transmisión</td><td>FEI</td><td></td><td>Tecnai G2 Spirit BioTWIN</td></tr><tr><td>Acetato de uranilo</td><td>Microscopía electrónica Ciencias 541093</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

disección de ovario planario para análisis ultraestructural y tinción de anticuerpos

Planarian Ovary Dissection for Ultrastructural Analysis and Antibody Staining

El método aquí presentado ha sido descrito por Guo et al.21. La clave para una disección exitosa es identificar la pigmentación del ovario y colocar las guías correctamente. La estrategia del método es pasar de posiciones amplias a una ubicación específica. En primer lugar, para lograr esto, confíe en los patrones de pigmentación dorsal y ventral (Figura 1A,B). La pigmentación ventral, donde residen los ovarios, se volverá blanca después de un tratami...

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Accessibility to germ cells allows the study of germ cell development, meiosis, and recombination. The sexual biotype of the freshwater planarian, ...

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Investigación

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Biología

Este protocolo describe un procedimiento para identificar y disecar los órganos de los adultos de pez cebra.

La disección de los órganos del pez cebra adultos

¿Cómo los nichos y las células madre se forman durante el desarrollo es una cuestión importante con implicaciones prácticas. En...

La disección y la tinción de Drosophila Larvas Ovarios

Aquí presentamos una adaptación de la pasivo claridad y método de la reconstrucción 3D para la visualización de la vasculatura ovárica y foliculares capilares en ovarios de ratón intacto.

Reconstrucción tridimensional de la arquitectura Vascular del ovario de ratón pasivo claridad-despejado

El ovario del Drosophila es un sistema modelo excelente para estudiar el desarrollo del nicho de células madre. Aunque se han publicado métodos para disecar larvarios y adultos de los ovarios, disecciones de ovario pupa requieren técnicas diferentes que no han sido publicadas en detalle. Aquí describiremos un protocolo de disección, tinción y montaje pupas ovarios.

Disección y la coloración de los ovarios Pupal de Drosophila

Aquí, presentamos un protocolo para cuantificar los folículos en los ovarios cultivados de ratones jóvenes sin seccionamiento serial. Con inmunofluorescencia de todo órgano y tejido claro, seccionar físico se sustituye por seccionamiento óptico. Este método de preparación de la muestra y visualización mantiene la integridad de órganos y facilita la cuantificación automática de células específicas.

Todo Monte inmunofluorescencia y cuantificación del folículo de los ovarios de ratón cultivadas

Aquí, presentamos un protocolo optimizado para obtener imágenes de ovarios enteros para análisis cuantitativos y cualitativos utilizando inmunotinción de montaje completo, microscopía multifotónica y visualización y análisis 3D. Este protocolo se adapta al procesamiento de alto rendimiento, confiable y repetible que es aplicable para toxicología, diagnóstico clínico y ensayos genómicos de la función ovárica.

Inmunofluorescencia de ovario completo, limpieza y microscopía multifotónica para el análisis cuantitativo en 3D de la reserva ovárica en desarrollo en ratones

Se presenta un método para la microdisección del oviducto de ratón que permite la recolección de los segmentos individuales mientras se mantiene la integridad del ARN. Además, se describe el procedimiento de disociación de células oviductales no enzimáticas. Los métodos son apropiados para el posterior análisis de genes y proteínas de los segmentos oviductales funcionalmente diferentes y las células oviductales disociadas.

Microdisección y disociación del oviducto murino: identificación de segmentos individuales y aislamiento unicelular

Este es un método comúnmente utilizado para la disección de gónadas de C. elegans seguida de grieta por congelación, que produce muestras de línea germinal para inmunofluorescencia a través de tinción de anticuerpos, o para tinción DAPI simple para visualizar el ADN. Este protocolo ha sido exitoso para los estudiantes universitarios en un laboratorio de investigación y en una experiencia de investigación de pregrado basada en cursos.

C. elegans Disección de gónadas y grieta por congelación para inmunofluorescencia y tinción DAPI

El protocolo demuestra un método de disección simple y fácil, adecuado para insectos hembra migratorios de tipo silvestre capturados con trampas de reflectores. Esta técnica puede aclarar significativamente la misma especie comparando ambos tejidos reproductivos, es decir, el saco de apareamiento y el desarrollo ovárico de insectos hembra de tipo salvaje.

Disección y clasificación del desarrollo ovárico en insectos hembra de tipo silvestre

Este video muestra todo inmunohistoquímica montaje, un método por el cual el patrón de expresión espacial y temporal de un antígeno puede ser visualizado en embriones de pollo joven. Este método fue introducido originalmente por Jane Dodd y Tom Jessell.

Método para la tinción de anticuerpos enteros en el monte del polluelo

Aprende a diseccionar ovarios de planaria Schmidtea mediterranea para análisis ultraestructural y tinción de anticuerpos. Este método permite obtener imágenes de alta calidad de la biología celular del oocito mediante microscopía electrónica.

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