Inmunofluorescencia de ovario completo, limpieza y microscopía multifotónica para el análisis cuantitativo en 3D de la reserva ovárica en desarrollo en ratones

Este método puede ayudar a responder una de las preguntas clave en el campo reproductivo, a saber, cómo y cuándo los procesos genéticamente regulados influyen en el tamaño de la reserva ovárica que sabemos que afecta a las mujeres, la longevidad reproductiva Este protocolo se puede adoptar para estudios a gran escala utilizando las mismas técnicas para ovarios intactos de diferentes etapas de desarrollo. Genera datos producibles al proporcionar una cuantificación eficiente de las células germinales. Este método aplicado a animales genéticamente diversos de la misma especie puede proporcionar información sobre los factores genéticos directamente en el desarrollo de células germinales y ovarios y otros órganos de desarrollo.

Demostrando el procedimiento estará Nathaniel Boechat, un pasante de investigación de mi laboratorio Para comenzar con el paso de profusión colocar y asegurar el ratón hembra puberal anestesiado sobre su espalda fijando suavemente todas las piernas a través de las almohadillas de las patas en una posición relajada sobre una tabla. Para abrir la cavidad torácica del ratón, corte cuidadosamente las costillas a ambos lados del esternón justo debajo de la escápula, evitando perforar los pulmones, agarre la piel o las solapas de las costillas con las pinzas y fije los colgajos para exponer los órganos internos use tijeras de disección para cortar la aurícula derecha del corazón y liberar sangre del sistema. Luego, sosteniendo el corazón con fórceps, inserte una aguja de perfusión en el ventrículo izquierdo y bombee 10 mililitros de PBS con una presión suave y constante.