Name: Un método de inoculación eficaz para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-16T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Aprenda un método de inoculación eficaz para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra mediante pinpricking en la cabeza basal. Esta técnica mejora la estabilidad de métodos tradicionales y facilita el estudio de interacciones planta-patógeno.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue apoyado financieramente por el Programa Nacional Clave de I + D de China (2020YFD1001200), el Sistema de Investigación Agrícola de China (CARS-11), el fondo de investigación específico de la Plataforma de Innovación para Académicos de la Provincia de Hainan (YSPTZX202154), la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Hainan de China (321RC652) y la Fundación de Ciencias Naturales de China (No. 31601626).

1. Preparación de plantas de corte de pimienta negra para la infección
<ol><li>Tome un corte de cinco nodos, de aproximadamente 40 cm de largo con un diámetro de 0,5 cm, de una rama ortotrópica sana y de crecimiento vigoroso de pimienta negra con un cuchillo de poda desinfectado o secateurs. Pode los tres nodos inferiores de las ramas plagiotrópicas, con los dos nodos superiores restantes con aproximadamente 10 hojas intactas.</li>
	<li>Prepare sustrato de enraizamiento que contenga tierra y estiércol animal (estiércol de vaca o estiércol de oveja) en una proporción de 1: 1. Autoclave el sustrato de enraizamiento a 121 °C durante 20 min.</li>
	<li>Inserte los esquejes en el sustrato de enraizamiento en un ángulo de aproximadamente 50 °, con el tercer nodo simplemente tocando la superficie del sustrato y la yema axilar en este nodo por encima del sustrato. NOTA: La bolsa utilizada aquí tiene las siguientes dimensiones: altura de 40-60 cm, diámetro de 25-30 cm.</li>
	<li>Vierta 10-20 L de agua sobre las raíces de la planta. Coloque los esquejes en un invernadero con un 90% de sombra a una temperatura de 25-30 ° C para el enraizamiento y el crecimiento.</li>
</ol>2. Propagación de Phytophthora capsici (P. capsici)
NOTA: Se mantiene un stock de cultivo de Phytophthora capsici en el laboratorio de protección vegetal del Instituto de Investigación de Especias y Bebidas, Academia China de Ciencias Agrícolas Tropicales7.
<ol><li>Cepille y limpie los tubérculos de papa con agua corriente del grifo y luego corte 200 g de papas en cubos de 1 cm3. Coloque algunos de los cubos en un vaso de precipitados que contenga 800 ml de agua de doble destilación (ddH2O) y hierva durante 20 minutos.</li>
	<li>Filtre el caldo a través de una gasa doble utilizando la filtración por gravedad. Preparar el agar de dextrosa de patata (PDA) añadiendo 20 g de dextrosa y 15 g de agar al filtrado y rematando el volumen hasta 1 L con ddH2O. Autoclave la mezcla a 121 °C durante 20 min8.</li>
	<li>Vierta 20 ml del PDA esterilizado en forma líquida en una placa de Petri redonda de 9 cm de diámetro dentro de una campana de flujo de aire laminar. Deje las placas PDA con tapas abiertas dentro de la campana de flujo de aire laminar durante la noche como un medio para evitar la condensación.</li>
	<li>Use un lazo de inoculación para recoger micelios de la cepa de Phytophthora capsici dentro de un tubo de ensayo. Coloque el inóculo con el lado micelial en contacto con el PDA en una placa de Petri.</li>
</ol>3. Infección de pimienta negra
<ol><li>Incubación<ol>
<li>Identifique un área de 5 cm por encima de la superficie del sustrato y cerca de las raíces en el tallo para la inoculación.</li>
		<li>Extraiga un disco de micelio de 0,5 cm de diámetro en el borde de crecimiento del cultivo de Phytophthora capsici en PDA en una placa de Petri utilizando un barrenador tapón.</li>
		<li>Dañe el tallo con una aguja de jeringa y haga tres agujeros en un patrón triangular en el área de inoculación seleccionada. Cubra cada orificio con un disco micelio. Coloque los orificios cerca uno del otro para asegurarse de que el área herida esté completamente cubierta con los discos miceliales.</li>
		<li>Cubra los discos miceliales con almohadillas de algodón humedecidas esterilizadas como un medio para evitar el secado. Ata la almohadilla al tallo con una tira de polietileno para mantener la posición de los discos inoculantes. NOTA: A las 8 h después de la inoculación, los agujeros inoculados se volvieron negros y la lesión se extendió a medida que pasaba el tiempo. Las hojas se volvieron amarillas y se cayeron, y la planta inoculada murió 7-10 días después de la inoculación. No se desarrollaron lesiones en las plantas de control. La mayoría de los genes se expresaron de manera diferente después de la inoculación con Phytophthora capsici en comparación con el grupo control. El análisis histopatológico de los tejidos infectados demostró que Phytophthora capsici colonizó en el xilema.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Muestrear los materiales vegetales de interés y almacenarlos a -80 °C en nitrógeno líquido para su uso en estudios posteriores. NOTA: El nitrógeno líquido, las bolsas de plástico, los rotuladores, las cizallas de ramas y otros materiales se prepararon antes de los experimentos.</li>
	<li>Después de muestrear los materiales vegetales específicos para su uso, autoclave todos los materiales vegetales restantes, el cultivo y el medio de cultivo de Phytophthora capsici sobrantes, y todos los instrumentos y artículos de laboratorio utilizados en este trabajo de inoculación.</li>
</ol>

<ol><li>Gordo, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+sequencing+of+black+pepper+root+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput sequencing of black pepper root transcriptome.</a> BMC Plant Biology. 12 (1), (2012).</li>
<li>Leonian, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+and+fruit+blight+of+Peppers+caused+by+Phytophthora+capsici+sp.+Nov%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Stem and fruit blight of Peppers caused by Phytophthora capsici sp. Nov.</a> Phytopathology. 12 (9), 401-408 (1922).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+maize+resistance+by+its+neighbors%3A+Activating+1%2C4-benzoxazine-3-ones+synthesis+and+defense+gene+expression+to+alleviate+leaf+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Priming maize resistance by its neighbors: Activating 1,4-benzoxazine-3-ones synthesis and defense gene expression to alleviate leaf disease.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 830(2015).</li>
<li>Fonseca, C. E. L., Vianda, D. R., Hansen, J. L., Pell, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+among+forage+quality+traits%2C+vigor%2C+and+disease+resistance+in+alfalfa%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Science%22%5BJournal%5D)">Associations among forage quality traits, vigor, and disease resistance in alfalfa.</a> Crop Science. 39 (5), 1271-1276 (1999).</li>
<li>Altier, N. A., Thies, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+resistance+to+Pythium+seedling+disease+in+Alfalfa+using+a+culture+plate+method%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification of resistance to Pythium seedling disease in Alfalfa using a culture plate method.</a> Plant Disease. 79 (4), 341-345 (1995).</li>
<li>Pratt, R. G., Rowe, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+simplified+leaf+inoculation+procedures+for+identification+of+quantitative+resistance+to+Sclerotinia+trifoliorum+in+Alfalfa+seedling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Evaluation of simplified leaf inoculation procedures for identification of quantitative resistance to Sclerotinia trifoliorum in Alfalfa seedling.</a> Plant Disease. 82 (10), 1161-1164 (1998).</li>
<li>Hao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+transcriptome+sequencing+of+black+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+an+analysis+of+genes+involved+in+phenylpropanoid+metabolism+in+response+to+Phytophthora+capsici%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">De novo transcriptome sequencing of black pepper (Piper nigrum L.) and an analysis of genes involved in phenylpropanoid metabolism in response to Phytophthora capsici.</a> BMC Genomics. 17 (1), 1-14 (2016).</li>
<li>Dong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+inoculation+and+classification+of+maize+ear+rot+caused+by+Fusarium+verticillioides%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Field inoculation and classification of maize ear rot caused by Fusarium verticillioides.</a> Bio-protocol. 8 (23), 3099(2018).</li>
<li>English, J. T., Laday, M., Bakonyi, J., Schoelz, J. E., Érsek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+molecular+characterization+of+species+hybrids+derived+from+induced+fusion+of+zoospores+of+Phytophthora+capsica+and+Phytophthora+nicotianae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycological+Research%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and molecular characterization of species hybrids derived from induced fusion of zoospores of Phytophthora capsica and Phytophthora nicotianae.</a> Mycological Research. 103 (8), 1003-1008 (1999).</li>
<li>Chatterjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+activity+of+some+phenolic+constituents+from+green+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+fresh+nutmeg+mace+%28Myristica+fragrans%29%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Antioxidant activity of some phenolic constituents from green pepper (Piper nigrum L.) and fresh nutmeg mace (Myristica fragrans).</a> Food Chemistry. 101 (2), 515-523 (2007).</li>
<li>Pfender, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+sporangia+and+release+of+zoospores+by+Phytophthora+megasperma+in+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Production of sporangia and release of zoospores by Phytophthora megasperma in soil.</a> Phytopathology. 67 (5), 657-663 (1977).</li>
<li>Nagila, A., Schutte, B. J., Sanogo, S., Idowu, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chile+pepper+sensitivity+to+mustard+seed+meal+applied+after+crop+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Chile pepper sensitivity to mustard seed meal applied after crop emergence.</a> HortScience. 56 (2), 1-7 (2021).</li>
<li>Lamour, K. H., Stam, R., Jupe, J., Huitema, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oomycete+broad-host-range+pathogen+Phytophthora+capsica%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The oomycete broad-host-range pathogen Phytophthora capsica.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 329-337 (2012).</li>
<li>Hardham, A., Gubler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+of+attachment+of+zoospores+of+a+root+pathogen+and+pre-alignment+of+the+emerging+germ+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International+Reports%22%5BJournal%5D)">Polarity of attachment of zoospores of a root pathogen and pre-alignment of the emerging germ tube.</a> Cell Biology International Reports. 14 (11), 947-956 (1990).</li>
</ol>

En este estudio, la cabeza basal fue pinchada para dañar y proporcionar un sistema de inoculación eficaz en la planta de pimienta negra. Los gránulos de micelio cubrieron los tres orificios para retener la humedad y permitir que el patógeno infecte bien la planta. Después de la inoculación, las hojas se volvieron amarillas y se cayeron y las plantas inoculadas murieron. No se desarrollaron lesiones en las plantas de control. La mayoría de los genes se expresaron de manera diferente después de la inoculación con Phyto...

La pimienta negra (Piper nigrum L.) es una trepadora leñosa y uno de los cultivos de especias más importantes. Es conocido como el "Rey de las Especias"1 y se cultiva en más de 40 países y regiones de Asia, África y América Latina. La podredumbre de la raíz de Phytophthora es la enfermedad más devastadora de la pimienta negra, y es causada por el oomiceto Phytophthora capsici. Este patógeno también infecta cucurbitáceas, berenjenas, chiles y tomates 2,3. Con la pimienta negra, un cultivo entero a veces puede ser diezmado por esta enfermedad. La expansión de las áreas de siembra de pimiento está restringida como resultado de la falta de disponibilidad de variedades resistentes, lo que ha obstaculizado significativamente el desarrollo de la industria china de la pimienta negra. Una inoculación efectiva y un sistema de muestreo preciso para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra son esenciales para estudiar esta interacción planta-patógeno.
La identificación y el cribado de la resistencia en los recursos de germoplasma es el requisito básico para investigar la patogenicidad del patógeno y el mejoramiento y la utilización de variedades resistentes. Un enfoque ampliamente utilizado es utilizar una variedad de métodos de identificación basados en especies de plantas y grupos de patógenos. Los métodos de identificación actuales incluyen la identificación de poblaciones, la identificación individual, la identificación de órganos, la identificación de tejidos, la identificación celular, la identificación bioquímica y la identificación molecular, que se han desarrollado en los últimos años 4,5. Ha habido éxito en estas áreas, pero también hay muchos problemas. No importa qué método se elija, los requisitos básicos de la identificación de la resistencia de la planta son consistentes, incluidos objetivos claros, resultados confiables y métodos que son simples, rápidos y fáciles de estandarizar. Este principio también debe seguirse en la identificación de la resistencia a la pimienta negra.
En condiciones de campo natural, la identificación de la resistencia a las enfermedades puede verse influenciada por muchos factores ambientales. Por lo tanto, se propuso que las hojas separadas y las raíces irrigadas se utilizaran en el laboratorio para identificar la resistencia a las enfermedades. Las hojas jóvenes de plantas sanas se inocularon in vitro en el laboratorio, y el área de hojas enfermas se midió inoculando el patógeno para identificar la resistencia a las enfermedades de las plantas6. Sin embargo, la inoculación foliar in vitro solo se puede utilizar para la identificación de resistencia general y no para estudios de interacción molecular. A pesar de esto, el estado de resistencia a la enfermedad a menudo se presenta en la inoculación radicular irrigada, causando incertidumbre en el estudio de seguimiento del mejoramiento molecular para la resistencia a la enfermedad. Por lo tanto, los métodos de detección de interiores rápidos y simples son esenciales. Este estudio tiene como objetivo proporcionar un método para la identificación de resistencias en el laboratorio.

<table><tbody><tr><td>Polvo de agar</td><td>Solarbio</td><td>A8190</td><td></td></tr><tr><td>Banco limpio</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dextrosa</td><td>Xilong Scientific 15700501</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Horno de esterilización de alta temperatura</td><td>Zaelway</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placas de placa de Petri Biosharp</td><td></td><td>BS-90-D</td><td></td></tr></tbody></table>

un método de inoculación eficaz para phytophthora capsici en plantas de pimienta negra

An Effective Inoculation Method for Phytophthora capsici on Black Pepper Plants

Piper nigrum L. (pimienta negra) es una vid leñosa típica que es un cultivo de especias económicamente importante en todo el mundo. La producción de pimienta negra se ve afectada significativamente por la enfermedad de la podredumbre de la raíz causada por Phytophthora capsici, que ha influido seriamente en el desarrollo de la industria como un problema de "punto de estrangulamiento". Sin embargo, el mecanismo genético molecular de resistencia en la pimienta negra no está claro, lo que lleva a un progreso lento en el desarrollo de nuevas variedades de pimienta negra. Una inoculación efectiva y un sistema de muestreo preciso para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra es esencial para estudiar esta interacción planta-patógeno. El objetivo principal de este estudio es demostrar una metodología detallada donde la cabeza basal de la pimienta negra se inocula con Phytophthora capsici, al tiempo que proporciona una referencia para la inoculación de plantas de vid leñosa. La cabeza basal de la planta de pimienta negra fue pinchada para dañarla, y los gránulos miceliales cubrieron los tres agujeros para retener la humedad y así el patógeno pudiera infectar bien la planta. Este método proporciona una mejor manera de resolver la inestabilidad causada por los métodos tradicionales de inoculación, incluido el empapamiento del suelo o la inmersión de la raíz. También proporciona un medio prometedor para estudiar el modo de acción entre las plantas y otros patógenos de plantas transmitidos por el suelo en el mejoramiento agrícola de precisión.

La Figura 1 muestra los síntomas de las hojas de pimienta negra después de la inoculación de P. capsici . La Figura 2 muestra los síntomas de los tallos de pimienta negra después de la inoculación de P. capsici . El patógeno infectó la pimienta negra en el tallo basal; síntomas que incluyen amarilleo de las hojas, aparición de marchitamiento, pardeamiento del xilema y ennegrecimiento de los vasos que aparecen gradualmente. ...

Pinchar la cabeza basal de la planta de pimienta negra es un método breve y que ahorra tiempo para dañarla. Aquí, proporcionamos pasos detallados con un video para infectar plantas de pimienta negra.

Un método de inoculación eficaz para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra

Piper nigrum L. (black pepper) is a typical woody vine that is an economically important spice crop across the world. Black pepper production is ...

El siguiente experimento introduce un método de inoculación eficaz y muestreo preciso para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra. La pimienta negra, que es una vid leñosa típica, es un cultivo de especias económicamente importante. La producción de pimienta negra se ve afectada principalmente por la enfermedad de la podredumbre de la raíz causada por Phytophthora capsici, y ha influido seriamente en el desarrollo industrial.Una inoculación efectiva y un sistema de muestreo preciso para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra es importante para el estudio de la interacción planta-patógeno. El objetivo principal de este estudio es demostrar una metodología detallada en la que la cabeza basal de la pimienta negra fue inoculada con Phytophthora capsici, y también proporcionar una referencia para la inoculación de plantas de vid leñosa. Este método proporciona una mejor manera de resolver la inestabilidad provocada por el método de inoculación tradicional, como el empapamiento del suelo o la inmersión de la raíz.Procedimientos experimentales. Los esquejes de pimientos negros se plantan en el ambiente controlado durante dos meses. Subcultiva la Phytophthora capsici, e incuba durante cinco días por debajo de los 25 grados centígrados.El día de la infección, los bloques de agar se cubren en los tres orificios pegados por la aguja. Y finalmente, caracterizar los síntomas de la enfermedad. Preparación de plantas de corte de pimienta negra para la infección.Cortar ramas ortotrópicas en longitudes de 40 centímetros, y 0,5 centímetros de diámetro, y eliminar ramas plagiotrópicas en los ganglios inferiores con cuchillo estéril y secateur. La rama cortada debe contener dos nudos y cinco hojas en la parte superior para reducir la pérdida de agua. Recorte la parte superior a un corte plano y la parte inferior a un corte oblicuo.El sustrato de enraizamiento del corte de pimienta negra se preparó en una mezcla, que contiene tierra y estiércol animal, como estiércol de vaca, estiércol de oveja, etc., en una proporción de uno a uno. El suelo se autoclavó a unos 121 grados centígrados durante 20 minutos. Utilice las bolsas de cría de 30 centímetros de diámetro y 50 centímetros de altura para colocar los sustratos de enraizamiento.Prepara una pendiente de 50 grados para rellenar los sustratos. Los esquejes se colocaron en un ángulo de 50 grados, con más de tres nodos por debajo del sustrato. Se cubrieron con el medio de enraizamiento y la parte auxiliar debe adherirse al medio.Finalmente, los esquejes fueron completamente infiltrados. Se adoptó el corte recto para insertar el corte. Preparación de cultivos de Phytophthora capsici.Elija papas libres de enfermedades. Limpie las papas y córtelas en cuadrados pequeños. Coloque 200 gramos de papas en 800 mililitros de agua destilada doble y hierva durante 20 minutos.Luego filtre la mezcla. Añadir 20 gramos de dextrosa. Llene la mezcla a un litro con agua destilada doble.Añadir 15 gramos de polvo de agar en el filtrado. Dispensar el medio en matraces y sellar con Parafilm. Autoclave el medio a 121 grados centígrados durante 20 minutos.El medio calculado de agar de papa se dispensó en las placas de Petri y se enfrió en el banco estéril para su solidificación. La aguja de inoculación se desinfectó calentando con una lámpara de combustión de alcohol y enfriándola durante varios segundos. Tome pequeños trozos de muestras de hongos utilizando inoculación estéril y colóquelos en PDA.El micelio cubre aproximadamente tres cuartas partes de la placa. Las culturas están listas para seguir experimentando. Infección de pimientos negros.La ubicación de cinco centímetros de distancia de la superficie del sustrato se consideró como el punto de incubación. La ubicación de incubación no debe estar lejos de la raíz, con el objetivo de evitar prolongar el tiempo infeccioso. Los pasos detallados de pinchazo son los siguientes.Se recogió una bolita de micelio de Phytophthora capsici utilizando un barrenador tapón. En particular, los gránulos de micelio recientemente desarrollados en el borde de la placa se seleccionaron preferentemente debido a sus mayores actividades infecciosas. Esterilizar un tallo con etanol al 75% y tomar tres poros triangulares en la posición esterilizada con la aguja de inoculación.Tres poros triangulares en el lugar de la inoculación se clavaron con la aguja de inoculación, y se cubrieron gránulos de micelio en los tres poros. Después de ocho horas, los poros se volvieron negros en general. La dilatación se amplió con la prolongación de la incubación.Después de siete a diez días, las hojas se volvieron amarillas y se cayeron, hasta que la pimienta negra murió. Los resultados presentativos son los siguientes. Después de la infección, los síntomas aparecen en las plantas de pimienta negra, incluyendo el amarilleo y marchitamiento de las hojas, el pardeamiento del xilema y el ennegrecimiento de los vasos.La mayoría de los genes se expresaron de manera diferente después de la inoculación con Phytophthora capsici, en comparación con el grupo control. El análisis histopatológico de tejidos infectados ha demostrado phytophthora capsici colonizado en el xilema. Conclusión. En este estudio, se utilizó el pinchazo de la cabeza basal para dañarla para proporcionar una inoculación efectiva, y el sistema de duplicación en la pimienta negra.Mientras tanto, este protocolo también representa una forma más eficiente de proporcionar una referencia para incubar con-Nuestro método puede dar más tiempo y operar más brevemente. Este protocolo proporciona un mejor resultado, lo que permite una fuerte interacción entre una planta y el patógeno transmitido por el suelo. Que es visible y conveniente para detectar el proceso dinámico entre las plantas y sus patógenos.En nuestro método que empezamos a pinchar la cabeza basal de la planta de pimienta negra para que se dañe. Luego, el área dañada se cubre con Phytophthora capsici directamente y se mantiene la humedad. Para que el patógeno pudiera infectar la planta.También proporcionamos una forma prometedora para el estudio del modo de acción entre las plantas y otros patógenos de plantas transmitidos por el suelo en el mejoramiento agrícola de precisión.

an-effective-inoculation-method-for-phytophthora-capsici-on-black

Research

Investigación

JoVE Journal

Genetics

Genética

Fuente: Rufián, J. S., et.al. Análisis unicelular de la expresión de genes de Pseudomonas syringae en el tejido vegetal. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra un método de infiltración por vacío para introducir un patógeno bacteriano en las hojas de las plantas de Arabidopsis . El enfoque utiliza una suspensión bacteriana preparada y pulsos de vacío para permitir una entrada uniforme a través de estomas, lo que resulta en una infección controlada de las hojas.

Inoculación de un patógeno bacteriano en hojas de Arabidopsis mediante infiltración al vacío

Este video muestra el ensayo de inhibición del crecimiento de plántulas en la planta Arabidopsis thaliana. Se determina el impacto del aumento de la concentración de elicitor de péptidos inmunes en el crecimiento de las plántulas.

Medición de la inhibición inducida por el sistema inmunitario del crecimiento de las plántulas

Este protocolo se muestran dos métodos de inoculación para introducir el hongo...

Establecimiento de hongos entomopatógenos como endófitos: Hacia Control Biológico Endofítico

Se describe el uso de un método de inyección con aguja para inocular plantas de maíz y teosinto con el patógeno biotrófico Ustilago maydis.  El método de inoculación por inyección de agujas facilita la entrega controlada del patógeno fúngico entre las hojas de la planta donde el patógeno entra en la planta a través de la formación de appresoria. Este método es altamente eficiente, permitiendo inoculaciones reproducibles con U. maydis.

Un método rápido y eficiente para evaluar la patogenicidad de Ustilago maydis en las líneas de maíz y teosinte

La agroinfiltración y la agroinfección por PVX son ensayos funcionales de rutina para la expresión ectópica transitoria de genes en plantas. Estos métodos son ensayos eficientes en estrategias efectoómicas (resistencia rápida y descubrimiento de genes de avirulencia) y cruciales para la investigación moderna en fitopatología molecular. Satisfacen la demanda de análisis funcionales robustos de alto rendimiento en las plantas.

Agroinfiltración y PVX Agroinfección en Papa y Nicotiana benthamiana

La cuantificación del crecimiento de patógenos es una poderosa herramienta para caracterizar diversas respuestas inmunitarias de Arabidopsis thaliana (en adelante: Arabidopsis). El método descrito aquí presenta un ensayo optimizado de infiltración de jeringas para cuantificar la Pseudomonas syringae pv. Maculicola ES4326 crecimiento en hojas adultas de Arabidopsis.

Ensayo de infiltración bacteriana de la hoja por Fine Caracterización de las respuestas de defensa de la planta utilizando el<em&gt; Thaliana-Pseudomonas syringae Arabidopsis</em&gt; Patosistema

Aquí, presentamos un protocolo para prueba de virulencia de la planta con el patógeno de la planta grisea de Magnaporthe. Este informe contribuirá a la proyección a gran escala de los patotipos de aislamientos de hongos y servir como un excelente punto de partida para la comprensión de los mecanismos resistentes de las plantas durante la reproducción molecular.

La prueba de infección de planta: Spray y mediada por la herida la inoculación con el patógeno de planta Magnaporthe Grisea

Presentamos un protocolo para construir un sistema simple de distribución de esporas que consiste en una caja de inoculación con una malla de ~ 50 μm y una cámara de plástico transparente. Esto se puede utilizar para inocular uniformemente las plantas con esporas de mildiú polvoriento, lo que permite una evaluación precisa y reproducible de los fenotipos de enfermedades de las plantas en estudio.

Un método de inoculación fácil y flexible para evaluar con precisión los fenotipos de infección por mildiú polvoriento de Arabidopsis y otras plantas

Este protocolo presenta un resumen detallado de las estrategias para inocular las raíces de las plantas con microbios transmitidos por el suelo. Ejemplificado para los hongos Verticillium longisporum y Verticillium dahliae, se describen tres sistemas diferentes de infección radicular. Se destacan las aplicaciones potenciales y los posibles análisis posteriores, y se discuten las ventajas o desventajas para cada sistema.

Estrategias de inoculación para infectar las raíces de las plantas con microorganismos transmitidos por el suelo

Este protocolo presenta un sistema optimizado de bioensayo de hojas sueltas para evaluar la efectividad de hongos entomopatógenos (EPF) contra el pulgón de la mostaza (Lipaphis erysimi (Kalt.)), un insecto partenogenético. El método describe el proceso de recopilación de datos durante los experimentos con placas de Petri, lo que permite a los investigadores medir de manera consistente la virulencia de EPF contra pulgones de la mostaza y otros insectos partenogenéticos.

Evaluación del efecto afidicida de hongos entomopatógenos contra insectos partenogenéticos, pulgón de la mostaza, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Se estableció un protocolo de bioensayo de hojas separadas para la cría masiva de trips de chile utilizando un método modificado de hojas separadas en recipientes de vidrio que contienen agar, lo que garantiza una alta supervivencia y un desarrollo sincronizado. Este sistema permite un cribado eficiente de la virulencia de hongos entomopatógenos contra larvas de2º estadio y proporciona un suministro fiable de trips para evaluaciones de laboratorio, invernadero y campo.

Establecimiento de un sistema de cría de trips de chile (Scirtothrips dorsalis Hood) para el cribado de virulencia de hongos entomopatógenos

Aprenda un método de inoculación eficaz para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra mediante pinpricking en la cabeza basal. Esta técnica mejora la estabilidad de métodos tradicionales y facilita el estudio de interacciones planta-patógeno.

Un método de inoculación eficaz para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra

Explorar más videos