Un método simple modificado para la inducción de infarto de miocardio en ratones
3 de diciembre de 2021
Bajo la anestesia adecuada, el corazón del ratón se exteriorizó a través del espacio intercostal, y el infarto de miocardio se indujo con éxito mediante la ligadura de la arteria descendente anterior (DA) izquierda utilizando materiales fácilmente disponibles en la mayoría de los laboratorios.
Este informe presenta un enfoque único para la inducción del infarto de miocardio en ratones. El método actual es fácil, ahorra tiempo y utiliza los tubos y equipos quirúrgicos que se encuentran fácilmente en la mayoría de los laboratorios. El establecimiento de modelos de infarto de miocardio proporciona una premisa para investigar los mecanismos pasados de remodelación post-infarto de miocardio y la variación de nuevas terapias.
Aplique la crema depilatoria en el pecho del ratón y espere un minuto. A continuación, limpie suavemente la crema depilatoria y el vello con una gasa húmeda. Asegure el ratón en una plataforma quirúrgica en posición supina.
Desinfecte el área quirúrgica como se describe en el texto. Luego coloque un paño estéril alrededor del área desinfectada. Haz un corte de piel de 0,5 centímetros a lo largo de la línea que conecta el xifoides y la axila, y separa sin rodeos los músculos pectorales mayores y pectorales menores con unas pinzas.
Abra el cuarto espacio intercostal con un hemostático Micro-Mosquito. Exterioriza el corazón empujándolo hacia el cuarto espacio intercostal con el dedo índice de la mano izquierda. Asegurar el corazón con la mano izquierda y ligar la rama descendente anterior izquierda con una sutura 6/0 a tres milímetros de su origen.
Vuelva a colocar el corazón en la cavidad torácica rápidamente. Evacúe el aire de la cavidad torácica presionando suavemente la cavidad torácica. Para el manejo del dolor postoperatorio, inyecte buprenorfina por vía subcutánea cada cuatro a seis horas durante un máximo de setenta y dos horas después de la cirugía.
Coloque el mouse sobre una almohadilla térmica para recuperarse de la anestesia. Asegure el ratón sacrificado en la plataforma quirúrgica en posición supina. Hacer una incisión ventral de aproximadamente tres a cuatro centímetros en la parte superior del abdomen.
Corta las costillas de ambos lados de la cavidad torácica y luego retira el diafragma. Perfundir el corazón con 10 mililitros de PBS frío a cuatro grados centígrados 1X mediante inyección intraventricular. A continuación, recoge el corazón cortando la raíz aórtica y guárdalo inmediatamente a menos 80 grados centígrados.
Corta el corazón congelado en secciones de un milímetro de grosor sobre hielo con hojas de afeitar. Incubar las rodajas de corazón preparadas en una solución de TTC al 1% disuelta en un PBS 1X a 37 grados Celsius durante 10 a 15 minutos. A continuación, fotografíe las rodajas con una cámara digital.
Después de la ligadura de la arteria coronaria, el análisis de tinción TTC indicó una inducción exitosa del infarto de miocardio y cambios temporales en el tamaño de la cicatriz posterior al infarto de miocardio. Los resultados del análisis de supervivencia mostraron una mortalidad manifiesta dentro de los siete días posteriores al infarto de miocardio en ratones machos y hembras C57BL/6J. La ruptura ventricular fue una causa frecuente de muerte post-infarto de miocardio.
La evaluación ecocardiográfica posterior al infarto de miocardio demostró una inducción exitosa de la disfunción contráctil y el remodelado ventricular. Al intentar exteriorizar el corazón, no presione la cavidad torácica en primer lugar, y siguiendo nuestra resistencia, indica la necesidad de ajustar la dirección contra el elogio ponderado. Después de este procedimiento, se puede realizar una inyección intramiocárdica de vectores o células virales para probar la eficacia de las terapias génicas o las terapias celulares en asuntos de enfermedades cardíacas.
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Descripción general
Este artículo presenta un método para inducir infarto de miocardio en ratones, utilizando materiales quirúrgicos fácilmente disponibles. La técnica permite el estudio del remodelado post-IAM y la evaluación de terapias novedosas.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Investigación cardiovascular
- Modelos de infarto de miocardio
- Técnicas quirúrgicas en estudios con animales
Antecedentes
- El infarto de miocardio es un área crítica de estudio en la investigación cardiovascular.
- Comprender la remodelación post-infarto es esencial para desarrollar nuevos tratamientos.
- Los métodos existentes pueden ser complejos o requerir equipos especializados.
- Este estudio tiene como objetivo simplificar el proceso utilizando materiales de laboratorio comunes.
Objetivo del estudio
- Establecer un modelo confiable de infarto de miocardio en ratones.
- Facilitar la investigación sobre el remodelado cardíaco post-infarto.
- Permitir la evaluación de terapias génicas y celulares en enfermedades cardíacas.
Métodos Utilizados
- Aplicación de crema depilatoria para la preparación quirúrgica.
- Exteriorización del corazón a través del espacio intercostal.
- Ligadura de la arteria descendente anterior izquierda.
- Cuidados posoperatorios y evaluación del infarto de miocardio.
Resultados principales
- La inducción exitosa de infarto de miocardio se confirmó mediante tinción con TTC.
- Las tasas de mortalidad se observaron dentro de los siete días posteriores al infarto de miocardio.
- Se documentó disfunción contráctil y remodelación ventricular.
- El método permite intervenciones terapéuticas posteriores.
Conclusiones
- El método descrito es eficiente y reproducible para inducir IM en ratones.
- Proporciona una plataforma para investigaciones futuras sobre terapias cardíacas.
- Estudios futuros pueden basarse en este modelo para explorar diversas intervenciones.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
Los modelos robustos de infarto de miocardio (IM) in vivo son esenciales para la evaluación preclínica de terapias cardíacas y estudios mecanicistas sobre la remodelación post-IM. Este protocolo optimizado de ligadura de la arteria coronaria permite la inducción reproducible de IM en ratones, apoyando la investigación traslacional y la prueba de hipótesis terapéuticas en etapas iniciales. La accesibilidad y eficiencia del método facilitan su adopción más amplia en carteras de investigación básica y desarrollo preclínico.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biofármacos
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Permite investigar las vías de lesión cardíaca y los mecanismos de remodelación tras el infarto de miocardio.
- Apoya la validación funcional de dianas terapéuticas en un contexto in vivo relevante para la enfermedad.
- Facilita la reducción mecanicista de riesgos para intervenciones candidatas dirigidas a la reparación cardíaca.
Desarrollo de Cribado y Ensayos
- Proporciona una plataforma estandarizada para evaluar la eficacia de terapias génicas o celulares tras un IAM.
- Genera un tamaño de infarto y una disfunción contráctil reproducibles para evaluación cuantitativa.
- Permite la integración posterior con ensayos de imagen y análisis histológicos para obtener lecturas robustas.
Investigación Traductiva y Preclínica
- Se alinea con puntos finales relevantes para la enfermedad, como el remodelado ventricular y el análisis de supervivencia.
- Permite la continuidad desde el descubrimiento mecanicista hasta la validación terapéutica preclínica.
- Posibilita la evaluación del momento de la intervención y su impacto en los resultados posteriores al infarto de miocardio (post-MI).
Integración de la canalización y flujo de trabajo
Este protocolo de inducción de IM se sitúa en la intersección entre el descubrimiento temprano y la validación preclínica, permitiendo estudios basados en hipótesis y la selección de candidatos en un modelo fisiológicamente relevante.
- Biología del Descubrimiento: Facilita la comprobación de hipótesis sobre los mecanismos de lesión y reparación cardíaca.
- Selección: Proporciona una inducción reproducible de infarto para estudios comparativos de eficacia.
- Análisis: Permite la medición cuantitativa del tamaño del infarto, la función contráctil y la supervivencia.
- Investigación Traducional: Conecta los conocimientos mecanicistas con la evaluación preclínica de terapias in vivo.
- Reutilización Empresarial: Ofrece un modelo escalable y accesible para diversos programas de investigación cardíaca.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva en la validación de dianas y los estudios mecanicistas.
- Valor operativo: Estandariza la inducción de IM, reduciendo la variabilidad técnica y la carga de entrenamiento.
- Valor estratégico: Acelera las decisiones de avance o interrupción de candidatos terapéuticos cardíacos.
- Impacto en la cartera: Permite la priorización ajustada al riesgo de intervenciones dirigidas a la remodelación post-IM.
Consideraciones de Implementación
- Requiere dominio quirúrgico y familiaridad con la anatomía cardíaca de roedores.
- Necesita acceso a instrumentos quirúrgicos básicos y a infraestructura para cuidados posoperatorios.
- Exige estandarización entre equipos para garantizar la reproducibilidad en estudios multicéntricos.
- Adaptable para la administración de terapia génica o celular tras la ligadura, en estudios de intervención.
- Debe monitorearse y reportarse la mortalidad y la variabilidad técnica para asegurar la integridad de los datos.
