Establecimiento de un modelo de pancreatitis aguda grave en ratones mediante inyección retrógrada de taurocolato de sodio en el conducto biliopancreático

Aquí se describe un modelo de ratón de pancreatitis aguda grave. El procedimiento presentado aquí es muy rápido, simple y accesible, lo que potencialmente permite el estudio de los mecanismos moleculares y las diferentes intervenciones terapéuticas en la pancreatitis aguda de una manera conveniente.

El objetivo general de este video es establecer un modelo de ratón de pancreatitis aguda a través de la inyección retrógrada de taurocolato de sodio en el conducto biliopancreático. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Soochow. Todos los procedimientos quirúrgicos se realizaron bajo anestesia completa.

No se utilizaron analgésicos para no interferir con el curso natural de la enfermedad, lo que fue evidenciado por literaturas previas y aprobado por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Soochow. Ayune al ratón de ocho a 12 horas antes de la cirugía. Prepare filtros de solución de taurocolato de sodio al 5% a través de un microfiltro 0.22.

Autoclave los instrumentos y materiales quirúrgicos, incluidos fórceps, tijeras, soporte de cuchillas, soporte de agujas, clip hemostático, abrazaderas vasculares y cortinas estériles. La microjeringilla fue esterilizada mediante irradiación. Con el ratón, induzca una anestesia general con inyección intraperitoneal de solución de sodio de pentobarbital al 1% a una dosis de 50 miligramos por kilogramo.

Fije el ratón en posición supina sobre una placa plana de espuma irradiada con la cinta. Retire el pelaje de un ratón con una crema depilación desde el nivel del proceso xifoide hasta la línea de conexión de la columna ilíaca superior anterior bilateral, con los lados izquierdo y derecho paralelos a la línea axilar frontal. Limpie la piel de dos a tres veces con 0.5% de yodóforo y déjela secar durante uno o dos minutos cada vez.

Cubra el ratón con cortinas estériles. Corte la capa de piel abierta y luego ábrala por vía subcutánea. Haga una incisión abdominal mediana aproximada de dos a tres centímetros de largo.

Localice el duodeno de izquierda a derecha a lo largo del estómago. Tire suavemente del duodeno hacia afuera y hacia el lado izquierdo usando fórceps quirúrgicos y un hisopo de algodón empapado en desinfectante para exponer el páncreas, el conducto biliopancreático y la papila duodenal. Usar 8-0 suturas para pasar a través de la conexión entre el duodeno y el páncreas alrededor de la papila, tire de la sutura hacia el lado izquierdo del cuerpo del ratón para fijar el duodeno.

Tire suavemente de la piel y el borde inferior del hígado a un lado. Sujete el conducto hepático común. Perfore el microinyector en el conducto biliopancreático distal retrógradamente.

Fije la punta de la aguja cerca de la papila duodenal con una pinza. Infundir 10 microlitros de taurocolato de sodio al 5% en el conducto biliopancreático a una velocidad de 5 microlitros por minuto. Mantenga el conducto biliopancreático cerrado durante 5 min para lograr una presión estable.

Retire las abrazaderas. Saque el microinyector, retire la otra abrazadera y fije la sutura. Restaure el duodeno a la posición anatómica original y verifique el sangrado.

Cierre la herida con 6-0 suturas. Retire la cortina estéril. Desinfecte la incisión con yodóforo al 0,5%.

Recupere a los animales de la anestesia en una almohadilla térmica de 37 grados centígrados. Administrar 0,8 mililitros de solución salina al 0,9% por vía subcutánea para la suplementación con líquidos. A las 24 horas después de la operación, anestesiar al ratón con pentobarbital sódico utilizando la misma dosis y la misma vía de inyección.

Recoger la sangre entera de la aorta abdominal y girar a 1, 500 x g durante 15 minutos para aislar el suero para las pruebas serológicas. Recolectar el páncreas y los tejidos pulmonares para la evaluación histología. Sumerja el páncreas en una solución de paraformaldehído al 4% durante 24 horas.

Deshidratar en una serie de concentraciones de alcohol e incrustar en parafina. Use un microtomo para preparar 5 secciones de tejido pancreático micro gruesas. Realizar tinción de H&E para la evaluación histológica del páncreas.

Los ratones estaban ligeramente inactivos y perdieron peso a las 24 horas después de la operación en comparación con la preoperación. Las tasas de supervivencia de los ratones control y SAP fueron del 100% y 72,7% respectivamente, a las 72 horas después de la operación. De acuerdo con los resultados de tinción de H&E de las secciones de páncreas, se pudo observar necrosis pulpar del tejido del páncreas en ratones SAP, mientras que no se pudieron encontrar cambios significativos en ratones de control.

Además, se encontró un aumento significativo de los niveles de actividad de amilasa, lipasa, páncreas y MPO pulmonar en ratones SAP en comparación con ratones control. Además, también se encontraron niveles significativamente elevados de los índices hepático y renal, incluidos ALT, AST, BUN y creatinina. Usando la inyección retrógrada de taurocolato de sodio en el conducto biliopancreático, se pudo inducir pancreatitis aguda grave en ratones.

Buena exposición del conducto biliopancreático para asegurar la punción exitosa. Durante la punción, asegure el ángulo y la fuerza adecuados para evitar la perforación del conducto biliopancreático. El modelo SAP inducido por TC descrito aquí es un modelo adecuado para estudiar los mecanismos implicados en la pancreatitis aguda grave.

Es un modelo económico que utiliza reactivos menos costosos y este video ayuda a capacitar al cirujano novato más rápido.