Lesiones controladas semiautomatizadas inducidas por láser para estudiar la regeneración de la médula espinal en larvas de pez cebra

La técnica que proponemos aquí nos permite superar las limitaciones de los protocolos de lesiones manuales al reducir el daño a los tejidos adyacentes y mejorar la reproducibilidad, incluso para operadores sin experiencia. Esta técnica nos permite elegir con precisión dónde inducir la lesión sin dañar los tejidos circundantes gracias al capilar de vidrio giratorio combinado con un láser UV dirigido. Muchos pasos están involucrados en el funcionamiento del equipo VAST, por lo que recomendaría marcar cada paso a medida que avanza para asegurarse de que todo se haga correctamente.

Comience anestesiando las larvas usando el medio que contiene el anestésico, y luego transfiéralas a una placa de 96 pocillos que contenga 300 microlitros de medio por pozo. Encienda todos los componentes del sistema, incluido el láser para la ablación. Luego, inicie la imagen automatizada del pez cebra, o el software VAST, elija Placa en la primera ventana y haga clic en el botón Listo.