Name: Trasplante de piel murina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Aprende el trasplante de piel murina entre cepas BALB/c y C57BL/6 para estudiar respuestas inmunológicas alogénicas. Este método permite evaluar estrategias de inducción de tolerancia en modelos de rechazo de injertos.

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NIH Inmunología Formación subvención T32 AI 60573 (GRK) y NIH GM 41.514 (MDC)

Antes del inicio del experimento: <ul><li> Obtener la aprobación de IACUC </li><li> Esterilizar los instrumentos quirúrgicos y Q-tips </li></ul> Cosecha I. donantes de tejidos <ol><li> Eutanasia ratón donante (de acuerdo con SOP institución) </li><li> El cabello húmedo de la base de la oreja con alcohol </li><li> Cosecha de piel del donante cortando una oreja en la base </li><li> Coloque el tejido en la placa de hielo </li><li> Oído dividida: una pizca lados ventral y dorsal de tejido en la base de la oreja con una pinza de dientes de rata, con cuidado se separan los tejidos, los tejidos flotar dorsal, la superficie interna hacia abajo, en PBS en hielo; descartar aleta ventral colágeno </li></ol> II. Prepare Receptor de un trasplante <ol><li> Ratón anestesiar utilizando el procedimiento de aprobación </li><li> Administrar analgésicos para aliviar el dolor post-operatorio (es decir, 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex) </li><li> Coloque el cursor en la posición lateral </li><li> Realizar una pizca cara a garantizar los animales es lo suficientemente sedado </li><li> El pelo mojado con alcohol y afeitarse tórax </li><li> Limpie el área limpia con alcohol hisopo </li></ol> III. Trasplante de piel <ol><li> Haga una incisión ~ cm: la piel consistente con pinzas de dientes de ratas y cortar ~ 0.25-0.5 cm por debajo de fórceps </li><li> Quite la piel de los donantes de PBS, lugar encima de la cama del injerto (con la superficie interna de la piel de la oreja hacia lecho del injerto), y eliminar el exceso de PBS estéril con Q-tip </li><li> Con cuidado, cortar la piel del donante en exceso de modo que el trasplante está rotundamente en lecho del injerto (asegurándose de que los bordes del injerto no se doblan bajo y que la corrupción no la resaca sobre la piel del tronco del receptor) </li><li> Envuelva destinatario vendaje estéril (con el segmento de gasa no adhesivo se coloca sobre el injerto de piel) </li><li> Asegúrese de que no se venda muy apretada (evaluar la respiración del animal) y que las armas son libremente móviles </li><li> Vendaje de seguro con una sola sutura de seda 2-0 </li><li> Animales a cabo en jaula limpia (debajo de la lámpara de calefacción hasta los animales se ha recuperado lo suficiente de la anestesia) </li><li> Monitor de 1-2/day receptor de señales de angustia y administrar analgésicos si es necesario para aliviar el dolor </li></ol> IV. Vendaje de eliminación (6-7 días después del trasplante) <ol><li> Ratón anestesiar utilizando el procedimiento de aprobación </li><li> Cortar y retirar la sutura de seda </li><li> Utilizando tijeras de punta roma final, corte con cuidado a través de vendaje (teniendo cuidado de no perturbar injerto) y extraer con cuidado </li><li> Retorno del ratón de la jaula limpia </li><li> Compruebe injerto ~ 8 horas después de la eliminación vendaje en busca de signos de formación de costras o contracción. Si está presente, el injerto puede haber fallado a vascularizan y debe ser considerado como un fallo técnico. </li><li> Diario de los signos de rechazo (por lo general se define como la necrosis ~ 80% del tejido de un donante) </li><li> Los trasplantes alogénicos de piel por lo general rechazan entre d8-12 después de la operación </li></ol> V. Consejos útiles <ol><li> La recolección de los donantes de tejidos cerca de la base de la oreja: 1) maximizar el tamaño del injerto, y 2) proporcionar una proyección desigual ventral que faciliten la separación </li><li> Siempre use una hoja de afeitar nueva para el afeitado destinatario </li><li> Si analgésico se debe administrar ip, administrar antes del trasplante procedimiento para reducir al mínimo después de la operación de manejo (reducir al mínimo la posibilidad de interrumpir el injerto) </li><li> Si es posible, quítese los guantes antes de aplicar el vendaje. Guantes tienden a pegarse el vendaje y complican la aplicación </li><li> La colocación de una sutura simple en el extremo vendaje minimizar eliminación prematura </li><li> El vendaje tan apretado como lo permite evaluar y respiración antes de la colocación de sutura. Si venda está demasiado apretada, animal deja de respirar. Si vendaje está demasiado suelto, los animales se eliminará. </li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Como se ha demostrado en este video-artículo, el modelo de trasplante de piel es un método fácil y rápido para el seguimiento alogénico de células T respuestas. Alogénico trasplante de piel tiene una amplia gama de aplicaciones y se ha utilizado para analizar la eficacia de una variedad de agentes inmunosupresores y los protocolos de inducción de la tolerancia, así como para investigar los efectos biológicos de diferentes anticuerpos bloqueantes.

<table><tbody><tr><td>Pinzas microcirujanas (curvas)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas dentadas (1x2 dientes, rectas)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>Tijeras de estrabismo (extremo romo)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de iris (curvas)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte (en ángulo)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas micro Halsey</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex (clorhidrato de buprenorfina)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>Jeringas para insulina (29 Ga)</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>Hisopos (Q-tips)</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>Cuchillas de afeitar de borde simple (#9)</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda (2-0; PS-2)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

trasplante de piel murina

Murine Skin Transplantation

Como uno de los modelos más exigentes y por lo menos técnicamente difícil, el trasplante de piel es un método estándar de ensayo de las respuestas de acogida de las células T a los antígenos MHC-donantes dispares. El objetivo de este video-artículo es proporcionar al espectador con una demostración paso a paso visual de trasplante de piel mediante el modelo de ratón. El protocolo se divide en cinco componentes principales: 1) la recolección de los donantes de piel, 2) la preparación de receptores para trasplante, y 3) trasplante de piel, 4) la eliminación vendaje y el rechazo del injerto de vigilancia; 5) consejos útiles. Una vez que competente, el procedimiento en sí mismo debe tener &lt;10 minutos para llevar a cabo.

Alogénico de piel el trasplante es un modelo estándar de ensayo de las respuestas de acogida de las células T a los antígenos MHC-donantes dispares. Este vídeo-artículo proporciona un tutorial visual de cada paso involucrado en la realización de un trasplante de BALB/c--&gt; C57BL / 6 la piel.

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Bienvenido al laboratorio del Dr. Michael Kalen. Soy Kim Gard. Hoy demostraremos un modelo de trasplante de piel utilizando la combinación de cepas aloinjertadas BC a seis negras, como uno de los modelos más rigurosos y menos difíciles técnicamente de rechazo de injertos de tejidos.El trasplante de piel es una técnica estándar utilizada para evaluar respuestas aloinmunes y se emplea comúnmente para analizar la eficacia de diversas estrategias de inducción de tolerancia. Comencemos. Este procedimiento comienza con la obtención de la piel del ratón donante BAB.Primero, sacrificar al donante de acuerdo con el POE del IACUC. Luego, humedecer el vello hacia atrás en la base con alcohol, cosechar la piel retirando la oreja lo más cerca posible de la base y colocarla en hielo. A continuación, dividir cada disco de oreja descartando la aleta ventral colágena y flotar el tejido sobre hielo.Ahora la piel del donante está lista para el trasplante. El procedimiento de trasplante comienza anestesiando al animal receptor mediante procedimientos aprobados. Una vez que el receptor esté suficientemente anestesiado, retire al animal de la cámara y administre bup ynext IP para aliviar el dolor.Coloqu

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

En este informe se describe la piel en tres dimensiones reconstruir el modelo que imita la piel humana en la arquitectura y la composición. Fisiología de los melanocitos, la progresión del melanoma y el destino de las células madre dérmicas han sido investigados con la piel reconstruir el modelo. El modelo es también útil como una herramienta para la evaluación preclínica de medicamentos.

La piel humana tridimensional Reconstrucción del modelo: una herramienta para estudiar la piel normal y la progresión del melanoma

Tejido análisis específico de un modelo de regeneración del folículo del pelo utilizando lentivirus para mediar ganancia o pérdida de función.

El análisis genético rápido de epitelio-mesenquimal de señalización durante la regeneración del cabello

Este video muestra un método para injertar piel humana en un ratón inmunodeficiente con una respuesta de neutrófilos suprimida. El método consiste en aplicar piel humana de espesor dividido al lecho de injerto del ratón, sellarlo y cubrirlo para su recuperación. Eventualmente, la piel humana se adhiere a la piel del ratón, estableciendo la vascularización y la circulación, lo que resulta en un xenoinjerto de piel exitoso.

Una técnica para el injerto de piel humana en un modelo de ratón

Neisseria meningitidis es un patógeno específico humana que infecta a los vasos sanguíneos. En este protocolo microvasos humanos se introducen en un ratón mediante el injerto de piel humana en ratones inmunodeprimidos. Las bacterias se adhieren ampliamente a los vasos humanos, dando lugar a daño vascular y el desarrollo de la erupción purpúrica típicamente observado en casos humanos.

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Murino de trasplante de todo el espesor de la piel es un modelo bien establecido para estudiar el rechazo en un entorno aloinmune. A continuación, ofrecemos un tutorial de cada paso que participan en la realización de un c BALB / -&gt; C57BL 6 trasplante de piel / de espesor total.

Murino de grosor completo Trasplante de Piel

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Generación de 3D piel organoide de cable derivadas de sangre inducida por las células de vástago Pluripotent

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Un modelo murino de una herida de quemadura reconstruida con un injerto de piel alogénico

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