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DOI: 10.3791/63484-v
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La microscopía de dispersión Raman estimulada (SRS) es una técnica de imagen potente, no destructiva y sin etiquetas. Una aplicación emergente es la histología Raman estimulada, donde las imágenes SRS de dos colores en las transiciones Raman de proteínas y lípidos se utilizan para generar imágenes de pseudo-hematoxilina y eosina. Aquí, demostramos un protocolo para imágenes SRS de dos colores en tiempo real para el diagnóstico de tejidos.
Este protocolo demostrará la implementación y optimización de la microscopía SRS de enfoque espectral y cómo se puede utilizar para aplicaciones de histología Raman estimulada en tiempo real. La principal ventaja de esta técnica es la velocidad a la que se pueden procesar las muestras una vez que la instrumentación está correctamente alineada, ya que SRS no requiere procesamiento y tinción de tejidos. Este protocolo es aplicable a otras aplicaciones de SRS, no solo a la histología.
Tales aplicaciones incluyen moléculas pequeñas, medicamentos, células y tejidos. Comience instalando un par de lentes acromáticas para el haz de la bomba para aumentar el tamaño del rayo láser por dos veces como punto de partida. Coloque una lente de 100 y 200 milímetros a aproximadamente 300 milímetros entre sí.
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