Caracterización ecocardiográfica de la estructura, función y flujo coronario del ventrículo izquierdo en ratones neonatos

Este protocolo se puede utilizar para estudiar el papel de las alteraciones genéticas o las intervenciones farmacológicas en la función cardíaca y el flujo coronario en edades postnatales tempranas. La principal ventaja de esta técnica es el reconocimiento precoz de cardiopatologías y estudios de seguimiento longitudinal en hemodinámica ventricular izquierda y parámetros de flujo coronario en diferentes modelos de ratones. Los estudios ecocardiográficos en ratones neonatos son técnicamente desafiantes.

Este protocolo está diseñado para estudiar la aparición temprana de enfermedades cardiovasculares en ratones neonatos que pueden permitir a los investigadores diseñar las medidas terapéuticas adecuadas. Comience colocando el gel de ECG en las almohadillas de electrodos de la plataforma calentada. Coloque tiras de papel de aluminio en la parte superior de las almohadillas de electrodos para ampliar el rango de electrodos y asegúrelas con cinta adhesiva.

Posteriormente, coloque el gel de ECG encima de las tiras de aluminio. Asegúrese de que el gel debajo de las tiras de papel de aluminio no se seque durante el procedimiento. Si eso ocurre, agregue más gel para mantener la conductividad.

Coloque al cachorro anestesiado en posición supina en la plataforma de imágenes y asegure el dedo del guante recortado alrededor de la nariz del cachorro. Coloque las patas encima de las almohadillas de papel de aluminio y asegúrelas con cinta adhesiva. Asegúrese de que el circuito eléctrico esté completo y que el ECG esté grabando.

Use dos rollos de gasa para mantener el gel de ultrasonido en su lugar. Coloque una capa gruesa de gel de ultrasonido precalentado en la parte superior del cuerpo del cachorro. Use una lámpara de calefacción para mantener la temperatura corporal normal del cachorro.

Realizar ecocardiografía transtorácica utilizando un instrumento de ecocardiografía equipado con un transductor de matriz lineal a 40 megahercios para el modo B y a 32 megahercios para Doppler siguiendo los protocolos de ecocardiografía de ratones adultos. Coloque el transductor en el soporte con la marca de índice hacia el hombro derecho del cachorro. Baje el transductor hasta que esté en contacto con el gel y visualice el tracto de salida del ventrículo izquierdo en modo B.

Evite ejercer una presión excesiva sobre la cavidad torácica del cachorro al colocar el ecotransductor durante la adquisición de imágenes ecocardiográficas. Capture la vista del eje largo paraesternal del ventrículo izquierdo, el tracto de salida del ventrículo izquierdo y la aurícula izquierda. Use M-Mode en las valvas aórticas para medir el diámetro máximo de la aurícula izquierda en N-sístole.

Grabe los datos pulsando el botón Cine Store. Gire el transductor alrededor de 90 grados en el sentido de las agujas del reloj del eje largo paraesternal para obtener la vista del eje corto paraesternal. Capture la vista paraesternal de eje corto del ventrículo izquierdo para medir las dimensiones de la cámara, el grosor de la pared, el flujo aórtico y el flujo pulmonar.

Coloque la sonda al nivel de los músculos papilares y use el modo M para medir los diámetros internos del ventrículo izquierdo y el grosor de la pared durante la sístole y la diástole. Grabe los datos pulsando el botón Cine Store. Mueva el transductor hacia la base del corazón y use el Doppler color para visualizar la arteria pulmonar.

Presione Pulse Wave Doppler para cuantificar la velocidad del flujo máximo pulmonar, los perfiles de flujo pulmonar, el tiempo de eyección pulmonar y el tiempo de aceleración pulmonar. Grabe los datos pulsando el botón Cine Store. Mueva el transductor más hacia la base y use Doppler color para visualizar el flujo aórtico.

Utilice el Doppler de ondas de pulso para visualizar el flujo sanguíneo y medir el tiempo de eyección aórtica. Grabe los datos pulsando el botón Cine Store. Para capturar la vista apical de cuatro cámaras, coloque la plataforma en la posición de Trendelenburg, inclínela hacia la izquierda y ajuste la sonda para visualizar las cuatro cámaras.

Use Doppler color para visualizar el flujo sanguíneo y Doppler de onda de pulso en la punta de las valvas de la válvula mitral en el centro del orificio de la válvula mitral para registrar el flujo mitral. Grabe los datos pulsando el botón Cine Store. Use Doppler tisular en el lado septal del anillo de la válvula mitral en una vista de cuatro cámaras para medir la velocidad máxima de relajación miocárdica en el llenado diastólico temprano y el llenado diastólico tardío, así como la velocidad máxima de contracción miocárdica sistólica.

Grabe los datos pulsando el botón Cine Store. Capture la vista modificada del eje largo paraesternal para examinar la arteria coronaria descendente anterior izquierda. Utilice una vista de eje largo paraesternal modificada, moviendo el transductor lateralmente.

Mueva la sonda y use Doppler color para visualizar el origen de la arteria coronaria principal izquierda que se genera a partir de la aorta. Identificar la arteria descendente anterior izquierda que se genera desde la arteria coronaria principal izquierda y corre entre la pared anterior del ventrículo izquierdo y el tracto de salida del ventrículo derecho. En esta posición, mida el flujo de la arteria coronaria descendente anterior izquierda presionando Doppler de onda de pulso.

Grabe los datos pulsando el botón Cine Store. Aumente la concentración de isoflurano al 2,5% y espere cinco minutos para lograr el flujo máximo. Grabe los datos pulsando el botón Cine Store.

En la vista del eje largo paraesternal, se utilizó el modo M para medir el diámetro de la aurícula izquierda. La vista paraesternal de eje corto se utilizó para medir las dimensiones de la cámara ventricular izquierda y el grosor de la pared, el flujo pulmonar y el flujo aórtico. La vista apical de cuatro cámaras se utilizó para examinar las velocidades de flujo sanguíneo a través de la válvula mitral, así como las velocidades de relajación y contracción miocárdica en el anillo de la válvula mitral.

La vista de eje largo paraesternal modificada se utilizó para examinar los parámetros de flujo de la arteria coronaria descendente anterior izquierda. Los valores aumentados de la velocidad máxima del flujo coronario, la velocidad media del flujo coronario y la integralidad velocidad/tiempo cinco minutos después del incremento del isoflurano confirmaron la respuesta esperada a la hiperemia en los ratones neonatos. Debido al pequeño tamaño de los cachorros, es importante mantener su temperatura corporal normal y colocar tiras de papel de aluminio en sus extremidades para llegar a las electroalmohadillas y crear un circuito de ECG.