Uso de una inyección de trazador celular para investigar el origen de las células formadoras de neointima en un modelo de pared lateral saccular de rata

Mediante el uso de una aplicación directa de trazador de células intraaortales, podemos analizar el papel de las células endoteliales que se originan en la arteria madre en la formación de neointima en dos puntos de tiempo diferentes. Una gran ventaja de esta técnica es una inyección directa, de un punto, interpretativa in vivo que hace de este modelo una técnica robusta y reproducible. Antes de la cirugía, incubar las bolsas arteriales de ratas donantes en dodecil sulfato de sodio al 0,1% durante 10 horas a 37 grados centígrados para obtener aneurismas descelularizados.

Recoja estas bolsas de animales donantes unos días antes de la cirugía. Para comenzar, analice el comportamiento del animal e inspeccione las membranas mucosas y la turgencia como parte del examen clínico preoperatorio. Registra el peso de cada animal.

Para la inducción de la anestesia, coloque a todas las ratas en una caja limpia provista de oxígeno hasta la pérdida del conocimiento después de cinco a 10 minutos. Comprobar la profundidad de la anestesia por la ausencia del reflejo de retirada del pedal. Coloque las ratas en posición supina y afeite el área toracoabdominal con una afeitadora eléctrica.

Con cinta adhesiva, fije las patas de la rata en una placa cubierta por una almohadilla térmica conectada a una sonda rectal autorreguladora. Inserte la sonda rectal en el ano de la rata para mantener la temperatura deseada de 37 grados centígrados con la ayuda de una almohadilla térmica. Luego instale un sensor en la pata trasera derecha conectado a un sistema computarizado para verificar los signos vitales intraoperatoriamente.

Para el cuidado perianestésico, aplique un lubricante oftálmico estéril en los ojos y cúbralos con una máscara de lámina opaca para evitar el secado y el daño de la lámpara quirúrgica. Desinfecte el campo quirúrgico con povidona yodada y cubra el campo quirúrgico de manera estéril. Coloque un micro hisopo con acolchado púrpura debajo de las partes proximal y distal de la aorta para visualizar mejor la arteria tan pronto como se separe de la vena caval.

Luego proteja el abdomen con una gasa blanca. El día de la operación, disuelva dos microlitros del trazador celular mediante pipeteo en un mililitro de PBS. Transfiera la mezcla a una jeringa de un mililitro equipada con una cánula.

Apague la luz en el quirófano. Con un microscopio, realice la inyección de un punto en la parte ventral media de la aorta con micro fórceps e inyecte cuidadosamente un mililitro de solución salina 0,9% heparinizada. Inyecte el trazador celular con cuidado e inmediatamente apague el microscopio operativo también.

Proteja el abdomen con una gasa húmeda nuevamente. Deje que el tinte se incube durante al menos 15 minutos. Luego encienda el microscopio y las luces de la sala de operaciones.

Utilice micro pinzas y micro tijeras para realizar la arteriotomía longitudinal de modo que su longitud promedie el diámetro del aneurisma cosechado. Coloque el aneurisma al lado de la aorta antes de realizar la arteriotomía para asegurar la longitud correcta. Sutura el aneurisma con ocho a 10 puntos individuales usando una sutura 10-0 no absorbible.

Antes de la puntada final, entregue la bobina con una densidad de embalaje de un centímetro. Se puede realizar un tratamiento de bobina o stent en este modelo. Luego retire cuidadosamente las abrazaderas temporales, comenzando distalmente, bajo riego continuo con solución salina heparinizada.

Cierre la herida en capas. Al final de la cirugía, invierta la anestesia con una inyección subcutánea. Deje que cada animal operado se recupere en una jaula limpia hasta que esté completamente despierto y caliente según sea necesario con una lámpara de calefacción.

Los volúmenes basales de aneurisma extraídos para el día siete y el día 21 no difirieron significativamente para los aneurismas descelularizados o vitales entre los grupos de tratamiento con bobina o stent. Los volúmenes de FU extraídos para los aneurismas descelularizados mostraron un crecimiento no significativo del aneurisma en espiral en comparación con los aneurismas con stent. El volumen de FU extraído fue significativamente mayor en el grupo vital en espiral que en el grupo con stent.

Las cantidades de células positivas para trazadores celulares en la neointima de aneurismas descelularizados no difirieron significativamente entre los grupos de stent o tratados con espiral en el día siete FU, pero fueron significativamente mayores en ratas con stent en el día 21 FU.No se observaron diferencias significativas en ratas suturadas con aneurisma vital a los siete días o 21 días FU.In aneurismas descelularizados a los siete días fu, significativamente más células positivas para trazadores celulares permanecieron en el trombo del grupo tratado con stent en comparación con el grupo tratado con bobina. Esta diferencia no se observó en los aneurismas vitales a los siete días de FU. Recuerde apagar siempre las luces en la sala de operaciones antes de inyectar el marcador celular para evitar que se desvanezca. Además, deje incubar el tinte durante al menos 15 minutos.