Name: Microscopía subcelular intravital de la glándula mamaria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 14 s
Description: Aprende microscopía confocal y multiphotónica intravital de la glándula mamaria lactante en ratón usando EGFP y BODIPY. Este método permite visualizar dinámicas celulares y gotas lipídicas en tiempo real.

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<ol><li>Scheele, C. L. G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identity+and+dynamics+of+mammary+stem+cells+during+branching+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identity and dynamics of mammary stem cells during branching morphogenesis.</a> Nature. 542 (7641), 313-317 (2017).</li>
<li>Dawson, C. A., Mueller, S. N., Lindeman, G. J., Rios, A. C., Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+of+dynamic+single-cell+behavior+in+mouse+mammary+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy of dynamic single-cell behavior in mouse mammary tissue.</a> Nature Protocols. 16 (4), 1907-1935 (2021).</li>
<li>Kedrin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+metastatic+behavior+through+a+mammary+imaging+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of metastatic behavior through a mammary imaging window.</a> Nature Methods. 5 (12), 1019-1021 (2008).</li>
<li>Ewald, A. J., Werb, Z., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic%2C+long-term+in+vivo+imaging+of+tumor-stroma+interactions+in+mouse+models+of+breast+cancer+using+spinning-disk+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Dynamic, long-term in vivo imaging of tumor-stroma interactions in mouse models of breast cancer using spinning-disk confocal microscopy.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (2), (2011).</li>
<li>Ellenbroek, S. I. J., van Rheenen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+hallmarks+of+cancer+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Imaging hallmarks of cancer in living mice.</a> Nature Reviews Cancer. 14 (6), 406-418 (2014).</li>
<li>Dawson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+ductal+macrophages+survey+the+mammary+epithelium+and+facilitate+tissue+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident ductal macrophages survey the mammary epithelium and facilitate tissue remodelling.</a> Nature Cell Biology. 22 (5), 546-558 (2020).</li>
<li>Ebrahim, S., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+in+mammalian+multicellular+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy in mammalian multicellular organisms.</a> Current Opinion in Cell Biology. 59, 97-103 (2019).</li>
<li>Masedunskas, A., Weigert, R., Mather, I. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMasedunskas%2C+A+%22Advances+in+Intravital+Microscopy%22">Advances in Intravital Microscopy</a>. Weigert, R. , Weigert) Springer-Verlag. Netherlands. 187-204 (2014).</li>
<li>Masedunskas, A., Chen, Y., Stussman, R., Weigert, R., Mather, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+milk+lipid+droplet+transport%2C+growth%2C+and+secretion+revealed+by+intravital+imaging%3A+lipid+droplet+release+is+intermittently+stimulated+by+oxytocin%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Kinetics of milk lipid droplet transport, growth, and secretion revealed by intravital imaging: lipid droplet release is intermittently stimulated by oxytocin.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (7), 935-946 (2017).</li>
<li>Stevenson, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiscale+imaging+of+basal+cell+dynamics+in+the+functionally-mature+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Multiscale imaging of basal cell dynamics in the functionally-mature mammary gland.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (43), 26822-26832 (2020).</li>
<li>Shan, S., Sorg, B., Dewhirst, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rodent+mammary+window+of+orthotopic+breast+cancer+for+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">A novel rodent mammary window of orthotopic breast cancer for intravital microscopy.</a> Microvascular Research. 65 (2), 109-117 (2003).</li>
<li>Zomer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+report%3A+Intravital+imaging+of+cancer+stem+cell+plasticity+in+mammary+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Brief report: Intravital imaging of cancer stem cell plasticity in mammary tumors.</a> Stem Cells. 31 (3), 602-606 (2013).</li>
<li>Harper, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+early+dissemination+and+metastasis+in+Her2%2B+mammary+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanism of early dissemination and metastasis in Her2+ mammary cancer.</a> Nature. 540 (7634), 588-592 (2016).</li>
<li>Burgoyne, R. D., Duncan, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretion+of+milk+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Secretion of milk proteins.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 3 (3), 275-286 (1998).</li>
<li>Monks, J., Neville, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Albumin+transcytosis+across+the+epithelium+of+the+lactating+mouse+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+London%22%5BJournal%5D)">Albumin transcytosis across the epithelium of the lactating mouse mammary gland.</a> Journal of Physiology London. 560, 267-280 (2004).</li>
<li>Boisgard, R., Chanat, E., Lavialle, F., Pauloin, A., Ollivier-Bousquet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roads+taken+by+milk+proteins+in+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Livestock+Production+Science%22%5BJournal%5D)">Roads taken by milk proteins in mammary epithelial cells.</a> Livestock Production Science. 70 (1-2), 49-61 (2001).</li>
<li>Green, K. A., Lund, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ECM+degrading+proteases+and+tissue+remodelling+in+the+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">ECM degrading proteases and tissue remodelling in the mammary gland.</a> Bioessays. 27 (9), 894-903 (2005).</li>
<li>Lund, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+phases+of+apoptosis+in+mammary+gland+involution%3A+proteinase-independent+and+-dependent+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Two distinct phases of apoptosis in mammary gland involution: proteinase-independent and -dependent pathways.</a> Development. 122 (1), 181-193 (1996).</li>
<li>Abe, T., Fujimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reporter+mouse+lines+for+fluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Develoment+Growth+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Reporter mouse lines for fluorescence imaging.</a> Develoment Growth and Differentiation. 55 (4), 390-405 (2013).</li>
<li>Hadjantonakis, A. K., Gertsenstein, M., Ikawa, M., Okabe, M., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+green+fluorescent+mice+by+germline+transmission+of+green+fluorescent+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Generating green fluorescent mice by germline transmission of green fluorescent ES cells.</a> Mechanisms of Development. 76 (1-2), 79-90 (1998).</li>
<li>Mazumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45 (9), 593-605 (2007).</li>
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<li>Yang, H. -J., Hsu, C. -L., Yang, J. -Y., Yang, W. -Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monodansylpentane+as+a+blue-fluorescent+lipid-droplet+marker+for+multi-color+live-cell+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Monodansylpentane as a blue-fluorescent lipid-droplet marker for multi-color live-cell imaging.</a> PloS One. 7 (3), 32693(2012).</li>
<li>Ebrahim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+polyhedral+actomyosin+lattices+remodel+micron-scale+curved+membranes+during+exocytosis+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Dynamic polyhedral actomyosin lattices remodel micron-scale curved membranes during exocytosis in live mice.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 933-939 (2019).</li>
<li>Meyer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+predictive+3D+multi-scale+model+of+biliary+fluid+dynamics+in+the+liver+lobule%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Systems%22%5BJournal%5D)">A predictive 3D multi-scale model of biliary fluid dynamics in the liver lobule.</a> Cell Systems. 4 (3), 277-290 (2017).</li>
<li>Macias, H., Hinck, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+gland+development%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Mammary gland development.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews Developmental Biology. 1 (4), 533-557 (2012).</li>
<li>Mather, I. H., Masedunskas, A., Chen, Y., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symposium+review%3A+Intravital+imaging+of+the+lactating+mammary+gland+in+live+mice+reveals+novel+aspects+of+milk-lipid+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Symposium review: Intravital imaging of the lactating mammary gland in live mice reveals novel aspects of milk-lipid secretion.</a> Journal of Dairy Science. 102 (3), 2760-2782 (2019).</li>
<li>Caspi, A., Granek, R., Elbaum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+diffusion+in+active+intracellular+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+Letters%22%5BJournal%5D)">Enhanced diffusion in active intracellular transport.</a> Physical Review Letters. 85, 5655-5658 (2000).</li>
<li>Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+magic%3A+multiphoton+microscopy+in+the+biosciences%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences.</a> Nature Biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).</li>
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<li>Ewald, A. J., Werb, Z., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+vital+signs+for+long-term+survival+of+mice+under+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Monitoring of vital signs for long-term survival of mice under anesthesia.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (2), 5563(2011).</li>
<li>Ewald, A. J., Werb, Z., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+mice+for+long-term+intravital+imaging+of+the+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of mice for long-term intravital imaging of the mammary gland.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (2), 5562(2011).</li>
<li>Nishinakagawa, H., Mochizuki, K., Nishida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+blood+supply+to+the+mammary+glands+of+the+mouse%2C+rat%2C+hamster+and+guinea-pig%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Zoological+Science%22%5BJournal%5D)">On the blood supply to the mammary glands of the mouse, rat, hamster and guinea-pig.</a> Japanese Journal of Zoological Science. 39 (7), 283-291 (1968).</li>
<li>Parslow, A., Cardona, A., Bryson-Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sample+drift+correction+following+4D+confocal+time-lapse+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Sample drift correction following 4D confocal time-lapse imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e51086(2014).</li>
<li>Palade, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+aspects+of+the+process+of+protein+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intracellular aspects of the process of protein synthesis.</a> Science. 189 (4200), 347-358 (1975).</li>
<li>Heald, C. W., Saacke, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytological+comparison+of+milk+protein+synthesis+of+rat+mammary+tissue+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Cytological comparison of milk protein synthesis of rat mammary tissue in vivo and in vitro.</a> Journal of Dairy Science. 55 (5), 621-628 (1972).</li>
<li>Hunziker, W., Kraehenbuhl, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+transcytosis+of+immunoglobulins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Epithelial transcytosis of immunoglobulins.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 3 (3), 287-302 (1998).</li>
<li>Messal, H. A., van Rheenen, J., Scheele, C. L. G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intravital+microscopy+toolbox+to+study+mammary+gland+dynamics+from+cellular+level+to+organ+scale%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">An intravital microscopy toolbox to study mammary gland dynamics from cellular level to organ scale.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 26 (1), 9-27 (2021).</li>
<li>Teter, B. B., Sampugna, J., Keeney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+fat+depression+in+C57Bl%2F6J+mice+consuming+partially+hydrogenated+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Milk fat depression in C57Bl/6J mice consuming partially hydrogenated fat.</a> Journal of Nutrition. 120 (8), 818-824 (1990).</li>
<li>Russell, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+of+the+mammary+epithelium+with+adenovirus+vectors+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Transduction of the mammary epithelium with adenovirus vectors in vivo.</a> Journal of Virology. 77 (10), 5801-5809 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>láser 488</td><td>Melles-Griot-CW</td><td></td><td>&nbsp; láser 50 mW</td></tr><tr><td>60x Objetivo de inmersión en aceite PLAPON (NA 1.42)</td><td>Olympus</td><td>1-U2B933</td><td>Lente Microscopio confocal</td></tr><tr><td>633 láser</td><td>Melles-Griot-CW</td><td></td> <td>He-Ne láser 12 mW</td></tr><tr><td>Objetivo 63x (NA 1.40, HC PL APO CS2)</td><td>Lente Leica</td><td>11506350</td><td>Microscopio de dos fotones</td></tr><tr><td>BA 410-460 nm</td><td>Chroma</td><td>-</td><td>Filtro de paso de banda</td></tr><tr><td>BA 495-540 nm</td> Filtro <td>de</td> <td>paso</td>de <td>banda cromático</td></tr> <tr><td>BA 505-605 nm</td> Filtro <td>de</td> <td>paso</td>de <td>banda</td></tr> <tr><td>cromático BA 655-755 nm</td><td>Filtro</td><td></td> de <td>paso de</td>banda</tr> de <tr><td>cromo Boro-dipirrometano (BODIPY) 665/676</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B3932</td><td>Sensor de peroxiación lipídica</td></tr><tr><td>Carbomer-940</td><td>Snowdrift Farm</td><td>739601480651</td> Catéter <td>de gel</td></tr><tr><td></td><td>Terumo</td><td>SV27EL</td><td>Equipos de infusión con alas&nbsp;</td></tr><tr><td>Cauterizador&nbsp;</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>GEM 5917</td><td>Sistema de cauterio</td></tr><tr><td>CMV-Cre ratón&nbsp;</td><td>Línea de ratones</td> <td>Jackson lab</td><td>006054</td></tr><tr><td>Coverslip</td><td>Bioptechs-Labio</td> <td>de</td> <td>30 mm de diámetro para microscopio invertido</td></tr><tr><td>Curity 4x4 pulgadas gasa de esponja multiusos</td><td>Covidien</td><td>9024</td><td>Esponja</td></tr><tr><td>EGFPcito ratón</td><td>Jackson lab</td><td>003291</td><td>línea de ratones</td></tr><tr><td>Software Fiji/ImageJ Herramienta</td> <td>de</td> software <td>libre de código abierto</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas finas</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>FC003 8</td><td>Pinzas de tejido</td></tr><tr><td>Microscopio Fluoview 1000</td><td>Microscopio confocal</td><td>Olympus</td><td>FV1000</td></tr><tr><td>Software FluoView</td> <td>Microscopio Olympus-Confocal y microscopio de dos fotones</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Maquinilla de afeitar eléctrica de mano</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>CLP-8786-451A</td><td>Cortapelos inalámbricos</td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>DPIP</td><td>Almohadilla térmica para animales</td></tr><tr><td>Detectores HyD</td><td></td> <td>Leica-Leica</td> <td>4Tune Detector espectral</td></tr><tr><td>Imaris Software</td><td>Bitplane / Oxford</td> <td>instruments-Herramienta de</td> <td>software comercial</td></tr><tr><td>Ingisht X3 láser sintonizable</td><td>Spectra Physics</td><td>Insight X3</td><td>Láser de pulso sintonizable</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>VetOne</td><td>13985-046-40</td><td>Ketamina anestésica</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>VetOne</td><td>13985-702-10</td><td>Anestésico</td></tr><tr><td>LAS X Software</td><td>Leica-Herramienta</td><td></td> <td>de software para microscopio de dos</td></tr><tr><td>fotones Láser sintonizable Mai-Tai</td><td>Spectra Physics</td><td>Mai-Tai</td><td>Laser</td></tr><tr><td>MetaMorph</td><td>Molecular</td> <td>Devices-Herramienta</td> <td>de software comercial</td></tr><tr><td>Monodansilpentano AUTODOT</td><td>Abcepta</td><td>Sm1000a</td><td>Colorante lipídico para gotas</td></tr><tr><td>MPE-RS microscopio</td><td>Olympus</td><td>IX70</td><td>Microscopio de dos fotones</td></tr><tr><td>ratón mT/mG</td><td>Jackson lab</td><td>007676</td><td>línea Mouse</td></tr><tr><td>Calentador de objetivos</td><td>Bioptechs</td><td>150819</td><td>Calentador de objetivos para microscopios confocales y de dos fotones</td></tr><tr><td>Cámara de respiración saturada de oxígeno</td><td>Patterson Scientific</td><td>78933385, SAS3 y EVAC4</td><td>Sistema de anestesia y evacuación de gases&nbsp;</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Heathrow Scientific HS234526B</td><td></td><td>Detector PMT de película termoplástica semitransparente, flexible y semitransparente</td></tr><tr><td></td><td>Olympus-Descanned</td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; detectores</td></tr><tr><td>PMT</td> detector <td>LSM-Technology</td><td>Detectores no desescaneados</td><td>hechos a medida</td></tr><tr><td>Bomba</td> Harvard <td>Apparatus 703602</td><td>, 704402</td><td>Inyector y controlador de nanomito Calidad salina</td></tr><tr><td></td><td>Biológico</td><td>114-055-721EA</td><td>Solución salina normal</td></tr><tr><td>Tijeras afiladas de punta roma</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>SCT-S 508</td><td>Tijeras quirúrgicas</td></tr><tr><td>Jeringa</td><td>Covidien</td><td>22-257-150</td><td>Jeringa de tuberculina de 1 ml</td></tr><tr><td>TCS SP8 Microscopio espectral de buceo</td><td>Leica</td><td>SP8</td><td>Microscopio de dos fotones</td></tr><tr><td>Pinzas&nbsp;</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>FC032</td><td>Pinza de tejido</td></tr><tr><td>Xilacina&nbsp;</td><td>VetOne</td><td>13985-704-10</td><td>Anestésico</td></tr></tbody></table>

microscopía subcelular intravital de la glándula mamaria

Intravital Subcellular Microscopy of the Mammary Gland

La leche es secretada por células epiteliales alveolares polarizadas, que se diferencian durante el embarazo de las yemas de un árbol extenso dúctular26 (Figura 2A). Los precursores para la síntesis de leche se asimilan a través de las membranas basales/laterales y los productos completos se secretan a través de la superficie apical en un "espacio lácteo" central. El lado basal de cada alvéolo está cubierto por un conjunto estrellado de células mioepiteliales (<strong...

Microscopía subcelular intravital de la glándula mamaria

The mammary gland constitutes a model par excellence for investigating epithelial functions, including tissue remodeling, cell polarity, and secretory ...

intravital-subcellular-microscopy-of-the-mammary-gland

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Imagen de lapso de tiempo se utiliza para evaluar el comportamiento de las células mamarias preneoplásicas primarias epiteliales derivadas de los modelos de ratón genéticamente modificadas de riesgo de cáncer de mama para determinar si existen correlaciones entre los parámetros de comportamiento específicas y distintas lesiones genéticas.

Time-lapse de imágenes de Primaria preneoplásicas células epiteliales mamarias derivadas de los modelos de ratones genéticamente modificados del cáncer de mama

Microscopía intravital es una poderosa herramienta que permite obtener imágenes diferentes procesos biológicos en los animales vivos. En este artículo, presentamos un método detallado para obtener imágenes de la dinámica de las estructuras subcelulares, tales como los gránulos de secreción, en las glándulas salivales de ratones vivos.

Microscopia intravital para formar imágenes de estructuras subcelulares en ratones vivos que expresan proteínas fluorescentes

Un protocolo para la entrega intraductal no invasiva de los reactivos acuosos para la glándula mamaria de ratón se describe. El método se aprovecha de la inyección localizada en los pezones de las glándulas mamarias dirigidos específicamente conductos mamarios. Esta técnica es adaptable para una variedad de compuestos que incluyen ARNsi, agentes quimioterapéuticos y moléculas pequeñas.

Inyección intraductal de entrega de la droga localizada a la glándula mamaria de ratón

El protocolo de inmunofluorescencia indirecta descrito en este artículo permite la detección y la localización de las proteínas en la glándula mamaria del ratón. Un método completo se da para preparar muestras de glándula mamaria, para llevar a cabo la inmunohistoquímica, a la imagen las secciones de tejido mediante microscopía de fluorescencia, y para reconstruir imágenes.

Inmunofluorescencia indirecta en secciones congeladas de ratón Glándula Mamaria

Este protocolo describe el uso de la microscopía multifotónica para realizar extendida time-lapse de las interacciones multicelulares en tiempo real, en vivo a una resolución de una sola célula.

Prolongado lapso de tiempo intravital de imágenes de tiempo real multicelular Dinámica en el microambiente tumoral

Aquí, describimos una técnica para la administración localizada de reactivos a la glándula mamaria del conejo a través de una inyección intraductal. Además, describimos un protocolo para la visualización y la confirmación de la administración mediante ecografía de alta resolución de agentes de contraste.

Intraductal La entrega al conejo Glándula Mamaria

Aquí, presentamos un protocolo para el aislamiento de entero, intacto el ratón glándulas mamarias para investigar la expresión de matriz extracelular (ECM) y morfología ductal. Las glándulas abdominales de ratón #4 se extrajeron de ratones femeninos nulíparas del 8-10 semanas de edad fijado en formalina tamponada neutra, seccionadas y teñido mediante inmunohistoquímica para las proteínas de la ECM.

Aislamiento de las glándulas mamarias del ratón intacto, todo para el análisis de expresión de la matriz extracelular y la morfología de la glándula

Aquí se presenta un enfoque para imágenes intravitales a largo plazo utilizando ventanas de silicona ópticamente transparentes que se pueden pegar directamente al tejido / órgano de interés y la piel. Estas ventanas son más baratas y versátiles que otras utilizadas actualmente en el campo, y la inserción quirúrgica causa inflamación y angustia limitadas a los animales.

Imágenes intravitales longitudinales a través de ventanas de silicona transparente

Este protocolo describe una nueva ventana de imágenes mamarias con una tapa reemplazable (R.MIW). La microscopía intravital después de la implantación del R.MIW permite obtener imágenes longitudinales y de varios días de la glándula mamaria sana y enferma con una resolución celular durante las diferentes etapas del desarrollo.

Microscopía intravital longitudinal con una ventana de imágenes mamarias con tapa reemplazable

El método de imágenes intravitales descrito aquí utiliza la segunda generación armónica de colágeno y la fluorescencia endógena del cofactor metabólico NAD(P)H para segmentar de forma no invasiva un microambiente tumoral no etiquetado en compartimentos tumorales, estromales y vasculares para un análisis en profundidad de imágenes intravitales 4D.

Un enfoque de segmentación sin etiquetas para imágenes intravitales del microambiente tumoral mamario

El presente protocolo describe la inyección intraductal de vectores virales a través de la tetina para administrar genes de interés en las células epiteliales mamarias.

In vivo Entrega de genes en células epiteliales mamarias de ratón a través de inyección intraductal mamaria

Aprende microscopía confocal y multiphotónica intravital de la glándula mamaria lactante en ratón usando EGFP y BODIPY. Este método permite visualizar dinámicas celulares y gotas lipídicas en tiempo real.

Microscopía subcelular intravital de la glándula mamaria

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