Genética inversa para diseñar variantes de virus de ARN de sentido positivo

El protocolo aquí descrito permite la generación aleatoria de bibliotecas de ARN de longitud completa mutagenizadas aleatoriamente de genomas virales de ARN de cadena única de hasta 10 kilobytes de longitud, y la selección de fenotipos de interés en las condiciones experimentales deseadas. Esta técnica puede crear bibliotecas de ARN viral de longitud completa con diferentes niveles de diversidad genética en poco tiempo utilizando un enfoque libre de clonación. La técnica utiliza reactivos baratos y ampliamente disponibles para la síntesis de bibliotecas.

Shaheen Khan, estudiante de doctorado de la Sección de Virología del Departamento de Ciencias de la Vida de la Universidad Shiv Nadar, demostrará el procedimiento. Para comenzar, realice ep-PCR preparando la mezcla maestra para cuatro conjuntos de experimentos con cebadores directos e inversos junto con los componentes de reacción sin la plantilla pJFH1, como se describe en el manuscrito de texto. Alícuota de la mezcla maestra en cuatro tubos.