Técnicas de disección y muestreo histológico del corazón en grandes modelos animales para enfermedades cardiovasculares

Las diferencias estructurales en el corazón entre especies e individuos, así como las discrepancias en la literatura requieren una comprensión profunda de la anatomía del corazón y la adherencia a una metodología estricta. Esta técnica puede mejorar la uniformidad del observador y aumentar la comparabilidad y la reproducibilidad de la investigación experimental sobre enfermedades cardiovasculares. Una persona que no está familiarizada con esta técnica puede tener dificultades para identificar todos los componentes del corazón.

Mi recomendación es pasar algún tiempo familiarizándose con la anatomía del corazón. Debido a que la compleja anatomía del corazón es difícil de comprender, se requiere una presentación visual del método. Para comenzar, pese el animal sujeto antes de colocarlo en la mesa de necropsia en su lado izquierdo.

Luego realice un examen externo del sujeto inspeccionando y palpando el cutis y la mucosa, observando todos los cambios en el color, la consistencia y el volumen. Luego, con un cuchillo, haga una incisión aguda de siete centímetros en la axila derecha. Después de localizar la unión coxofemoral, abra la cápsula con un cuchillo y corte el ligamento de la cabeza del fémur.

Extienda la incisión cutánea en el cráneo de la axila hasta la sínfisis mandibular y caudalmente hasta el peroneo. Retire la piel con el bisturí, exponiendo la pared torácica y abdominal desde la línea media ventral hasta el nivel de los procesos transversales vertebrales. A continuación, utilizando el bisturí y los fórceps, cree un colgajo a través de la pared abdominal, ventrocaudal hasta el arco costal derecho.

Luego, siguiendo el aspecto caudal del hipocondrio derecho, abra la cavidad abdominal con tijeras. Continuar extendiendo la incisión caudalmente a lo largo de la zona paralumbar derecha hasta la cresta ilíaca externa. Después, extienda la incisión hasta la inserción púbica de la línea alba y examine brevemente los órganos abdominales in situ para observar cualquier cambio en su color, consistencia, volumen y posición.

A continuación, usando el bisturí y los fórceps, perfore el diafragma en el punto más alto. Luego, usando pinzas para cortar hueso, retire la caja torácica derecha seccionando primero el segmento cartilaginoso paraesternal y luego el segmento dorsal de las costillas proximal a las articulaciones costovertebrales. Examine el corazón in situ para observar su tamaño, color, posición y conexiones con los tejidos adyacentes.

Además, busque cualquier cambio en la consistencia por palpación. Luego, usando tijeras, abra la cavidad pericárdica con una sección longitudinal desde la base hasta el ápice del corazón. Examine la cavidad pericárdica y el epicardio para detectar cualquier cambio en el color, la consistencia y el volumen.

A continuación, usando tijeras, libere el corazón seccionando la vena cava superior al menos un centímetro por encima de la entrada en la aurícula derecha, preservando la crista terminal y cediendo las secciones transversales de la aorta, el tronco pulmonar y ambas venas cavas. Examine el contorno externo del órgano, la apariencia del epicardio, la del miocardio por la transparencia del epicardio y la apariencia externa de los vasos grandes. Para realizar el método de entrada-salida para la disección cardíaca, coloque el corazón con la cara auricular hacia arriba, y usando tijeras y fórceps sin dientes, ampliamente cortado desde la vena cava caudal hasta la aurícula derecha.

Después de cortar el corazón hasta el apéndice auricular derecho para exponer la crista terminal o el nódulo sinoauricular, inspeccione la válvula tricúspide desde la vista dorsal. Luego, cortando una sección desde la aurícula derecha hasta la unión entre el ventrículo derecho y el tabique intraventricular, muestre la válvula auriculoventricular derecha. A continuación, secciona la pared libre del ventrículo derecho a lo largo del tabique intraventricular hasta el origen del tronco pulmonar.

Después de examinar minuciosamente las válvulas auriculoventriculares derechas, incluidas las cuerdas tendinosas y los músculos papilares, cortar las cuerdas tendinosas. Luego, coloque los fórceps a lo largo del tronco pulmonar y corte el tronco longitudinalmente para examinar el tracto de salida pulmonar, el origen del tronco pulmonar y las válvulas semilunares. Para inspeccionar la válvula bicúspide desde la vista dorsal, corte la aurícula izquierda desde las venas pulmonares hasta la punta de la aurícula izquierda.

Luego, coloque el corazón con el tabique interventricular hacia abajo y haga una incisión grande en la pared libre ventricular desde la base del ventrículo hasta el ápice cardíaco. Luego, corte las cuerdas tendinosas de la cúspide de la válvula auriculoventricular izquierda. Finalmente, abra la aorta colocando fórceps a través del tracto de salida del ventrículo izquierdo.

Use solución salina para eliminar todos los coágulos de sangre y pesar el corazón. Para tomar muestras para histología, primero, haga dos cortes paralelos longitudinales, aproximadamente cinco milímetros de separación, con un bisturí que involucre la aurícula derecha, la válvula tricúspide y la pared libre del ventrículo derecho. Luego, haga dos cortes paralelos similares que involucren la aurícula izquierda, la válvula mitral, el músculo papilar dorsal y el ventrículo izquierdo.

Dentro del tercio superior dorsal del corazón, seccionar transversalmente la base del corazón siguiendo una línea, incluyendo el tabique interventricular, la aurícula derecha, la aorta, la válvula aórtica y la válvula tricúspide. Y hacer dos cortes longitudinales paralelos que involucran la base de la aorta y el tabique interventricular. Luego, recorte la aurícula derecha alrededor de la crista terminalis.

Para obtener seis piezas del nódulo sinoauricular, haga varias secciones paralelas separadas entre tres y cuatro milímetros, orientadas transversalmente sobre el eje longitudinal de la crista. A continuación, recorte los tejidos obtenidos en casetes histológicos y sumerja los tejidos en formalina tamponada neutra al 10% durante al menos 48 horas. Para tomar muestras de las arterias coronarias, use fórceps y un bisturí para diseccionar las arterias coronarias del surco paraconal y fijarlas en formalina tamponada neutra al 10% durante la noche.

Si es necesario, descalcifique el tejido en una mezcla uno a uno de ácido fórmico al 8% y ácido clorhídrico. A continuación, haga varios cortes transversales separados por unos tres milímetros. Coloque las secciones en un casete histológico y coloque el casete en formalina tamponada neutra al 10% para su incrustación.

Después de fijar el corazón en formalina tamponada neutra al 10% durante al menos 48 horas, coloque dos pinzas de disección recta sin dientes. Uno a través de la cava craneal, la aurícula derecha, la válvula tricúspide y el ventrículo derecho. Y el otro a través de la vena pulmonar, la aurícula izquierda, la válvula mitral y el ventrículo izquierdo.

Utilizando el espacio entre los fórceps como guía, use una cuchilla cortante para cortar desde la base hasta el ápice del corazón. A unos cinco milímetros de distancia, corta otra sección longitudinal del segmento cardíaco que incluye la aorta. Luego, separe completamente la base cardíaca del ápice.

Después de colocar cada segmento de tejido en un casete histológico, coloque los casetes en formalina tamponada neutra al 10% hasta la incrustación. Este protocolo permitió la visualización exitosa de las características externas y las estructuras internas del corazón. Usando esta técnica, las muestras de tejido cardíaco podrían recolectarse con éxito para estudios histológicos de diferentes animales como perros y gatos.

Siempre tenga cuidado al liberar el corazón porque puede dañar algunas estructuras de interés. Y también, durante la disección, recolección e incrustación del nodo sinoauricular. Aunque este método fue creado para diagnosticar modelos de arritmias, miocardiopatía hipertrófica, infarto de miocardio e intoxicación cardíaca, se puede utilizar para diagnosticar cualquier afección cardíaca.