Name: Un modelo de ratón de daño peritoneal inducido por gluconato de clorhexidina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Aprenda a establecer un modelo de ratón de diálisis peritoneal con daño inducido por gluconato de clorhexidina. Este protocolo simple permite estudiar la fibrosis peritoneal y mejorar la comprensión de la terapia de DP.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos sinceramente a Shin-Han Tseng por la discusión crítica y la ejecución parcial del estudio. Este estudio fue apoyado por EDAHP110003 y NCKUEDA110002 de la Fundación de Investigación del Hospital E-DA y la Universidad Nacional Cheng Kung, Taiwán.

Todos los experimentos con ratones fueron aprobados por el Centro de Animales de Laboratorio del Hospital E-DA / Universidad I-Shou y se manejaron de acuerdo con la "Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio" (NRC, EE. UU. 2011). Para el presente estudio se utilizaron ratones machos C57BL/6, de 7-8 semanas de edad.
1. Preparación química
<ol><li>Prepare el irritante químico diluyendo el gluconato de clorhexidina al 0,1% (CG, consulte la Tabla de materiales) en etanol al 15%.</li>
</ol>2. Tratamiento de los animales
<ol><li>Asigne tres ratones como grupo de control. Realizar inyección intraperitoneal (i.p.) de 1 mL/kg de solución salina normal (NS) al 0,9% cada dos días durante 3 semanas, para un total de nueve veces.</li>
	<li>Asigne tres ratones al grupo de fibrosis peritoneal. Inducir fibrosis peritoneal utilizando gluconato de clorhexidina (GC) mediante la administración de inyecciones i.p. de 0,1% de CG en etanol al 15% (paso 1.1) a una dosis de 12,5 μL/g de peso corporal. Realice esto cada dos días durante 3 semanas, para un total de nueve veces.</li>
</ol>3. Pruebas de función peritoneal (prueba de equilibrio peritoneal modificada)
<ol><li>Prepare una solución de diálisis que contenga 4,25% de glucosa. Extraiga 0,5 ml de muestra de dializado con una jeringa y luego verifique la concentración de glucosa en la muestra de dializado. NOTA: La concentración de glucosa se determina de acuerdo con el método hexoquinasa/G6PD. Se accedió a las muestras de dializado al ensayo Glu 2 de tipo L y se investigaron con un analizador bioquímico (ver Tabla de materiales). Esta es la concentración inicial de glucosa dializada.</li>
	<li>Anestesiar a los ratones mediante inyección intramuscular de Zoletil y xilazina (preparados en una proporción de 1:2 por volumen, ver Tabla de materiales) a una dosis de 20 μL/20 gw. Además, use ungüento veterinario en los ojos para prevenir la sequedad bajo anestesia.</li>
	<li>Realizar la instilación i.p. de la solución de diálisis (2 mL/20 g de peso corporal).</li>
	<li>Después de 30 minutos, evalúe y verifique la profundidad de la anestesia con falta de reflejo de pellizco del dedo del pie. Luego, realice una incisión vertical en la línea media del abdomen (debajo del proceso xifoides), luego abra el abdomen de los ratones y recoja el líquido intraperitoneal con una jeringa (definida como "volumen 1"). Luego, mida el peso de un algodón limpio y seco y coloque el algodón en la cavidad abdominal de los ratones para absorber el líquido intraperitoneal residual. Finalmente, mide el peso del algodón nuevamente. NOTA: El aumento de peso del algodón es igual al peso del líquido intraperitoneal residual. Luego, convertir al volumen obtenido (gravedad específica: 1 g / cm3; definido como "volumen 2"). El volumen final de dializado es el volumen 1 más el volumen 2.</li>
	<li>Use 0.5 ml de muestra de dializado (dializado final) para medir la concentración de glucosa. Esta es la concentración final de glucosa dializada.</li>
	<li>Calcule la ultrafiltración neta utilizando la fórmula15: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
	<li>Calcule la permeabilidad peritoneal utilizando la siguiente fórmula15: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq02.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>4. Preparación tisular del músculo de la pared abdominal y del hígado y análisis histológico
<ol><li>Sacrificar los ratones por punción cardíaca (flebotomía)3,16.</li>
	<li>Corte de la pared abdominal (1 cm x 1 cm) y hepatectomía total. Fije la pared abdominal y los tejidos hepáticos de los ratones durante la noche en formalina tamponada neutra al 10%.</li>
	<li>Preparar secciones de parafina de 3 μm de espesor del músculo de la pared abdominal y el hígado, y realizar análisis histológicos siguiendo el informe17 publicado anteriormente.</li>
	<li>Evaluar el peritoneo parietal de la pared abdominal y el peritoneo visceral de las superficies hepáticas de los ratones mediante morfometría18.</li>
	<li>Realice análisis estadísticos utilizando estadísticas y software de gráficos (consulte la Tabla de materiales). Expresar todos los datos como media ± SD y analizar la significación estadística utilizando una prueba t19. Defina valores con P &lt; 0,05 como resultados significativos.</li>
</ol>

<ol><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+outcome+of+CAPD%3A+twenty-five+years%27+experience+in+a+single+Korean+center%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Supplements%22%5BJournal%5D)">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030(2015).</li>
<li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li>
<li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children%3A+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+%28MEPPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, Suppl 2 445-449 (1999).</li>
<li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li>
<li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 10-15 (2008).</li>
<li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+clinical+significance+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li>
<li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peritoneum%3A+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 5-9 (2008).</li>
<li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li>
<li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li>
<li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li>
<li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li>
<li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Equilibration+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li>
<li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li>
<li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li>
<li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoss%2C+A+%22Basic+and+Advanced+Statistical+Tests%3A+Writing+Results+Sections+and+Creating+Tables+and+Figures%22">Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures</a>. , SensePublishers. 13-16 (2017).</li>
<li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li>
<li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li>
<li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li>
<li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Failure%22%5BJournal%5D)">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li>
<li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li>
<li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

En este estudio, un modelo de DP de ratón se presenta por inyección i.p. de GC, y los resultados mostraron fibrosis peritoneal y deterioro funcional en este modelo, que imitó la condición del paciente con EP.
Hay varios pasos críticos en el protocolo. Primero, para realizar una inyección i.p. de CG o NS, la piel de la pared abdominal del ratón debe recogerse con fórceps para evitar el daño intraperitoneal inducido por punción. En segundo lugar, al recoger el peritoneo de la pared abdominal par...

La diálisis peritoneal (DP) es un tipo de terapia de reemplazo renal. Sin embargo, la EP tiene problemas que no se pueden resolver. Por ejemplo, el tratamiento a largo plazo de la EP puede causar daño peritoneal, lo que eventualmente conduce al fracaso de la ultrafiltración y al retiro del tratamiento 1,2,3,4,5,6. La fibrosis peritoneal es una de las complicaciones más graves 7,8. La fibrosis peritoneal se caracteriza por la deposición y acumulación de matriz extracelular dentro del intersticio, y neoangiogénesis y vasculopatía del peritoneo 9,10.
Las principales causas de estos cambios peritoneales son la peritonitis recurrente y la no biocompatibilidad del dializado, que son hiperosmóticas, alta glucosa, bajo pH y degradación de la glucosa11,12. Por lo tanto, los modelos experimentales animales adecuados pueden ayudar a los investigadores a estudiar mejor los cambios fisiológicos y patológicos del peritoneo durante la terapia de EP. Por lo tanto, el establecimiento de un modelo de EP animal es importante para mejorar la tecnología de EP y la eficacia de la diálisis y prolongar la supervivencia del paciente. Este estudio tuvo como objetivo generar un modelo de ratón con EP mediante inyección intraperitoneal (i.p.) de gluconato de clorhexidina (GC), como se describió anteriormente13,14. Este modelo de ratón PD es simple, fácil de usar y factible en comparación con otros modelos animales de PD.

<table><tbody><tr><td>0.9% Solución salina normal</td><td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwán-10</td><td></td><td></td></tr><tr><td>% formalina tamponada neutra</td><td>Taiwán Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwán</td><td>00002A</td><td></td></tr><tr><td>Analizador bioquímico automático</td><td>Hitachi Ltd., Tokio, Japón</td><td>Labospect Series 008</td><td>para determinar la concentración de glucosa</td></tr><tr><td>Solución de digluconato de clorhexidina, 20% en H2O</td><td>Sigma-Aldrich, MO, EE. UU.</td><td>C9394</td><td>diluido al 0,1 % con etanol al 15 % para inyección</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, EE. UU.</td><td>BAKR8006-05</td><td>diluido al 15 % con solución salina normal para la concentración de trabajo</td></tr><tr><td>Glucosa (Dianeal)</td><td>Baxter International, Inc., IL, EE. UU</td><td>. FNB9896</td><td>Solución de diálisis comercial (4,25%)</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0</td><td>Software GraphPad, Inc., CA, EE. UU.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ensayo Glu 2 tipo L</td><td>FUJIFILM WAKO, Japón</td><td>461-32403</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina 20</td><td>de julio Pharmaceutical Co., Ltd., Ciudad de New Taipei, Taiwán-Zoletil</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>50</td><td>Laboratorios Virbac, Carros, Francia</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo de ratón de daño peritoneal inducido por gluconato de clorhexidina

A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

La fibrosis peritoneal es una complicación importante de la diálisis peritoneal (DP). Para investigar y abordar este problema, se requiere un modelo animal apropiado de EP. El presente protocolo establece un modelo de fibrosis peritoneal inducida por gluconato de clorhexidina (CG) que imita la condición de un paciente con EP. La fibrosis peritoneal se indujo mediante inyección intraperitoneal de 0,1% de CG en etanol al 15% durante 3 semanas (administrada cada dos días), para un total de nueve veces en ratones machos C57BL/6. Las pruebas funcionales peritoneales se realizaron el día 22. Después de sacrificar los ratones, se recolectaron el peritoneo parietal de la pared abdominal y el peritoneo visceral del hígado. Eran más gruesos y fibróticos cuando se analizaron microscópicamente después de la tinción tricrómica de Masson. La tasa de ultrafiltración disminuyó, y el transporte de masa de glucosa indicó un aumento inducido por CG en la permeabilidad peritoneal. El modelo de DP así establecido puede tener aplicaciones para mejorar la tecnología de DP, la eficacia de la diálisis y prolongar la supervivencia del paciente.

En la Figura 1A,B, el peritoneo parietal de la pared abdominal era marcadamente más grueso y fibrótico bajo la tinción tricrómica de Masson17, indicando que en el grupo expuesto a CG, la fibrosis peritoneal es más grave que en el grupo control salino (SN). En la Figura 2A,B, el peritoneo visceral de las superficies hepáticas también era marcadamente más grueso y fibrótico, lo que demuestra que en el grupo expuesto a CG, l...

El presente protocolo establece un modelo de ratón de diálisis peritoneal (DP) de fibrosis peritoneal inducida por gluconato de clorhexidina (CG). El modelo actual es simple y fácil de usar en comparación con otros modelos animales de EP.

Un modelo de ratón de daño peritoneal inducido por gluconato de clorhexidina

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

El establecimiento de un modelo animal para la diálisis peritoneal, DP, es muy importante. Esperamos que pueda mejorar la tecnología y la eficacia de la terapia de EP y, finalmente, mejorar la supervivencia del paciente. Este modelo de ratón de diálisis peritoneal es simple, fácil de usar y visible en comparación con otros modelos animales de diálisis peritoneal.Un modelo animal de diálisis peritoneal adecuado puede ayudar a los investigadores a estudiar el cambio peritoneal, fisiológico y patológico durante la terapia de EP. La demostración del procedimiento será Fang-Ling Liao, un asistente de investigación de mi laboratorio. Para comenzar, prepare el irritante químico diluyendo el gluconato de clorhexidina al 0,1% en etanol al 15%.A continuación, asigne tres ratones como grupo de control e inyecte un mililitro por kilogramo de solución salina normal al 0,9% por vía intraperitoneal cada dos días durante tres semanas para un total de nueve veces. Luego asigne tres ratones al grupo de fibrosis peritoneal e induzca fibrosis peritoneal administrando una inyección intraperitoneal de solución de gluconato de clorhexidina al 0,1% preparada anteriormente a una dosis de 12,5 microlitros por kilogramo del peso corporal. Para las pruebas de función peritoneal, prepare una solución de diálisis que contenga 4,25% de glucosa.Luego use una jeringa para extraer 0.5 mililitros de muestra de dializado. Preparar una inyección de zoletil y xilazina y anestesiar a los ratones mediante la administración de una inyección intramuscular. Realice la instalación intraperitoneal de la solución de diálisis a una dosis de dos mililitros por cada 20 gramos de peso corporal.Haga una pequeña incisión en la línea media del abdomen y recoja el líquido intraperitoneal principal con una jeringa. Después de 30 minutos, realice una incisión vertical en la línea media del abdomen debajo del proceso xifoide y abra el abdomen del ratón para recoger el líquido intraperitoneal residual con una jeringa. A continuación, mida el peso de un hisopo de algodón limpio y seco.Coloque el algodón en la cavidad abdominal del ratón para absorber el líquido intraperitoneal residual y luego retírelo. Mide el peso del algodón de nuevo. La tinción tricrómica de Masson mostró que el peritoneo parietal de la pared abdominal en el grupo expuesto al gluconato de clorhexidina era marcadamente más grueso y fibrótico que el grupo control.El peritoneo visceral de las superficies hepáticas también fue significativamente más grueso y fibrótico en el grupo expuesto al gluconato de clorhexidina que en el grupo de control con solución salina, lo que indica que la fibrosis peritoneal es más grave en el grupo expuesto al gluconato de clorhexidina. El grupo expuesto al gluconato de clorhexidina mostró una disminución de la tasa de ultrafiltración y un aumento del transporte de masa de glucosa, lo que indica que la permeabilidad peritoneal aumenta en los ratones expuestos al gluconato de clorhexidina. Mientras realiza un procedimiento de inyección intraperitoneal, use los fórceps y elija la piel abdominal del ratón para prevenir el daño del órgano intraperitoneal inducido por punción.

a-mice-model-of-chlorhexidine-gluconate-induced-peritoneal-damage

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Fuente: de Vries, C. R., et.al. Un modelo de inoculación retardada de la infección crónica de la herida por Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra la inoculación tardía de Pseudomonas aeruginosa luminiscente en un ratón con dos heridas dorsales cutáneas de grosor completo cubiertas por un apósito transparente. Esto facilita la formación de biofilm y el establecimiento de infecciones crónicas. El monitoreo regular de bioluminiscencia permite cuantificar la carga...

Desarrollo de un modelo murino de infección cutánea crónica por Pseudomonas aeruginosa 

Aquí describimos un nuevo modelo murino diabético utilizando ratones sin pelo en tiempo real, no invasivo, vigilancia de infecciones de la herida del biofilm de bioluminiscente Pseudomonas aeruginosa. Este método puede adaptarse para evaluar infección de otras especies de bacterias y microorganismos modificados genéticamente, como los biofilms multiespecies y comprobar la eficacia de estrategias antibiofilm.

Llegado al lado de la luz: Vivo en monitoreo de Pseudomonas aeruginosa Biofilm infecciones en las heridas crónicas en un diabético sin pelo modelo murino

Este artículo muestra el método para la colocación quirúrgica en ratones de un catéter intraperitoneal conectados a un puerto de acceso que se encuentra en la parte posterior del animal. Por otra parte, explica el procedimiento para una nefrectomía 5/6 para asemejarse al estado urémico de pacientes con EP.

Técnicas quirúrgicas para la colocación del catéter y nefrectomía 5/6 en modelos murinos de Diálisis Peritoneal

Las heridas crónicas se desarrollan a partir de heridas agudas en un modelo de ratón diabético induciendo altos niveles de estrés oxidativo después de una herida cutánea de espesor completo. La herida se trata con inhibidores de la catalasa y glutatión peroxidasa, lo que resulta en un deterioro de la cicatrización y el desarrollo de biopelículas por bacterias presentes en el microbioma de la piel.

Protocolo para crear heridas crónicas en ratones diabéticos

Aquí, presentamos un protocolo para inducir localmente la periodontitis apical en ratones. Mostramos cómo perforar un agujero en el diente del ratón y exponer su pulpa, con el fin de causar inflamación local. También se demuestran métodos de análisis para investigar la naturaleza de esta inflamación, como la microtomografía y la histología.

Inducir la Periodontitis Apical en Ratones

El presente protocolo describe un método quirúrgico estandarizado para el modelo AAA inducido por elastasa a través de la aplicación directa de elastasa a la adventicia de la aorta abdominal infrarrenal en ratones.

Modelo de aneurisma aórtico abdominal de ratón inducido por la aplicación perivascular de elastasa

Este artículo describe las modificaciones de un procedimiento para implantar un catéter de diálisis peritoneal en un modelo murino para evitar problemas técnicos importantes observados con las técnicas convencionales.

Un enfoque de implantación retrógrada para la colocación de catéter de diálisis peritoneal en ratones

Este estudio presenta dos técnicas experimentales cruciales: la construcción de un modelo de herida murina para evaluar el cierre de la herida y la preparación de suspensiones unicelulares de piel murina para preservar la viabilidad celular.

Modelos de heridas en ratones y preparación de suspensiones de células únicas

Este manuscrito presenta un protocolo para establecer un modelo de aneurisma de aorta abdominal en ratón utilizando cloruro de calcio y elastasa, combinando las ventajas de los métodos de modelado anteriores. Este modelo se puede utilizar para investigar los mecanismos fisiopatológicos subyacentes a los aneurismas de aorta abdominal.

Un modelo de aneurisma de aorta abdominal de ratón por infiltración periadventicial de cloruro de calcio y elastasa

La administración intraperitoneal de fármacos es un enfoque no invasivo seguro y eficaz para inducir la lesión pancreática. Este estudio comparó cinco protocolos distintos de inyección intraperitoneal en ratones para inducir diversos grados de lesión pancreática y estableció un modelo de lesión pancreática grave para investigar los cambios patológicos y las estrategias de tratamiento para la pancreatitis aguda grave (PAS).

Preparación de un modelo de pancreatitis aguda grave en ratones mediante una combinación de caeruleina e inyección intraperitoneal de lipopolisacáridos

Aprenda a establecer un modelo de ratón de diálisis peritoneal con daño inducido por gluconato de clorhexidina. Este protocolo simple permite estudiar la fibrosis peritoneal y mejorar la comprensión de la terapia de DP.

Un modelo de ratón de daño peritoneal inducido por gluconato de clorhexidina

Explorar más videos