Desestabilización del menisco medial y el cartílago rasguño modelo murino de osteoartritis acelerada

Este método modela muchos aspectos de la osteoartritis postraumática humana, lo que nos permite una forma de investigar la enfermedad y el impacto de posibles terapias en un período de tiempo más corto. La principal ventaja de esta técnica es que a corto plazo, solo dos semanas después de la intervención, los ratones mostraron una formación de osteofitos consistente y medible, así como cambios en la carga en la pierna afectada que indican dolor. Recomendamos utilizar este modelo del estudio de la formación de osteofitos y la osificación endocondral, así como el dolor impulsado por lesiones.

La identificación y el corte del ligamento meniscotibial medial pueden ser un desafío, por lo que recomendamos practicar esto en cadáveres hasta que estén seguros. Ayudando a demostrar el procedimiento estará Lynette Dunning, asistente de investigación en el Centro de Ciencias Musculoesqueléticas. Para comenzar, designe una habitación estéril para llevar a cabo la cirugía, asegurándose de que todas las superficies sean estériles.

Coloque y coloque los instrumentos estériles sobre cortinas estériles. Luego, pesa el ratón. Recorte el pelaje del ratón anestesiado sobre la rodilla, los lados frontal y lateral desde la mitad de la espinilla hasta la mitad del muslo, con pequeños cortapelos.

Desinfecte la piel aplicando un limpiador antibacteriano para la piel sobre la piel afeitada y expuesta. Para la analgesia, administrar 0,05 miligramos por kilogramo de buprenorfina por vía subcutánea. Coloque el ratón en el lado dorsal, dejando la rodilla en la que se operará hacia arriba, y coloque la nariz del ratón en la boquilla conectada al aparejo anestésico.

Cubra el ratón con una cortina estéril con una pequeña abertura del ojo de la cerradura. Coloque la pierna sobre la que se va a operar con la rodilla fijada en un ángulo inferior a 90 grados, con el ligamento rotuliano hacia arriba y el pie inmovilizado con cinta quirúrgica. Ajuste el microscopio para enfocar el ligamento rotuliano.

Pellizque la piel de la rodilla en el lado lateral con fórceps dentados. Haga un pequeño corte paralelo al tendón rotuliano distal usando tijeras quirúrgicas. Introduce las tijeras y expande el corte a unos 10 milímetros.

Mueva la piel hacia el lado medial, exponiendo el ligamento rotuliano y la meseta tibial proximal. Usando una cuchilla número 11, haga una incisión de arriba a abajo a lo largo del lado medial del ligamento rotuliano. Al llegar a la parte inferior del ligamento rotuliano, gire la cuchilla 90 grados y extienda la incisión lejos del ligamento rotuliano hacia el lado medial, para obtener acceso a la cápsula articular.

Pellizque el ligamento rotuliano con pinzas de punta roma y gire la muñeca para mover el ligamento rotuliano hacia el lado lateral, lo suficiente como para exponer el IFP. Mientras aún sostiene ligeramente el ligamento rotuliano, pellizque el IFP con micro pinzas para elevarlo y moverlo ligeramente hacia arriba. Si hay una hemorragia, aplique presión con un bastoncillo de algodón.

Identificar la MMTL del menisco medial, que ancla el asta craneal del menisco medial a la meseta tibial anterior. Corte cuidadosamente el MMTL con pequeñas tijeras de resorte de hoja de dos milímetros, dejando intactos el menisco medial y otros ligamentos. Con un cuchillo microquirúrgico de tres milímetros, marque tres hendiduras espaciadas uniformemente en el cartílago articular tibial en una dirección desde la parte posterior a la parte anterior.

Cierre la piel con dos o tres pequeños clips metálicos de cierre de heridas de siete milímetros. Retire los clips metálicos entre cinco y siete días después de la cirugía. Luego, evalúe el dolor o la marcha en cualquier momento durante el estudio.

Cuantificar el tejido calcificado mediante el análisis de las micro-tomografías computarizadas de las articulaciones de la rodilla. Para analizar la esclerosis ósea subcondral, seleccione un VOI en el centro de la carga de la meseta tibial medial. Luego, determine la densidad ósea subcondral y la microarquitectura seleccionando una región de interés que delinee la estructura trabecular con la epífisis tibial, la placa subcondral o el hueso subcondral total en la vista coronal bidimensional de la pila, utilizando un software analizador de TC.

Identifique osteofitos en las pilas de imágenes tridimensionales reconstruidas utilizando el software CTVol. Evalúe el daño del cartílago y la sinovitis de acuerdo con la puntuación de daño del cartílago OARSI 19 y la puntuación de sinovitis 20, en secciones de cinco micrómetros incrustadas en parafina. No hubo cambios significativos en la carga de la pata trasera en el modelo DMM dentro de las ocho semanas posteriores a la inducción, mientras que los ratones DCS favorecieron la pierna contralateral o de control, significativamente, dos semanas después de la intervención.

La relación entre la pierna contralateral y la ipsilateral indicó que ambos modelos tenían una mayor densidad ósea en el área de carga ósea subcondral del miembro afectado, cuatro semanas después de la inducción. La aparición de osteofitos fue más prominente en los ratones DCS, con un aumento significativo en el número y volumen en comparación con el modelo DMM dos semanas después de la intervención. La EDC presenta daño elevado del cartílago en los compartimentos tibial y femoral medial, y sinovitis cuatro semanas después de la inducción.

El daño debe limitarse a las estructuras que intencionalmente queremos afectar, por lo que se necesita un cuidado especial para mantener todas las demás estructuras intactas y minimizar la exposición del cartílago. La modificación para incluir rasguños intencionales de cartílago nos permite investigar la osteoartritis con un enfoque en la osteofitogénesis, la osteoartritis temprana o el dolor de lesiones, y el efecto del daño del cartílago en toda la articulación.