Name: Investigación de la cooperación microbiana a través del análisis de espectrometría de masas de imágenes de colonias bacterianas cultivadas en agar y en tejidos durante la infección (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Aprende a visualizar el metabolismo espacial de interacciones microbianas durante infecciones usando espectrometría de masas de imágenes MALDI-IMS en cultivos bacterianos sobre agar y tejidos.

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Este trabajo fue apoyado por los Institutos Nacionales de Salud (NIH) Instituto Nacional de Ciencias Médicas Generales (NIGMS) bajo el premio GM138660. J.T.S. fue apoyado por la beca de verano de la familia Charles y Monica Burkett de la Universidad de Florida. J.P.Z. fue apoyado por las subvenciones de los NIH K22AI7220 (NIAID) y R35GM138369 (NIGMS). A.B.S. fue apoyado por la Beca de Capacitación en Biología Celular y Molecular de la Universidad de Pensilvania (T32GM07229).

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<li>Zackular, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+zinc+alters+the+microbiota+and+decreases+resistance+to+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dietary zinc alters the microbiota and decreases resistance to Clostridium difficile infection.</a> Nature Medicine. 22 (11), 1330-1334 (2016).</li>
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<li>Hoffmann, T., Dorrestein, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homogeneous+matrix+deposition+on+dried+agar+for+MALDI+imaging+mass+spectrometry+of+microbial+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Homogeneous matrix deposition on dried agar for MALDI imaging mass spectrometry of microbial cultures.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1959-1962 (2015).</li>
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<li>Huizing, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+matrix+application+techniques+for+high+throughput+mass+spectrometry+imaging+of+tissues+in+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of matrix application techniques for high throughput mass spectrometry imaging of tissues in the clinic.</a> Clinical Mass Spectrometry. 12, 7-15 (2019).</li>
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<li>Gilmore, M. S., Clewell, D. B., Ike, Y., Shankar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enterococci%3A+From+commensals+to+leading+causes+of+drug+resistant+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Massachusetts+Eye+and+Ear+Infirmary%22%5BJournal%5D)">Enterococci: From commensals to leading causes of drug resistant infection.</a> Massachusetts Eye and Ear Infirmary. , Boston. (2014).</li>
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Los autores declaran que no hay intereses financieros contrapuestos.

Durante la espectrometría de masas de imágenes MALDI, es importante tener una superficie de muestra plana para proporcionar un diámetro focal consistente del láser MALDI incidente en el sustrato de la muestra. Las desviaciones en la altura de la muestra pueden hacer que el rayo láser MALDI se desenfoque, causando alteraciones en el diámetro y la intensidad del haz, lo que puede afectar la eficiencia de ionización MALDI. Estas alteraciones en la eficiencia de ionización pueden dar lugar a diferencias en la intensidad del ...

El microbioma humano es un ecosistema altamente dinámico que involucra interacciones moleculares de bacterias, virus, arqueas y otros eucariotas microbianos. Si bien las relaciones microbianas han sido intensamente estudiadas en los últimos años, queda mucho por entender sobre los procesos microbianos a nivel químico 1,2. Esto se debe en parte a la falta de disponibilidad de herramientas capaces de medir con precisión entornos microbianos complejos. Los avances en el campo de la espectrometría de masas (IMS) de imágenes en la última década han permitido el mapeo espacial in situ y libre de etiquetas de muchos metabolitos, lípidos y proteínas en sustratos biológicos 3,4. La desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI) se ha convertido en la técnica de ionización más común utilizada en la espectrometría de masas de imágenes, que implica el uso de un láser UV para extirpar material de la superficie de una sección de tejido delgado para su medición por espectrometría de masas4. Este proceso se ve facilitado por la aplicación de una matriz química aplicada homogéneamente a la superficie de la muestra, lo que permite realizar mediciones secuenciales en un patrón ráster a través de la superficie de la muestra. Los mapas de calor de las intensidades de iones de analito se generan después de la adquisición de datos. Los avances recientes en las fuentes de ionización y las técnicas de muestreo han permitido el análisis de sustratos no tradicionales como las bacterias5 y los especímenes celulares 6,7,8 de mamíferos cultivados en agar nutriente. La información espacial molecular proporcionada por IMS puede proporcionar una visión única de la comunicación bioquímica de las interacciones microbio-microbio y huésped-microbio durante la infección 9,10,11,12,13,14.
Tras la infección por Clostridioides difficile (CDI), C. difficile está expuesta a un ambiente microbiano que cambia rápidamente en el tracto gastrointestinal, donde es probable que las interacciones polimicrobianas afecten los resultados de la infección15,16. Sorprendentemente, se sabe poco sobre los mecanismos moleculares de las interacciones entre C. difficile y la microbiota residente durante la infección. Por ejemplo, los enterococos son una clase de patógenos comensales oportunistas en el microbioma intestinal y se han asociado con una mayor susceptibilidad y gravedad de la ICD17,18,19,20. Sin embargo, se sabe poco sobre los mecanismos moleculares de las interacciones entre estos patógenos. Para visualizar la comunicación de moléculas pequeñas entre estos miembros del microbioma intestinal, se cultivaron macrocolonias bacterianas en agar para simular las interacciones microbio-microbio y la formación de biopelículas bacterianas en un ambiente controlado. Sin embargo, la obtención de distribuciones metabólicas representativas en el análisis de espectrometría de masas de imágenes MALDI de muestras de cultivo bacteriano es un desafío debido al alto contenido de agua y la topografía superficial desigual de estas muestras. Esto se debe en gran parte a la naturaleza altamente hidrófila del agar y la respuesta superficial no uniforme del agar durante la eliminación de humedad.
El alto contenido de agua del agar también puede dificultar la obtención de un recubrimiento homogéneo de la matriz MALDI y puede interferir con el análisis MALDI posterior realizado en el vacío21. Por ejemplo, muchas fuentes MALDI operan a presiones de 0.1-10 Torr, que es un vacío suficiente para eliminar la humedad del agar y puede causar la deformación de la muestra. Estos cambios morfológicos en el agar inducidos por el ambiente de vacío causan burbujeo y agrietamiento en el material de agar seco. Estos artefactos reducen la adherencia del agar al portaobjetos y pueden causar el desmontaje o la descamación de la muestra en el sistema de vacío del instrumento. El grosor de las muestras de agar puede estar a una distancia de hasta 5 mm del portaobjetos, lo que puede crear un espacio libre insuficiente de la óptica de iones dentro del instrumento, causando contaminación y / o daños a la óptica de iones del instrumento. Estos efectos acumulativos pueden resultar en reducciones de la señal iónica que refleja la topografía de la superficie, en lugar de las interacciones bioquímicas microbianas subyacentes. Las muestras de agar deben secarse homogéneamente y adherirse fuertemente a un portaobjetos de microscopio antes del análisis en vacío.
Este documento demuestra un flujo de trabajo de preparación de muestras para el secado controlado de macrocolonias de cultivo bacteriano cultivadas en medios de agar. Este proceso de secado más lento y de varios pasos (en relación con los informados anteriormente) garantiza que el agar se deshidrate uniformemente al tiempo que minimiza los efectos del burbujeo o agrietamiento de las muestras de agar montadas en portaobjetos de microscopio. Mediante el uso de este método de secado gradual, las muestras se adhieren fuertemente al portaobjetos del microscopio y son susceptibles de aplicación posterior en matriz y análisis MALDI. Esto se ejemplifica utilizando colonias bacterianas modelo de C. difficile cultivadas en agar y modelos de tejido murino que albergan CDI con y sin la presencia del patógeno comensal y oportunista, Enterococcus faecalis. Los análisis de espectrometría de masas de imágenes MALDI de modelos bacterianos y tisulares permiten el mapeo espacial de perfiles de metabolitos de aminoácidos, proporcionando una nueva visión del metabolismo microbiano bioenergético y la comunicación.

<table><tbody><tr><td>0.2 &mu; m Titan3 filtros de jeringa de nylon</td><td>Thermo Scientific</td><td>42225-NN</td><td></td></tr><tr><td>1,5-diaminonaphthalene MALDI matrix</td><td>Sigma Aldrich</td><td>2243-62-1</td><td></td></tr><tr><td>20 mL Jeringas Henke Ject luer lock</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>4200.000V0&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>vacuómetro de convección de la serie 275i</td> espectrómetro de masas solariX FTICR de <td>la empresa Kurt J. Lesker</td><td>KJL275807LL</td><td></td></tr><tr><td>7T equipado con un sistema láser Smartbeam II Nd:YAG MALDI (2 kHz, 355 nm)&nbsp;</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de ácido acético, adecuada para HPLC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>64-19-7</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrilo, adecuada para HPLC, grado de gradiente, &ge; 99.9%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>75-05-8</td><td></td></tr><tr><td>Solución de hidróxido de amonio, 28% NH3 en H2O, &ge; 99.99% base de metales traza</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1336-21-6</td><td></td></tr><tr><td>Bolsas de riesgo biológico esterilizables en autoclave: 55 gal</td><td>Grainger</td><td>45TV10</td><td></td></tr><tr><td>Bolsas de transporte de especímenes de riesgo biológico (8 x 8 pulg.)</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-800-07</td><td></td></tr><tr><td>Caldo de infusión cerebro-corazón</td><td>BD Biosciences</td><td>90003-040</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 ratones machos&nbsp;</td><td>Escáner</td> fotográfico y de documentos CanoScan 9000F Mark II de Jackson Laboratories <td></td><td></td></tr><tr><td>Criomicrótomo de investigación Canon</td><td></td> CM 3050S Armario desecador Leica Biosystems <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z268135</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> Trazador de punta de diamante, Ciencias de la Microscopía Electrónica&nbsp;<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>50-254-51</td><td></td></tr><tr><td>Drierite pellets desecantes</td><td>Drierite</td><td>21005</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, 200 Proof</td><td>Decon Labs</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>flexImaging software</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ftmsSoftware de control</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trampa de vacío de vidrio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z549460</td><td></td></tr><tr><td>Pulverizador robótico HTX M5 TM</td><td>Portaobjetos</td><td></td><td></td></tr><tr><td>de microscopio recubiertos de óxido de indio y estaño (ITO)</td><td>de HTX Technologies Delta Technologies</td><td>CG-81IN-S115</td><td></td></tr><tr><td>Filtro HEPA en línea para bomba de vacío</td><td>LABCONCO</td><td>7386500</td><td></td></tr><tr><td>Metanol, grado HPLC</td><td>Fisher Chemical</td><td>&nbsp; 67-56-1</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador de corredera MTP II</td><td>Bruker Daltonics</td><td>235380</td><td></td></tr><tr><td>Temperatura óptima de corte (OCT) compuesto</td><td>Fischer Scientific</td><td>23-730-571</td><td></td></tr><tr><td>Peridox RTU Esporicida, desinfectante y limpiador</td><td>CONTEC CR85335</td><td>&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos impresos de PTFE (teflón), Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>VWR</td><td>100488-874</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de vacío de paletas rotativas RV8</td><td>Edwards</td><td>A65401903</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Accu-Edge Cuchillas de micrótomo desechables de alto perfil</td><td>Electrónica Microscopy Sciences</td><td>63068-HP</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de vacío transparente</td><td>Cole Palmer</td><td>EW-06414-30</td><td></td></tr><tr><td>Ultragrade 19 aceite</td><td>para bomba de vacío Edwards</td><td>H11025011</td><td></td></tr><tr><td>Transformador de tensión variable</td><td>Powerstat</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water, apto para HPLC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7732-18-5</td><td></td></tr><tr><td>Matraz dewar de boca ancha</td><td>Sigma Aldrich Z120790</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

investigación de la cooperación microbiana a través del análisis de espectrometría de masas de imágenes de colonias bacterianas cultivadas en agar y en tejidos durante la infección

Investigation of Microbial Cooperation via Imaging Mass Spectrometry Analysis of Bacterial Colonies Grown on Agar and in Tissue During Infection

Comprender las consecuencias metabólicas de las interacciones microbianas que ocurren durante la infección presenta un desafío único para el campo de las imágenes biomédicas. La espectrometría de masas de imágenes de desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI) representa una modalidad de imagen in situ sin etiquetas capaz de generar mapas espaciales para una amplia variedad de metabolitos. Si bien las muestras de tejido con secciones finas ahora se analizan rutinariamente a través de esta tecnología, los análisis de espectrometría de masas de imágenes de sustratos no tradicionales, como las colonias bacterianas comúnmente cultivadas en agar en la investigación microbiológica, siguen siendo un desafío debido al alto contenido de agua y la topografía desigual de estas muestras. Este documento demuestra un flujo de trabajo de preparación de muestras para permitir el análisis de espectrometría de masas de imágenes de estos tipos de muestras. Este proceso se ejemplifica utilizando macrocolonias de cocultivo bacteriano de dos patógenos gastrointestinales: Clostridioides difficile y Enterococcus faecalis. También se ha demostrado que el estudio de las interacciones microbianas en este entorno de agar bien definido complementa los estudios de tejidos destinados a comprender la cooperación metabólica microbiana entre estos dos organismos patógenos en modelos de infección de ratón. Los análisis de espectrometría de masas de imágenes de los metabolitos de aminoácidos arginina y ornitina se presentan como datos representativos. Este método es ampliamente aplicable a otros analitos, patógenos o enfermedades microbianas y tipos de tejidos donde se desea una medida espacial de la bioquímica celular o tisular.

Hemos realizado espectrometría de masas de imágenes MALDI de metabolitos de colonias bacterianas modelo y ratones cocolonizados con E. faecalis y C. difficile para estudiar el papel de los aminoácidos en las interacciones microbio-microbio. Las macrocolonias bacterianas cultivadas en agar sirven como un modelo bien definido para analizar distintos cambios bioquímicos en la formación de biopelículas bacterianas. Es importante asegurar un proceso de secado controlado para las macrocolonias de cultivo bact...

Se demuestra un nuevo método de preparación de muestras para el análisis de macrocolonias bacterianas basadas en agar mediante espectrometría de masas de imágenes de ionización / desorción láser asistida por matriz.

Investigación de la cooperación microbiana a través del análisis de espectrometría de masas de imágenes de colonias bacterianas cultivadas en agar y en tejidos durante la infección

Understanding the metabolic consequences of microbial interactions that occur during infection presents a unique challenge to the field of biomedical ...

Nuestro protocolo permite la visualización del metabolismo espacial de las interacciones microbianas que ocurren durante la infección. Hemos desarrollado este flujo de trabajo de espectrometría de masas de imágenes para cocultivos bacterianos cultivados en modelos de agar y tejidos. El análisis de sustratos no tradicionales, como los cultivos bacterianos cultivados en agar, presenta muchos desafíos.Usando nuestro protocolo, las muestras bacterianas se pueden secar adecuadamente para facilitar la aplicación de la matriz MALDI en el posterior análisis de espectrometría de masas de imágenes. Este método es ampliamente aplicable a una variedad de metabolitos, patógenos microbianos o enfermedades, y tipos de muestras donde se desea una medida espacial de la bioquímica celular o tisular, particularmente cuando se estudian tipos de muestras que requieren deshidratación antes del análisis. Después de preparar las macrocolonias de cultivo bacteriano, retire las colonias bacterianas de agarosa montadas en portaobjetos de microscopio recubiertos con ITO del material de embalaje.Coloque las muestras en una caja seca con desecante durante 48 a 72 horas a temperatura ambiente. Inspeccione visualmente las colonias en busca de deformaciones en la superficie del agar. A continuación, cierre la línea de vacío a la cámara de muestras y encienda el interruptor de encendido de la bomba de paletas rotativas para permitir que la bomba de vacío se caliente y logre la presión de vacío adecuada.Encienda el transformador de voltaje variable para calentar el filamento de alambre envuelto alrededor de la cámara. Ajuste la fuente de alimentación variable hasta que la temperatura interna de la cámara de vacío alcance aproximadamente 50 grados centígrados. Mientras la bomba se calienta, coloque una suspensión de hielo seco y 100% de etanol en el condensador de trampa fría.Abra la cámara de vacío con una llave inglesa para aflojar las abrazaderas de brida de tela doble de 16 milímetros. Inserte las muestras de agarosa en la cámara y selle la cámara herméticamente con las abrazaderas de brida de tela doble de 16 milímetros. Luego abra la válvula de la bomba para evacuar la cámara y deje que las muestras se sequen durante 60 a 120 minutos.Cuando haya terminado, ventile lentamente la cámara de vacío a la presión ambiente cerrando la válvula de la bomba de paletas rotativas y abriendo la brida de vacío al aire ambiente. Abra la cámara como se demostró anteriormente y retire la muestra de agarosa seca de la cámara. Utilice la matriz MALDI de 1,5-Diaminonaftaleno para su desorción e ionización favorable de aminoácidos y modo de iones negativos.Fije la muestra a la bandeja del pulverizador y cargue las soluciones preparadas en la línea del pulverizador. Usando el software de computadora, especifique los parámetros necesarios para un recubrimiento uniforme del compuesto de matriz. Controle la secuencia de pulverización hasta que finalice.Retire la muestra de la bandeja del pulverizador y guárdela en un gabinete de desecación hasta el análisis. Inserte la muestra recubierta de matriz en el adaptador de portaobjetos del microscopio de placa diana MALDI. Inscriba al menos tres marcadores fiduciarios que abarquen el área de muestra utilizando marcadores permanentes.Utilice un escáner plano para adquirir una imagen óptica del portaobjetos del microscopio, incluidos los marcadores fiduciarios. Ahora defina un método de instrumento de espectrometría de masas como se describe en el manuscrito. En el modo de iones negativos, seleccione la ventana de masa de 100 dalton de masa por carga 100 a 200 para el enriquecimiento de la señal en fase gaseosa utilizando un enfoque de acumulación continua de iones seleccionados que abarca los valores de masa por carga de los metabolitos de interés.Abra el software de adquisición de imágenes del instrumento y utilice el asistente de configuración para definir el nombre y la ubicación del archivo, el modo de adquisición de MS, las regiones de interés que se muestrearán y la resolución espacial de la imagen. Enseñe la muestra utilizando los marcadores fiduciarios de la imagen óptica para sincronizarla con el portador de la muestra del instrumento. A continuación, defina las regiones de interés en la imagen óptica utilizando la herramienta de selección de regiones de interés del software.Una vez que se hayan definido todos los parámetros, inicie la secuencia de adquisición para adquirir en serie un espectro de masas en cada píxel a través de la región de interés definida. Después de la adquisición de imágenes, guarde los datos con una extensión de archivo MIS, que es un formato de archivo específico del proveedor para plataformas de espectrometría de masas de imágenes. Abra el archivo de datos en paquetes de software flexImaging o SCiLS, o expórtelo a un formato de datos no propietario, como mzML, y visualícelo con un software independiente del proveedor.Usando el software de referencia, defina ventanas de masa para picos de interés para generar mapas de calor en color falsos de distribuciones de iones en las regiones muestreadas. En la pantalla del espectro de masas promedio, amplíe el pico de interés y seleccione una ventana de masa adecuada que abarque el área del perfil del pico. Ahora, haga clic derecho en la ventana de masa resaltada y seleccione Agregar filtro de masa.Etiquete la masa seleccionada por el valor de carga utilizando la identificación tentativa del metabolito sospechoso según lo determinado por la medición de masa precisa de alta resolución. Seleccione el umbral de intensidad para ajustar el rango dinámico de la imagen del analito mostrada por el mapa de calor de color falso. Ajuste aún más los parámetros de filtrado de masa para que la ventana de masa abarque el área del perfil de pico y, a continuación, agregue el filtro de masa.Limpie todo el equipo de criosección enjuagándolo con etanol al 100% y deje secar antes de colocar muestras en la cámara de criostato. Prepare portaobjetos de microscopio recubiertos con ITO utilizando un ohmímetro para identificar el lado del portaobjetos con el recubrimiento conductor. Usando un escriba con punta de diamante, grabe y etiquete el lado recubierto ITO del portaobjetos del microscopio.Luego realice la criosección en un criomicrótomo de investigación. Transfiera los tejidos de ceca de ratón incrustados en OCT de un congelador de 80 grados centígrados a la cámara de criomicrotomo en hielo seco. Dentro de la cámara de criomicrotomo, monte el tejido incrustado en OCT en un mandril de muestra con una solución OCT adicional.Después de que la solución OCT se haya solidificado, fije el mandril a la cabeza de la muestra y comience la criosección en incrementos de 10 a 50 micrómetros para alcanzar la profundidad o el plano de tejido deseado del órgano. Una vez que se alcanza una sección transversal óptima del tejido, comience a recolectar secciones a 12 micrómetros de espesor. Manipule suavemente la rebanada con pinceles de artista y colóquela en un portaobjetos de microscopio recubierto de teflón.Para recoger el tejido del portaobjetos recubierto de teflón, enrolle el portaobjetos del microscopio recubierto con ITO sobre la sección de tejido. Descongele la sección de tejido en el portaobjetos del microscopio presionando la palma de la mano en la parte posterior del portaobjetos recubierto con ITO. Continúe descongelando hasta que la sección de tejido pase de translúcida a una textura opaca o mate.Para el análisis el mismo día, transfiera los portaobjetos de microscopio montados en tejido sobre hielo seco a una caja seca con desecante para su almacenamiento. Realice la aplicación de matriz MALDI y la espectrometría de masas de imágenes MALDI como se demostró anteriormente. Analice las imágenes de iones de múltiples réplicas biológicas y compare los resultados para una significación a través de comparaciones de diagramas de caja de intensidad utilizando el software estadístico SCiLS.El análisis MALDI en modo de iones negativos de muestras de cultivo bacteriano permite detectar docenas de metabolitos. Las mediciones de masa precisas de alta resolución permiten la identificación tentativa de ornitina y arginina. Se muestran las regiones de medición para el análisis de espectrometría de masas de imágenes.La espectrometría de masas de imágenes de estas muestras permite el mapeo espacial de los metabolitos de aminoácidos de ornitina y arginina que se encuentran alterados y localizados diferencialmente en presencia de Enterococcus faecalis. La morfología tisular de la ceca del ratón infectado se visualizó mediante tinción con hematoxilina y eosina. Se muestran imágenes ópticas de tejidos de ceca de ratón después de aplicar una capa de matriz MALDI de 1, 5-diaminonaftaleno.Las imágenes de iones MALDI para ornitina y arginina muestran distribuciones espaciales únicas en las muestras de tejido. La consideración más importante para este protocolo es mantener un secado y manejo suaves de las muestras de cultivo bacteriano para minimizar el burbujeo, el agrietamiento y otras deformaciones de la muestra. Después de la espectrometría de masas de imágenes, se pueden realizar análisis de microscopía de campo claro y fluorescencia de muestras de tejido para evaluar la morfología del tejido.Esto también puede permitir la validación dirigida de vías moleculares utilizando métodos de imagen basados en anticuerpos.

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Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Fuente: Specker, J. T., et al. Investigación de la cooperación microbiana mediante análisis por espectrometría de masas por imagen de colonias bacterianas crecidas en agar y en tejido durante la infección. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra el uso de espectrometría de masas asistida por desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI) para visualizar la distribución de aminoácidos en tejidos intestinales de ratones infectados con Clostridioides difficile, sola o en combinación con...

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Aprende a visualizar el metabolismo espacial de interacciones microbianas durante infecciones usando espectrometría de masas de imágenes MALDI-IMS en cultivos bacterianos sobre agar y tejidos.

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