Name: Hipersensibilidad de contacto como modelo murino de dermatitis alérgica de contacto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Aprenda a inducir hipersensibilidad de contacto en ratones como modelo de dermatitis alérgica. Este método permite evaluar respuestas inmunes mediadas por células T mediante edema auricular y análisis celulares.

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Este estudio fue apoyado por la subvención SUBZ. A020.22.060 de la Universidad de Medicina de Wroclaw, Polonia, y por subvenciones del Ministerio de Ciencia y Educación Superior N N401 545940 a MS e IP2012 0443 72 a MMS.

<ol><li>Nosbaum, A., Vocanson, M., Rozieres, A., Hennino, A., Nicolas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+and+irritant+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Allergic and irritant contact dermatitis.</a> European Journal of Dermatology. 19 (4), 325-332 (2009).</li>
<li>Hertl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominance+of+epidermal+CD8%2B+T+lymphocytes+in+bullous+cutaneous+reactions+caused+by+beta-lactam+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Predominance of epidermal CD8+ T lymphocytes in bullous cutaneous reactions caused by beta-lactam antibiotics.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 101 (6), 794-799 (1993).</li>
<li>Martin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+lymphocyte-mediated+immune+responses+to+chemical+haptens+and+metal+ions%3A+implications+for+allergic+and+autoimmune+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">T lymphocyte-mediated immune responses to chemical haptens and metal ions: implications for allergic and autoimmune disease.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 134 (3), 186-198 (2004).</li>
<li>Takeyoshi, M., Iida, K., Suzuki, K., Yamazaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+sensitization+potency+of+isoeugenol+and+its+dimers+evaluated+by+a+non-radioisotopic+modification+of+the+local+lymph+node+assay+and+guinea+pig+maximization+test%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Skin sensitization potency of isoeugenol and its dimers evaluated by a non-radioisotopic modification of the local lymph node assay and guinea pig maximization test.</a> Journal of Applied Toxicology. 28 (4), 530-534 (2008).</li>
<li>Nakamura, K., Aizawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+genetic+control+of+picryl+chloride+contact+hypersensitivity+reaction+in+inbred+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Studies on the genetic control of picryl chloride contact hypersensitivity reaction in inbred rats.</a> Transplantation Proceedings. 13 (2), 1400-1403 (1981).</li>
<li>Asherson, G. L., Ptak, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+and+delayed+hypersensitivity+in+the+mouse.+I.+Active+sensitization+and+passive+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Contact and delayed hypersensitivity in the mouse. I. Active sensitization and passive transfer.</a> Immunology. 15 (3), 405-416 (1968).</li>
<li>Honda, T., Egawa, G., Grabbe, S., Kabashima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+immune+events+in+the+murine+contact+hypersensitivity+model%3A+toward+the+understanding+of+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Update of immune events in the murine contact hypersensitivity model: toward the understanding of allergic contact dermatitis.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 133 (2), 303-315 (2013).</li>
<li>Kaplan, D. H., Jenison, M. C., Saeland, S., Shlomchik, W. D., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+langerhans+cell-deficient+mice+develop+enhanced+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Epidermal langerhans cell-deficient mice develop enhanced contact hypersensitivity.</a> Immunity. 23 (6), 611-620 (2005).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Langerin+expressing+cells+promote+skin+immune+responses+under+defined+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Langerin expressing cells promote skin immune responses under defined conditions.</a> Journal of Immunology. 180 (7), 4722-4727 (2008).</li>
<li>Wang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+Th1+and+CD8%2B+type+1+cytotoxic+T+cells+both+play+a+crucial+role+in+the+full+development+of+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">CD4+ Th1 and CD8+ type 1 cytotoxic T cells both play a crucial role in the full development of contact hypersensitivity.</a> Journal of Immunology. 165 (12), 6783-6790 (2000).</li>
<li>Mori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+hypersensitivities+to+hapten+are+controlled+by+IFN-gamma-upregulated+keratinocyte+Th1+chemokines+and+IFN-gamma-downregulated+langerhans+cell+Th2+chemokines%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Cutaneous hypersensitivities to hapten are controlled by IFN-gamma-upregulated keratinocyte Th1 chemokines and IFN-gamma-downregulated langerhans cell Th2 chemokines.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1719-1727 (2008).</li>
<li>Peszkowski, M. J., Warfvinge, G., Larsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+and+irritant+contact+responses+to+DNFB+in+BN+and+LEW+rat+strains+with+different+TH1%2FTH2+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Dermato-Venereologica%22%5BJournal%5D)">Allergic and irritant contact responses to DNFB in BN and LEW rat strains with different TH1/TH2 profiles.</a> Acta Dermato-Venereologica. 74 (5), 371-374 (1994).</li>
<li>Henningsen, S. J., Mickell, J., Zachariae, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+kinins+in+dinitrochlorobenzene+contact+dermatitis+of+guinea-pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Allergologica%22%5BJournal%5D)">Plasma kinins in dinitrochlorobenzene contact dermatitis of guinea-pigs.</a> Acta Allergologica. 25 (5), 327-331 (1970).</li>
<li>Maibach, H. I., Maguire, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elicitation+of+delayed+hypersensitivity+%28DNCB+contact+dermatitis%29+in+markedly+panleukopenic+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Elicitation of delayed hypersensitivity (DNCB contact dermatitis) in markedly panleukopenic guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 41, 123-127 (1963).</li>
<li>Martel, B. C., Lovato, P., Bäumer, W., Olivry, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+animal+models+of+atopic+dermatitis+for+preclinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Yale+Journal+of+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Translational animal models of atopic dermatitis for preclinical studies.</a> The Yale Journal of Biology and Medicine. 90 (3), 389-402 (2017).</li>
<li>Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Animal models of atopic dermatitis.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 129 (1), 31-40 (2009).</li>
<li>Li, Y. Z., Lu, X. Y., Jiang, W., Li, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effect+of+qingpeng+ointment+in+atopic+dermatitis-like+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effect of qingpeng ointment in atopic dermatitis-like murine model.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 2013, 907016(2013).</li>
<li>Hoggatt, J., Hoggatt, A. F., Tate, T. A., Fortman, J., Pelus, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bleeding+the+laboratory+mouse%3A+Not+all+methods+are+equal%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Bleeding the laboratory mouse: Not all methods are equal.</a> Experimental Hematology. 44 (2), 132-137 (2016).</li>
<li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+th17+differentiation+of+na%C3%AFve+CD4+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and th17 differentiation of naïve CD4 T lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (79), e50765(2013).</li>
<li>Vlab, A. Hemocytometer - Counting of Cells. Amrita University. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=MKS0KM3lr90">https://www.youtube.com/watch?v=MKS0KM3lr90</a> (2011).</li>
<li>Majewska-Szczepanik, M., Strzepa, A., Marcińska, K., Wen, L., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunization+with+TNP-Ig+and+Zymosan+induces+TCR%CE%B1%CE%B2%2B+CD4%2B+contrasuppressor+cells+that+reverse+skin-induced+suppression+via+IL-17A%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunization with TNP-Ig and Zymosan induces TCRαβ+ CD4+ contrasuppressor cells that reverse skin-induced suppression via IL-17A.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 164 (2), 122-136 (2014).</li>
<li>Majewska-Szczepanik, M., Zemelka-Wiącek, M., Ptak, W., Wen, L., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunization+with+DNP-BSA+induces+CD4%2B+CD25%2B+Treg+cells+that+inhibit+Tc1-mediated+CS%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunization with DNP-BSA induces CD4+ CD25+ Treg cells that inhibit Tc1-mediated CS.</a> Immunology and Cell Biology. 90 (8), 784-795 (2012).</li>
<li>Directive 2010/63 / EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of the European Union. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:En:PDF">https://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:En:PDF</a> (2010).</li>
<li>Colvin, R. B., Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+clotting+system+in+cell-mediated+hypersensitivity.+II.+Kinetics+of+fibrinogen%2Ffibrin+accumulation+and+vascular+permeability+changes+in+tuberculin+and+cutaneous+basophil+hypersensitivity+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Role of the clotting system in cell-mediated hypersensitivity. II. Kinetics of fibrinogen/fibrin accumulation and vascular permeability changes in tuberculin and cutaneous basophil hypersensitivity reactions.</a> Journal of Immunology. 114, 377-387 (1975).</li>
<li>Szczepanik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+contact+sensitivity+in+non-obese+diabetic+%28NOD%29+mice+by+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Regulation of contact sensitivity in non-obese diabetic (NOD) mice by innate immunity.</a> Contact Dermatitis. 79 (4), 197-207 (2018).</li>
<li>Askenase, P. W., Majewska-Szczepanik, M., Kerfoot, S., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Participation+of+iNKT+cells+in+the+early+and+late+components+of+Tc1-mediated+DNFB+contact+sensitivity%3A+Cooperative+role+of+%CE%B3%CE%B4-T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Participation of iNKT cells in the early and late components of Tc1-mediated DNFB contact sensitivity: Cooperative role of γδ-T cells.</a> Scandinavian Journal of Immunology. 73 (5), 465-477 (2011).</li>
<li>Zemelka-Wiącek, M., Majewska-Szczepanik, M., Ptak, W., Szczepanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunization+with+protein+antigen+induces+antigen-non-specific+suppression+of+CD8+T+cell+mediated+contact+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reports%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunization with protein antigen induces antigen-non-specific suppression of CD8 T cell mediated contact sensitivity.</a> Pharmacological Reports. 64 (6), 1485-1496 (2012).</li>
<li>Van Loveren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+micrometers+and+calipers+to+measure+various+components+of+delayed-type+hypersensitivity+ear+swelling+reactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Use of micrometers and calipers to measure various components of delayed-type hypersensitivity ear swelling reactions in mice.</a> Journal of Immunological Methods. 67 (2), 311-319 (1984).</li>
<li>Tsuji, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cell-dependent+T+cell+responses%3A+IgM+antibodies+are+required+to+elicit+contact+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">B cell-dependent T cell responses: IgM antibodies are required to elicit contact sensitivity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 196 (10), 1277-1290 (2002).</li>
<li>Campos, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+immunization+rapidly+activates+liver+invariant+Valpha14+NKT+cells+stimulating+B-1+B+cells+to+initiate+T+cell+recruitment+for+elicitation+of+contact+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cutaneous immunization rapidly activates liver invariant Valpha14 NKT cells stimulating B-1 B cells to initiate T cell recruitment for elicitation of contact sensitivity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (12), 1785-1796 (2003).</li>
<li>Rühl-Muth, A. C., Maler, M. D., Esser, P. R., Martin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+of+a+fat-enriched+diet+causes+the+loss+of+resistance+to+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Feeding of a fat-enriched diet causes the loss of resistance to contact hypersensitivity.</a> Contact Dermatitis. 85 (4), 398-406 (2021).</li>
<li>Bour, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((histocompatibility+complex+class+I-restricted+CD8%2B+T+cells+and+class+II-restricted+CD4%2B+T+cells%2C+respectively%2C+mediate+and+regulate+contact+sensitivity+to+dinitrofluorobenzene%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">histocompatibility complex class I-restricted CD8+ T cells and class II-restricted CD4+ T cells, respectively, mediate and regulate contact sensitivity to dinitrofluorobenzene.</a> European Journal of Immunology. 25 (11), 3006-3010 (1995).</li>
<li>Majewska-Szczepanik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+aggravates+contact+hypersensitivity+reaction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Obesity aggravates contact hypersensitivity reaction in mice.</a> Contact Dermatitis. 87 (1), 28-39 (2022).</li>
<li>Katagiri, K., Arakawa, S., Kurahashi, R., Hatano, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+contact+hypersensitivity+in+diet-induced+obese+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dermatological+Science%22%5BJournal%5D)">Impaired contact hypersensitivity in diet-induced obese mice.</a> Journal of Dermatological Science. 46 (2), 117-126 (2007).</li>
<li>Bouloc, A., Cavani, A., Katz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+hypersensitivity+in+MHC+class+II-deficient+mice+depends+on+CD8+T+lymphocytes+primed+by+immunostimulating+Langerhans+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Contact hypersensitivity in MHC class II-deficient mice depends on CD8 T lymphocytes primed by immunostimulating Langerhans cells.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 111 (1), 44-49 (1998).</li>
<li>Martin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+immunization+indicates+that+CD8%2B+T+cells+are+the+dominant+effector+cells+in+trinitrophenyl-specific+contact+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Peptide immunization indicates that CD8+ T cells are the dominant effector cells in trinitrophenyl-specific contact hypersensitivity.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 115 (2), 260-266 (2000).</li>
<li>Vennegaard, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+exposure+to+nickel+induces+nickel+allergy+in+mice+via+a+MyD88-dependent+and+interleukin-1-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous exposure to nickel induces nickel allergy in mice via a MyD88-dependent and interleukin-1-dependent pathway.</a> Contact Dermatitis. 71 (4), 224-232 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El CHS se induce a través de haptenos, que se unen a antígenos autoproteicos en la piel, creando neoantígenos. El CHS está mediado por el reclutamiento extravascular local de células T efectoras chS específicas del antígeno circulante, lo que resulta en hinchazón en el tejido desafiado, alcanzando su punto máximo 24 h después de la exposición de la piel secundaria al mismohapteno 6. La hinchazón del tejido es causada principalmente por la infiltración de leucocitos y la deposición de fibr...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/64329">Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis</a>. The Protocol and Representative Results sections were updated.
Step 3.2.1 of the Protocol has been updated from:
On day "4", prepare 0.4% hapten: TNCB in an acetone-ethanol mixture (ratio 1:1). Prepare the solution just before use in a glass vial and protect it from light by covering the vial with aluminum foil.
to:
On day "4", prepare 0.4% hapten: TNCB in an acetone: olive oil mixture (ratio 1:1). Prepare the solution just before use in a glass vial and protect it from light by covering the vial with aluminum foil.
Figure 1 of the Representative Results has been updated from:
<img alt="Mouse ear thickness measurement experiment diagram; TNCB-induced dermatitis comparison." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig01.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of CHS. Sensitization, challenge, and ear measurement. Abbreviations: CHS = contact hypersensitivity reaction; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig01large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="Mice sensitization process; diagram of control/test groups, TNCB application, ear thickness measurement." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of CHS. Sensitization, challenge, and ear measurement. Abbreviations: CHS = contact hypersensitivity reaction; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig1v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
Figure 2 of the Representative Results has been updated from:
<img alt="CHS induction in mice using TNCB, diagram showing sensitization, i.v. cell transfer, ear measurement." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig02.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 2"> 
Figure 2: Adoptive transfer of the CHS-effector cells. Abbreviations: ALNs =axillary and inguinal lymph nodes; CHS = contact hypersensitivity reaction; i.v. = intravenously; SPLs = spleens; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig02large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="Mouse sensitization and TNCB application diagram; CHS study setup with control and test groups." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64329/64329fig2v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 2"> 
Figure 2: Adoptive transfer of the CHS-effector cells. Abbreviations: ALNs =axillary and inguinal lymph nodes; CHS = contact hypersensitivity reaction; i.v. = intravenously; SPLs = spleens; TNCB = 2,4,6-trinitrochlorobenzene. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64329/64329fig2v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64329">Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis</a>. The Protocol&#160;and Representative Results sections were updated.

Erratum: Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis

La dermatitis alérgica de contacto (ACD) es una enfermedad inflamatoria común de la piel en los países industrializados causada por una reacción de hipersensibilidad tipo IV resultante de la exposición a sustancias químicas de bajo peso molecular llamadas haptenos. Las sustancias que causan sensibilización por contacto en los seres humanos incluyen iones de metales pesados (cromo, níquel, hierro, cobalto), trementina, fragancias, colorantes y conservantes presentes en cosméticos (por ejemplo, p-fenilendiamina), algunos medicamentos (por ejemplo, neomicina, benzocaína), antibióticos β-lactámicos (es decir, penicilina), productos químicos producidos por las plantas (pentadecacacecol, una sustancia presente en la hiedra venenosa), así como hidroquinona utilizada en la industria fotográfica 1,2 . Los agentes etiológicos acD son muy altos, ya que solo en la industria se utilizan más de 100,000 productos químicos, y se sintetizan 2,000 nuevos cada año. Hasta la fecha, se han identificado más de 3.700 moléculas que pueden ser haptenos/alérgenos de contacto3. La reacción de hipersensibilidad de contacto (CHS) es un modelo experimental de ACD que puede estudiarse en ratones, cobayas y ratas y puede ser inducida por la aplicación tópica en la piel de haptenos químicos reactivos disueltos en disolventes orgánicos 4,5,6. Este estudio tiene como objetivo describir un método de laboratorio objetivo que puede ayudar a estudiar la reacción chS en ratones, que puede medirse y cuantificarse mediante diversas pruebas.
El CHS consiste en fases de sensibilización (inducción) y efector (desafío). En modelos animales, los haptenos primero se unen covalentemente a las proteínas del cuerpo para crear neoantígenos. Durante la fase de sensibilización, los queratinocitos activados promueven la migración y maduración de las células dendríticas de la piel (sDC) mediante la producción de citoquinas proinflamatorias-factor de necrosis tumoral α (TNF-α) e interleucina 1β (IL-1β)7. Las células de Langerhans epidérmicas (LC) presentan antígenos durante las fases de inducción y efector del CHS8. Los LC expuestos al hapteno durante la sensibilización promueven la inducción de células reguladoras y efectoras9. La creciente evidencia de varios estudios sugiere que las respuestas de CHS pueden estar mediadas por células Th1 restringidas a CD4 + MHC clase II, liberando localmente interferón-γ (IFN-γ) para emplear un infiltrado inflamatorio característico, linfocitos Tc1 restringidos por CD8 + MHC clase I que también pueden liberar IFN-γ pero en su mayoría median daño citotóxico a los queratinocitos, y ahora también células Th17 productoras de interleucina 17 (IL-17)10, 11.
Se han desarrollado varios modelos diferentes de CHS que emplean variasespecies 1 2,13,14 y haptenos (una comparación detallada de diferentes haptenos, disolventes y tiempo de aplicación se resume en la Tabla 1). El ratón, una especie de laboratorio de uso frecuente, ofrece algunas ventajas en el estudio de CHS. Hay más cepas, knockouts (KO) y animales transgénicos entre los ratones en comparación con otras especies, lo que los convierte en un animal muy atractivo15. Además, el modelo CHS requiere muchos animales, y los ratones son más económicos aquí. Los modelos animales no imitan el ACD en todos los aspectos; en particular, muestran costras y descamación, lo que no es común para los humanos16,17. Las características de la enfermedad crónica son difíciles de reproducir, principalmente porque el modelo descrito no asume la aplicación del hapteno durante un largo período de tiempo. Sin embargo, se ha confirmado aquí que muchos de los aspectos significativos de ACD se reproducen. También se ha demostrado que, al igual que en los seres humanos, estas características están asociadas con reacciones alérgicas locales. La elección del hapteno, su disolvente y su aplicación descrita en este protocolo fueron dictadas por el hecho de que los resultados han sido confirmados por numerosas pruebas in vitro y que fue probado y modificado en el laboratorio durante muchos años hasta que se estableció la versión actual. Los modelos murinos permiten el análisis de los subconjuntos celulares o citoquinas que están involucradas en el desarrollo de ACD y son esenciales para las evaluaciones preclínicas de nuevos tratamientos.

<table><tbody><tr><td>Etanol al 70%</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>65350-M</td><td>para la desinfección de superficies</td></tr><tr><td>Placas de fondo plano de 96 pocillos, polipropileno</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Kremsmünster, Austria</td><td>655101</td><td>para medición de MPO y azul Evans: las placas deben estar hechas de polipropileno, que tiene una capacidad de unión más baja, por lo que las proteínas o el ADN no se unirán a</td></tr> la <tr><td>acetona (reactivo ACS, &ge; 99.5%)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>179124</td><td></td></tr><tr><td>Papel de aluminio</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>Z185140</td><td></td></tr><tr><td>Balanza analítica</td><td>Sartorius Weighing Technology GmbH, Goettingen, Alemania</td><td>PRACTUM224-1s, 29105177</td><td></td></tr><tr><td>Procesador de tejidos automatizado</td><td>MediMeas Instruments, Sarsehri, Haryana, India</td><td>MTP-E-212</td><td>preparar automáticamente las muestras de tejido fijándolas, deshidratándolas, aclarándolas e infiltrándolas con parafina</td></tr><tr><td>BD Vacutainer SST II Advance (tubo con gel para la obtención de suero)</td><td>Becton Dickinson (BD), Franklin Lakes, NJ, EE.UU</td>. <td>BD</td><td></td></tr> 366882 <tr><td>Kit de ácido bicinconínico para la determinación de proteínas</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>BCA1-1KT</td><td></td></tr><tr><td>Biotina Rata Anti-Ratón IgG1</td><td>Becton Dickinson (BD Biosciences), Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE. UU</td><td>. 553441</td><td></td></tr><tr><td>BSA (albúmina sérica bovina)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>A9418</td><td>ensayos y análisis de proteínas, 2 mg/mL</td></tr><tr><td>Filtro de células, tamaño de poro 70 &mu; m</td><td>BIOLOGIX, China</td><td>15-1070</td><td>adecuado para tubos de 50 mL</td></tr><tr><td>Coverslip</td><td>VWR, Radnor, Pensilvania, Estados Unidos</td><td>631-1583</td><td>24 mm, pero es posible utilizar diferentes tamaños</td></tr><tr><td>Capacidad de pipetas desechables: 5 mL, 10 mL, 25 mL</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>Z740301, Z740302, Z740303</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco&prime; Solución salina tamponada con fosfato)</td><td>ThermoFisher Scientific,&nbsp; Waltham, Massachusetts, EE. UU.</td><td>14190144</td><td>sin calcio, sin magnesio, cultivo de células de mamíferos</td></tr><tr><td>DPX Mountant para histología</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>6522</td><td>medios de montaje para H-E, se pueden utilizar otros p. ej., bálsamo</td></tr><tr><td>de Canadá Dumont 5 pinzas - rectas</td><td>Animalab, Poznan, Polonia</td><td>11251-10FST</td><td>instrumentos quirúrgicos para procedimientos en ratones (deben estar esterilizados)</td></tr><tr><td>Dumont 7 pinzas - dobladas</td><td>Animalab, Poznan, Polonia</td><td>11272-50FST</td><td>Instrumentos quirúrgicos para procedimientos en ratones (deben estar esterilizados)</td></tr><tr><td>Solución de eosina Y, alcohólica</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>HT110116 Eppendorf</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Safe-Lock 1,5 mL</td><td>Eppenforf, Alemania</td><td>3,01,20,086</td><td>polipropileno</td></tr><tr><td>Eppendorf Tubos Safe-Lock, 2,0 mL</td><td>Eppenforf, Alemania</td><td>3,01,20,094</td><td>polipropileno, fondo redondo (las perlas de homogeneización se pueden mover fácilmente)</td></tr><tr><td>Etanol 100% (alcoholol absoluto)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>1.07017</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 96%</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>1.59010</td><td></td></tr><tr><td>Evans azul</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>FBS (suero fetal bovino)</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EE. UU.</td><td></td><td></td>A3160802</tr><tr><td>Solución de formol, tamponada neutra, 10%</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Formamida 99,5% (GC)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>F7503</td><td></td></tr><tr><td>Congelador -20 &deg; C</td><td>Bosch, Alemania</td><td>GSN54AW30</td><td></td></tr><tr><td>Nevera +4 &deg; C / congelador -20 &° C</td><td>Bosch, Alemania</td><td>KGV36V10</td><td>Cultivo de células de mamíferos, calificado, Brasil, 10 x 50 mL</td></tr><tr><td>Portaobjetos de vidrio microskope, SuperFrost Plus</td><td>VWR, Radnor, Pensilvania, Estados Unidos</td><td>631-0108, 631-0446, 631-0447, 631-0448, 631-0449</td><td>Portaobjetos que eliminan la necesidad de aplicar materiales adhesivos o recubrimientos de proteínas, para evitar la pérdida de secciones de tejido durante la tinción.</td></tr><tr><td>Almohadilla gráfica Prisma</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>v. 9.4.0</td><td></td></tr><tr><td>Jabón gris</td><td>Pollena Ostrzesz&oacute; w, Producent Chemii Gospodarczej Sp. Z.o.o. , Sp. K., Polonia</td><td>Bialy jelen barra de jabón</td><td>gris Barra de jabón Natural Hipoalergénico. Producto generalmente disponible</td></tr><tr><td>H2SO4 (ácido sulfúrico) 1 mol/l (1 M)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>1.60313</td><td></td></tr><tr><td>Harris solución de hematoxilina</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td> Se recomienda el hemocitómetro <td>HHS16</td><td></td></tr><tr><td></td><td>VWR, Avantor, EE. UU.</td><td>612-5719</td><td>cámara de conteo manual, que es más precisa</td></tr><tr><td>Bromuro de hexadeciltrimetilamonio</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td> Homogeneizador <td>H5882</td><td></td></tr><tr><td></td><td>QIAGEN Hilden, Alemania</td><td>Tissue Lyser LT, SN 23.1001/05234</td><td>Homogeneizador con perlas de acero inoxidable (diámetro 5 mm) para tubos de centrífuga de 2 mL</td></tr><tr><td>Estreptavidina de peroxidasa de rábano picante (estreptavidina HRP)</td><td>Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, EE. UU</td>. <td>SA-5004-1</td><td></td></tr><tr><td>Solución de peróxido de hidrógeno (H202)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora Heracell 150i</td><td>Thermo Electron LED Gmbh, Alemania</td><td>41071068</td><td>37 oC en la atmósfera de 5 % CO2, y 65 0C para la desparafinación las secciones para histología</td></tr><tr><td>Ketamina 100 mg/mL, solución inyectable</td><td>Biowet Pulawy Sp. z o.o., Pulawy, Polonia</td><td>cat.# no disponible</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4 (fosfato de dihidrógeno potásico) Base anhidra al 99,995%</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>1.05108</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de laboratorio</td><td>Heraeus Megafuge 1.0R, Thermo Scientific, Alemania</td><td>B00013899</td><td>velocidad a 300 x g, con refrigeración a 4 0C</td></tr><tr><td>Centrífuga de laboratorio</td><td>Heraeus Fresco 21, Thermo Scientific, Alemania</td><td>75002425</td><td>velocidad hasta 3.000 x g, con refrigeración hasta 4 0C</td></tr><tr><td>Mascarilla (FFP2)</td><td>VWR, Radnor, Pensilvania, Estados Unidos</td><td>111-0917</td><td>para trabajar con diclorhidrato de ortodianisina</td></tr><tr><td></td><td>Unidad de cría de ratones de la Cátedra de Ciencias Biomédicas, Facultad de Ciencias de la Salud, Facultad de Medicina de la Universidad Jagellónica, Cracovia, Polonia</td><td>CBA/J, C57BL/6</td><td></td></tr><tr><td>micrómetro</td><td>Mitutoyo, Tokio, Japón</td><td>193-111</td><td>dígitos micrómetro exterior, tope de trinquete, rango de 0-25 mm, graduación de 0,001 mm, precisión de +/-0,002 mm, https://shop.mitutoyo.pl/web/mitutoyo/pl_PL/all/all/Mikrometr%20analogowy%20/PR/193-111/index.xhtml&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>microplaca, 96 pocillos, microlon, alta adherencia (para prueba ELISA)</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Kremsmünster, Austria</td><td>655061</td><td>con superficies de unión Maxi-Sorp para obtener resultados fiables y reproducibles en ensayos colormétricos</td></tr><tr><td>Microscopio con objetivos</td><td>Leica Microsystems CMS GmbH, Alemania</td><td>DM1000, 294011-082007</td><td>La histología presentada en el artículo se realizó bajo el sistema de imágenes ThermoFisher Scientific EVOS M5000, con los objetivos: FL 20X LWDPH, 0.40NA/3.1WD y FL 40X LWDPH 0.65NA/1.79WD</td></tr><tr><td>Mieloperoxidasa de leucocitos humanos (estándar MPO)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>M6908</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 x 7 H2O (fosfato de sodio dibásico heptahidratado)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>S9390</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de oliva</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>75343</td><td>puro, natural</td></tr><tr><td>OptEIA Mouse IFN-&gamma; Conjunto de ELISA</td><td>Becton Dickinson (BD Biosciences), Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE. UU.</td><td>555138</td><td></td></tr><tr><td>Clorhidrato de ortodianisina</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>D3252</td><td></td></tr><tr><td>Cera de parafina</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>76242</td><td>perlas, sólido ceroso</td></tr><tr><td>PBS (solución salina tamponada con fosfato)</td><td>ThermoFisher Scientific,&nbsp; Waltham, Massachusetts, EE. UU.</td><td>20012027</td><td>pH 7.2, cultivo de células de mamíferos</td></tr><tr><td>Medidor de pH</td><td>Elmetron, Polonia</td><td>CP-401</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas, volumen variable con puntas</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>Paquete de 3 EP3123000900-1EA</td><td>, opción 1, 0,5-10 uL/10-100 uL/100-1000 uL, incluye epT.I.P.S.</td></tr><tr><td>Cuchilla de afeitar</td><td>VWR, Radnor, Pensilvania, Estados Unidos</td><td>PERS94-0462</td><td>Cuchillas rascadoras y de corte, de un solo filo, lomo de aluminio, 100 cuchillas por caja, envueltas individualmente</td></tr><tr><td>Microtomo rotatorio</td><td>MRC Laboratory-Instruments, Essex, CM20 2HU UK</td><td>HIS-202A Tijeras</td><td></td></tr><tr><td>- rectas, afiladas / afiladas</td><td>Animalab, Poznan, Polonia</td><td>14060-10FST</td><td>Instrumentos quirúrgicos para procedimientos en ratones (deben estar esterilizados)</td></tr><tr><td>Tapón de rosca (tapa abierta)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>27056</td><td>tapón de polipropileno negro, para usar con 22&nbsp; Frasco de ml con rosca 20-400</td></tr><tr><td>Espectrofotómetro</td><td>BioTek Instruments, EE. UU.</td><td>201446</td><td>Espectrofotómetro universal de microplacas: &lambda; rango: 200 - 999 nm, rango de medición de absorbancia: 0,000 - 4,000 Abs</td></tr><tr><td>Plato de tinción 20 portaobjetos con gradilla</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>S6141</td><td>p. ej. 20 platos de tinción de portaobjetos completos con cubiertas, gradilla de portaobjetos y asa</td></tr><tr><td>Punzón de biopsia desechable estéril de 6 mm</td><td>Integra LifeSciences, Princeton, Nueva Jersey, EE. UU.</td><td>33-36</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas</td><td>Animalab, Poznan, Polonia</td><td>52138-46</td><td>Instrumentos quirúrgicos para procedimientos en ratones (deben estar esterilizados)</td></tr><tr><td>Casetes de procesamiento de tejidos</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>Z672122</td><td>Procesamiento de tejidos/incrustación de casetes con tapa</td></tr><tr><td>Juego de reactivos de sustrato TMB</td><td>Becton Dickinson (BD Biosciences), Franklin Lakes, NJ, EE. UU.</td><td>555214</td><td></td></tr><tr><td>TNCB (2,4,6-trinitroclorobenceno)</td><td>Tokyo Chemical Industry CO., LTD, Japón</td><td>C0307</td><td></td></tr><tr><td>TNP-BSA (albúmina sérica bovina conjugada con 2,4,6-trinitrofenil)</td><td>Biosearch Technologies LGC, Petaluma, CA, EE. UU</td>. <td>T-5050</td><td></td></tr><tr><td>T-PER (reactivo de extracción de proteínas tisulares)</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EE. UU</td>. <td>78510</td><td></td></tr><tr><td>Tubos 15 mL estériles</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>CLS430055 (Corning)</td><td>polipropileno, fondo cónico</td></tr><tr><td>Tubos 50 mL, estériles</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>CLS430290 (Corning)</td><td>polipropileno, fondo cónico</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Viales, tapa de rosca, vidrio transparente (solo vial) 22 mL</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>27173</td><td>para la preparación de hapteno, atornillado para que no se evapore</td></tr><tr><td>Baño de agua</td><td>AJL Electronic, Polonia</td><td>LW102</td><td></td></tr><tr><td>Dispensador de cera (parafina)</td><td>VWR, Radnor, Pensilvania, Estados Unidos</td><td>114-8737</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina (xilapán 20 mg/mL) solución inyectable</td><td>Vetoquinol Biowet Sp. z o.o., Gorzow Wielkopolski, Polonia</td><td>cat.# no disponible</td><td></td></tr><tr><td>Xileno (grado histológico)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemania</td><td>534056</td><td></td></tr></tbody></table>

hipersensibilidad de contacto como modelo murino de dermatitis alérgica de contacto

Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis

La hipersensibilidad de contacto (CHS) es un modelo experimental de dermatitis alérgica de contacto (ACD) que se puede estudiar en ratones. Este estudio tiene como objetivo presentar un método de laboratorio objetivo que pueda ayudar a estudiar la reacción chS en ratones, que puede medirse y cuantificarse mediante diversas pruebas. Para inducir CHS, en el día "0", los ratones fueron sensibilizados en un punto previamente afeitado por pintura de piel abdominal con el hapteno 2,4,6-trinitroclorobenceno (TNCB) en una mezcla de acetona-etanol, mientras que los ratones de control negativo fueron sensibilizados simuladamente con la mezcla de vehículo solo de acetona-etanol. En el día "4", el grosor basal del oído se midió con un micrómetro antes de la elicitación de CHS (desafío) pintando ambos oídos con TNCB diluido tanto en el grupo de prueba como en el de control. Después de 24 h, la hinchazón del oído se midió con un micrómetro. CHS es un ejemplo de una respuesta inmune mediada por células T que causa hinchazón en el tejido inflamado, alcanzando su punto máximo 24 horas después del desafío de la piel con el mismo hapteno. Un aumento en el edema del oído se correlacionó con el aumento del peso del oído, la actividad de la mieloperoxidasa (MPO), la concentración de citoquinas proinflamatorias en los extractos de oído, el aumento del engrosamiento de la dermis edematosa en el examen histológico y la permeabilidad vascular del oído. También hubo un aumento en la concentración de anticuerpos IgG1 específicos de TNP en los sueros del grupo de prueba en comparación con los ratones de control. Además, el CHS se puede transferir con éxito con las células efectoras de CHS obtenidas de donantes previamente sensibilizados con TNCB. Las células efectoras de CHS se administraron por vía intravenosa en ratones receptores ingenuos, que posteriormente fueron desafiados con el mismo hapteno diluido. La hinchazón del oído se midió con un micrómetro 24 h más tarde.

Para la inducción de CHS, los animales fueron sensibilizados mediante pintura cutánea (abdominal) con 150 μL de TNCB al 5% o sensibilizados simuladamente con el vehículo solo. En el día "4", las respuestas de hinchazón del oído de ambos oídos fueron inducidas por pintura de contacto (desafío) con 10 μL de TNCB al 0,4% en ambos ratones previamente sensibilizados en contacto con TNCB (grupo de prueba) y en ratones del grupo control (sensibilizados simuladamente). Los datos presentados muestran que los ratones sens...

La hipersensibilidad de contacto (CHS) es un modelo experimental murino de dermatitis alérgica de contacto (ACD). El CHS se basa en la sensibilización con hapteno reactivo mediante la pintura de la piel afeitada del pecho y el abdomen, con un posterior desafío de la piel del oído con un hapteno diluido, causando una reacción de hinchazón que se evalúa de varias maneras.

Hipersensibilidad de contacto como modelo murino de dermatitis alérgica de contacto

Contact hypersensitivity (CHS) is an experimental model of allergic contact dermatitis (ACD) that can be studied in mice. This study aims to present an ...

Un método de laboratorio objetivo presentado aquí puede ayudar a estudiar la reacción de hipersensibilidad de contacto en ratones, que imita la dermatitis alérgica de contacto en humanos. La reacción de hipersensibilidad de contacto se puede medir no solo por edema de oído, sino también por diversas pruebas de laboratorio que permiten el estudio de los mecanismos celulares involucrados en esta reacción. El modelo de hipersensibilidad más en contacto puede probar varios factores ambientales y nuevas sustancias para mostrar si los factores probados modulan las respuestas inmunes dependientes de células T, que pueden usarse para implementar nuevas terapias.Comience afeitando la piel del ratón con una hoja de afeitar y etiquetando la pata. Seis horas antes de la inducción de la hipersensibilidad de contacto, o CHS, aplique jabón gris con agua y afeite un área de dos centímetros cuadrados en el pecho y el abdomen del ratón. El mismo día, sensibilizar a los ratones aplicando 150 microlitros de 5% recién preparado en el lugar previamente afeitado.En el ratón de control, aplique únicamente el vehículo. Seque el punto de hapteno durante 30 segundos antes de volver a colocar al animal en la jaula. En el cuarto día, medir el grosor de la oreja de un ratón anestesiado usando un micrómetro a la hora cero por un observador que desconoce los grupos experimentales.Luego, aplique 10 microlitros de 04% hapteno recién preparado en ambos lados de las orejas en grupos de prueba y control y deje que se seque durante 30 segundos. En el día cinco, 24 horas después de la aplicación anterior de 0,4% de hapteno, repita la medición del grosor de la oreja para la medición de 24 horas. 24 horas después de la medición del grosor de la oreja, cuando el ratón todavía esté en anestesia profunda, corte las orejas lo más cerca posible del cráneo con tijeras.En el lado distal de las orejas, haga un punzón de seis milímetros de diámetro con un punzón de biopsia. Mida el peso de cada biopsia de oído en la balanza analítica y explíquelo en miligramos. Para el ensayo de mieloperoxidasa, o MPO, coloque las biopsias de oído en un tubo de microcentrífuga de dos mililitros con perlas de acero inoxidable y agregue 500 microlitros del tampón preparado.Homogeneizar las biopsias durante 10 minutos en un homogeneizador y luego enfriar la muestra durante 15 minutos a 4 grados centígrados antes de homogeneizarla nuevamente durante 10 minutos. Saque las perlas una vez que las biopsias estén homogeneizadas. Congele los homogeneizados a menos 20 grados centígrados durante 30 minutos.Descongele y vortex las muestras, y repita el procedimiento de homogeneización y congelación tres veces. Una vez hecho esto, centrifugar el homogeneizado a 3, 000 G durante 30 minutos a 4 grados centígrados. Coseche el sobrenadante con una pipeta para medir la actividad MPO y explíquelo en unidades por miligramo de proteína.Para realizar una prueba de permeabilidad vascular, sensibilizar a los ratones en el día cero y en el día cuatro, desafie directamente aplicando hapteno en las orejas utilizando el procedimiento mencionado anteriormente. 23 horas más tarde, inyecte por vía intravenosa 8,3 microlitros por gramo de peso corporal de colorante azul Evans al 1% en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco, o DPBS, al ratón anestesiado. Después de una hora, vuelva a anestesiar al ratón para recoger las biopsias de oído, como se describió anteriormente.Para extraer el tinte del tejido, incubar las biopsias en los tubos que contienen un mililitro de formamida a 37 grados centígrados en una atmósfera de 5% de dióxido de carbono durante 18 horas. Después de recolectar biopsias de oído, cuando el ratón todavía esté bajo anestesia profunda, retire el globo ocular con pinzas. Aplique una presión suave sobre el ratón y recoja sangre del seno retroorbitario en el tubo para la recolección de suero.Invierta el tubo seis veces y espere 30 minutos para que la sangre se coagule. Luego, centrifugar el tubo a 1, 300 a 2, 000 G durante 10 minutos a temperatura ambiente. Sensibilizar a los ratones donantes con TNCB hapteno en el día cero utilizando el procedimiento mencionado anteriormente En el cuarto día, después de desinfectar la piel, aislar los ganglios linfáticos axilares e inguinales, o ALN, del ratón anestesiado con fórceps, seguido de aislar el bazo.Triture el tejido entre los extremos esmerilados de dos portaobjetos de microscopio y pase la suspensión celular a través de un colador celular con un tamaño de poro de 70 micrómetros. Luego, lave las células con DPBS suplementado con suero bovino fetal al 1% y centrifugarlas a 300 G durante 10 minutos a cuatro grados centígrados. Decantar el sobrenadante y resuspender el pellet celular restante en uno a cinco mililitros de DPBS.Prepare una mezcla 1: 1 de ALN y bazo para lograr una concentración de hasta 7.0 veces 10 a la séptima célula en 200 microlitros de DBPS antes de inyectar por vía intravenosa la mezcla de células efectoras de CHS en un ratón anestesiado. Mide el grosor de la oreja a la hora cero y después de 24 horas del desafío. Los datos mostraron que los ratones sensibilizados a TNCB y desafiados en los oídos cuatro días después desarrollaron un aumento significativo de la hinchazón del oído, en comparación con los ratones de control sensibilizados simuladamente y luego desafiados de manera similar.El aumento del edema del oído en el grupo de prueba resultó en un aumento del peso del oído, la actividad de MPO, la concentración de interferón gamma en los extractos del oído, cambios edematosos en la dermis en el examen histológico y permeabilidad vascular del oído Los anticuerpos IgG1 específicos de TNP se elevaron en los sueros de los ratones de prueba en comparación con los animales de control. Los animales que recibieron las células efectoras de CHS de donantes previamente sensibilizados con TNCB mostraron un aumento significativo de la hinchazón del oído, en comparación con los animales que no recibieron las células. El momento más crítico es desencadenar la hipersensibilidad de contacto.La solución de Hapten es muy volátil y sensible a la luz, por lo que debe aplicarse rápidamente a la piel de los animales. Se pueden realizar pruebas adicionales en las células efectoras aisladas. Por ejemplo, se pueden establecer cultivos celulares para evaluar la capacidad de proliferar en presencia de antígenos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

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Los modelos experimentales de ratón de asma alérgica ofrecen nuevas posibilidades para el estudio de patogénesis de la enfermedad y el desarrollo de nuevas terapias. Estos modelos se adaptan bien a los factores de medición que regulan la respuesta inmune alérgica, inflamación de las vías, y la fisiopatología pulmonar.

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Aquí, describimos los métodos para inducir dermatitis alérgica de contacto en orejas de ratón por 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB) y cómo evaluar la gravedad de la dermatitis alérgica de contacto.

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El estudio demuestra el papel de la piel en la modulación de las respuestas inmunitarias en ratones a través de la inmunización epicutánea (EC). La inmunización de la AE con un antígeno proteico puede suprimir las respuestas inmunitarias en la hipersensibilidad de contacto o revertir la supresión inducida por la piel cuando se combina con patrones moleculares asociados a patógenos. La inmunización anticonceptiva anticonceptiva (AE) se muestra prometedora como un enfoque eficaz y sin agujas para...

Modelo murino de inmunomodulación inducida epicutáneamente

La dermatitis herpetiforme (DH) es una enfermedad inflamatoria crónica caracterizada por una reacción autoinmune entre IgA y la epidermis transglutaminasa (ETG). DH se desarrolla en una porción muy pequeña de los pacientes con sensibilidad al gluten y / o enfermedad celíaca. Los resultados de este estudio indican que DH también puede desarrollarse en una gran mono rhesus con síntomas de la dermatitis idiopática.

Reconocimiento de la transglutaminasa epidérmica por IgA y anticuerpos transglutaminasa tisular 2 en un raro caso de Rhesus Dermatitis

Durante el proceso de infección, un paso clave es la adhesión de los patógenos con las células huésped. En la mayoría de los casos este paso la adhesión se produce en presencia de la tensión mecánica generada por el flujo de líquidos. Se describe una técnica que presenta el esfuerzo cortante como un parámetro importante en el estudio de la adhesión bacteriana.

La introducción de la tensión de cizallamiento en el Estudio de la adhesión bacteriana

Aprenda a inducir hipersensibilidad de contacto en ratones como modelo de dermatitis alérgica. Este método permite evaluar respuestas inmunes mediadas por células T mediante edema auricular y análisis celulares.

Hipersensibilidad de contacto como modelo murino de dermatitis alérgica de contacto

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