Name: Un enfoque de imagen intravital fluorescente para estudiar la dinámica de señalización de calcio inducida por la carga en osteocitos de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-24T14:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 3 s
Description: Aprende a realizar imagen intravital fluorescente para estudiar la señalización de calcio en osteocitos de ratón durante la carga mecánica. Esta técnica avanza la comprensión de la mecanobiología ósea in vivo.

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<ol><li>Lu, X. L., Huo, B., Park, M., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+response+in+osteocytic+networks+under+steady+and+oscillatory+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Calcium response in osteocytic networks under steady and oscillatory fluid.</a> Bone. 51 (3), 466-473 (2012).</li>
<li>Wu, D., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-dependent+adhesion+mediates+network+responses+to+physiological+stimulation+of+the+osteocyte+cell+process%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Matrix-dependent adhesion mediates network responses to physiological stimulation of the osteocyte cell process.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), 12096-12101 (2013).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+in+the+osteocyte+mechanical+environment%3A+A+fluid-structure+interaction+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Fluid flow in the osteocyte mechanical environment: A fluid-structure interaction approach.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 13 (1), 85-97 (2013).</li>
<li>Genetos, D. C., Kephart, C. J., Zhang, Y., Yellowley, C. E., Donahue, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+fluid+flow+activation+of+gap+junction+hemichannels+induces+atp+release+from+MLO-Y4+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Oscillating fluid flow activation of gap junction hemichannels induces atp release from MLO-Y4 osteocytes.</a> Journal of Cellular Physiology. 212 (1), 207-214 (2007).</li>
<li>Lu, X. L., Huo, B., Chiang, V., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocytic+network+is+more+responsive+in+calcium+signaling+than+osteoblastic+network+under+fluid+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Osteocytic network is more responsive in calcium signaling than osteoblastic network under fluid flow.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 27 (3), 563-574 (2012).</li>
<li>Schaffler, M. B., Kennedy, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+signaling+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Osteoporosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Osteocyte signaling in bone.</a> Current Osteoporosis Reports. 10 (2), 118-125 (2012).</li>
<li>Kramer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+Wnt%2F+-Catenin+signaling+is+required+for+normal+bone+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Osteocyte Wnt/ -Catenin signaling is required for normal bone homeostasis.</a> Molecular and Cellular Biology. 30 (12), 3071-3085 (2010).</li>
<li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+osteocyte+regulation+of+bone+homeostasis+through+RANKL+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Evidence for osteocyte regulation of bone homeostasis through RANKL expression.</a> Nature Medicine. 17 (10), 1231-1234 (2011).</li>
<li>Kennedy, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+resorption+in+fatigue-loaded+bone+involves+both+apoptosis+and+active+pro-osteoclastogenic+signaling+by+distinct+osteocyte+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Activation of resorption in fatigue-loaded bone involves both apoptosis and active pro-osteoclastogenic signaling by distinct osteocyte populations.</a> Bone. 50 (5), 1115-1122 (2012).</li>
<li>Rawlinson, S. C. F., Wheeler-Jones, C. P. D., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arachidonic+acid+for+loading+induced+prostacyclin+and+prostaglandin+E2+release+from+osteoblasts+and+osteocytes+is+derived+from+the+activities+of+different+forms+of+phospholipase+A2%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Arachidonic acid for loading induced prostacyclin and prostaglandin E2 release from osteoblasts and osteocytes is derived from the activities of different forms of phospholipase A2.</a> Bone. 27 (2), 241-247 (2000).</li>
<li>David, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+bone+formation+in+bovine+trabecular+bone+cultured+in+a+dynamic+3D+bioreactor+is+enhanced+by+compressive+mechanical+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo bone formation in bovine trabecular bone cultured in a dynamic 3D bioreactor is enhanced by compressive mechanical strain.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (1), 117-126 (2008).</li>
<li>Davies, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+loaded+ex+vivo+bone+culture+system+%26%2334%3BZetos%26%2334%3B%3A+systems+and+culture+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cell+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanically loaded ex vivo bone culture system &#34;Zetos&#34;: systems and culture preparation.</a> European Cell & Materials. 11, 57-75 (2006).</li>
<li>Adachi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signaling+response+to+bone+matrix+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signaling response to bone matrix deformation.</a> Journal of Biomechanics. 42 (15), 2507-2512 (2009).</li>
<li>Huo, B., Lu, X. L., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+calcium+wave+propagation+in+linear+and+circuit-like+bone+cell+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+A%3A+Mathematical%2C+Physical+and+Engineering+Sciences%22%5BJournal%5D)">Intercellular calcium wave propagation in linear and circuit-like bone cell networks.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society A: Mathematical, Physical and Engineering Sciences. 368 (1912), 617-633 (2010).</li>
<li>Morrell, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+induced+Ca2%2B+oscillations+in+osteocytes+release+extracellular+vesicles+and+enhance+bone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanically induced Ca2+ oscillations in osteocytes release extracellular vesicles and enhance bone formation.</a> Bone Research. 6, 6(2018).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+intracellular+calcium+oscillations+in+osteocytes+in+intact+mouse+long+bones+under+dynamic+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">In situ intracellular calcium oscillations in osteocytes in intact mouse long bones under dynamic mechanical loading.</a> FASEB Journal. 28 (4), 1582-1592 (2014).</li>
<li>Chen, T. -W., Wardill, T. J., Sun, Y., Pulver, S. R., Renninger, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-sensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultra-sensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Jacobs, C. R., Temiyasathit, S., Castillo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+mechanobiology+and+pericellular+mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Osteocyte mechanobiology and pericellular mechanics.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 12, 369-400 (2010).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+properties+of+intracellular+calcium+signaling+in+osteocytic+and+osteoblastic+cell+networks+under+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal properties of intracellular calcium signaling in osteocytic and osteoblastic cell networks under fluid.</a> Bone. 53 (2), 531-540 (2013).</li>
<li>Thi, M. M., Suadicani, S. O., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensory+responses+of+osteocytes+to+physiological+forces+occur+along+processes+and+not+cell+body+and+require+%CE%B1V%CE%B23+integrin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mechanosensory responses of osteocytes to physiological forces occur along processes and not cell body and require αVβ3 integrin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (52), 21012-21017 (2013).</li>
<li>Wang, Y., McNamara, L. M., Schaffler, M. B., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+role+of+integrins+in+flow+induced+mechanotransduction+in+osteyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for the role of integrins in flow induced mechanotransduction in osteyocytes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (40), 15941-15946 (2007).</li>
<li>McNamara, L. M., Majeska, R. J., Weinbaum, S., Friedrich, V., Schaffler, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attachment+of+osteocyte+cell+processes+to+the+bone+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Attachment of osteocyte cell processes to the bone matrix.</a> The Anatomical Record. 292 (3), 355-363 (2009).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. A., Hall, B. K., Witten, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buried+alive%3A+How+osteoblasts+become+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Buried alive: How osteoblasts become osteocytes.</a> Developmental Dynamics. 235 (1), 176-190 (2005).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+application+to+bone+and+dental+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its application to bone and dental tissues.</a> Journal of Dental Research. 98 (6), 621-631 (2019).</li>
<li>Lewis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signals+encode+strain+magnitude+and+loading+frequency+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signals encode strain magnitude and loading frequency in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (44), 11775-11780 (2017).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMP1-targeted+Cre+expression+in+odontoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">DMP1-targeted Cre expression in odontoblasts and osteocytes.</a> Journal of Dental Research. 86 (4), 320-325 (2007).</li>
<li>Rubin, C. T., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+strain+similarity+in+vertebrates%3B+an+alternative+to+allometric+limb+bone+scaling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theoretical+Biology%22%5BJournal%5D)">Dynamic strain similarity in vertebrates; an alternative to allometric limb bone scaling.</a> Journal of Theoretical Biology. 107 (2), 321-327 (1984).</li>
<li>Jacobs, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effect+of+steady+versus+oscillating+flow+on+bone+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Differential effect of steady versus oscillating flow on bone cells.</a> Journal of Biomechanics. 31 (11), 969-976 (1998).</li>
<li>Kato, Y., Windle, J. J., Koop, B. A., Mundy, G. R., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteocyte-like+cell+line%2C+MLO-Y4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteocyte-like cell line, MLO-Y4.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 12 (12), 2014-2023 (1997).</li>
<li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteoid+preosteocyte-like+cell+MLO-A5+that+spontaneously+mineralizes+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteoid preosteocyte-like cell MLO-A5 that spontaneously mineralizes in culture.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 16 (9), 1622-1633 (2001).</li>
<li>Woo, S. M., Rosser, J., Dusevich, V., Kalajzic, I., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line+IDG-SW3+replicates+osteoblast-to-late-osteocyte+differentiation+in+vitro+and+accelerates+bone+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Cell line IDG-SW3 replicates osteoblast-to-late-osteocyte differentiation in vitro and accelerates bone formation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 26 (11), 2634-2646 (2011).</li>
<li>vander Plas, A., Nijweide, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+purification+of+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and purification of osteocytes.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 7 (4), 389-396 (1992).</li>
<li>Gu, G., Nars, M., Hentunen, T. A., Metsikkö, K., Väänänen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+primary+osteocytes+express+functional+gap+junctions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Isolated primary osteocytes express functional gap junctions in vitro.</a> Cell and Tissue Research. 323 (2), 263-271 (2006).</li>
<li>Paic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+differentially+expressed+genes+between+osteoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Identification of differentially expressed genes between osteoblasts and osteocytes.</a> Bone. 45 (4), 682-692 (2009).</li>
<li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nature Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Grienberger, C., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+calcium+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging calcium in neurons.</a> Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#3 Bisturí con mango</td><td>Microscopía Electrónica Sciences</td><td>72040-03</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Objetivo de inmersión en agua 20x</td><td>Olympus</td><td>XLUMPLFLN20XW</td><td>Este es un objetivo de 20x, pero también se puede usar 40x para este protocolo. Recomendamos las inmersiones en agua porque debe sumergirse en el baño durante la obtención de imágenes, por lo que el objetivo al aire libre puede causar aberraciones</td></tr><tr><td>A.M. Bickford Omnicon F/AIR</td><td>AM Bickford</td><td>80120</td><td>Una respuesta sensata a los problemas de gases de anestesia en el quirófano, el filtro de gas de anestesia F/AIR fue diseñado específicamente para eliminar los gases de anestesia residuales como el isoflurano, Halotano, Enflurano, etc. del entorno del quirófano.</td></tr><tr><td>Kit A.M. Bickford Omnicon F/AIR</td><td>AM Bickford</td><td>80000</td><td>Un kit completo con tubo y adaptadores para conectar F/AIR a la configuración</td></tr><tr><td>B6J. Cg-Gt(ROSA)26Sortm95.1(CAG-GCaMP6f)Hze/MwarJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>28865</td><td>GCaMP6f Ratones para cruzamiento con ratones Dmp1-Cre</td></tr><tr><td>B6N. FVB-Tg(Dmp1-cre)1Jqfe/BwdJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>23047</td><td>Dmp1-Cre Ratones para cruzamiento con ratones GCaMP6f&nbsp;</td></tr><tr><td>Célula de carga de compresión</td><td>FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>905898</td><td>LCM100 , 1000 g , Célula de carga de tensión y compresión subminiatura (rosca en miniatura/en línea) , RoHS sin plomo, Material - 17-4 PH S.S. , Rosca M3x0,5, Cable de poliéster trenzado de 4 conductores de 34 Awg , 5 pies de largo</td></tr><tr><td>Corning 500 mL DPBS (solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco), 1x [+] calcio, magnesio</td><td>VWR International</td><td>21-030-CV</td><td>Baño iónicamente equilibrado que contiene calcio sumerge el metatarsiano durante la obtención de imágenes</td></tr><tr><td>Herramienta de selección dental</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica Suministros</td><td></td><td>quirúrgicos</td></tr><tr><td>Alcohol etílico puro 200 proof Reactivo ACS >99.5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SIAL-459844-500ML</td><td>Propósitos de esterilización</td></tr><tr><td>Pin de fulcro</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Fabricado mediante sinterización directa con láser 3D de acero inoxidable (aleación PH1) a partir de archivos 3D SolidWorks STL. El proveedor original fue GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, ahora adquirida por FATHOM, las especificaciones se proporcionan en el documento publicado anteriormente</td></tr><tr><td>Kit de salida USB220 de alta resolución y velocidad</td><td>FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>717435</td><td>Se utiliza para conectar la célula de carga al portátil</td></tr><tr><td>ImageJ 1.53t con Java 1.8.0_172 (para Windows de 64 bits)</td><td>NIH</td><td>N/A</td><td>Instalar aquí https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Critical Care</td><td>66794-013-25</td><td>100% de líquido de vapor de inhalación</td></tr><tr><td>Soporte de carga</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Fabricado mediante sinterización directa por láser 3D de acero inoxidable (aleación PH1) a partir de archivos STL de SolidWorks en 3D. El proveedor original fue GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, ahora adquirida por FATHOM, las especificaciones se proporcionan en el documento publicado anteriormente</td></tr><tr><td>MATLAB R2019a</td><td>MathWorks</td><td></td><td>Para ejecutar el dispositivo de carga</td></tr><tr><td>Matrx VIP 3000 vaporizador de isoflurano de llenado de pozo Butler</td><td>Schein Animal Health</td><td>14309</td><td>Vaporizador para anestésico</td></tr><tr><td>Oxímetro de pulso Nonin Modelo 2500A Vet</td><td></td><td>2500A Vet</td><td></td></tr><tr><td>Servo piezoeléctrico controlador</td><td>PI-USA</td><td>E-625</td><td>Componente electrónico recomendado por la empresa para ser utilizado con el actuador</td></tr><tr><td>PiezoMove actuador piezoeléctrico lineal de alta rigidez</td><td>PI-USA</td><td>P-602.5SL</td><td>Actuador para el dispositivo de carga</td></tr><tr><td>Cuchillas de bisturí, n.º 10 para el mango n.º 3, paquete de 100</td><td>Electronscopía Sciences</td><td>72044-10</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Pinzas de acero inoxidable con puntas afiladas y finas. Longitud: 120 mm</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica</td><td>78326-42</td><td>Suministros</td></tr><tr><td>quirúrgicos Microscopio multifotónico Thorlabs Bergamo</td><td>ThorLabs</td><td>N/A</td><td>Este es solo el sistema de imágenes y no tiene el láser incluido, aunque ThorLabs tiene opciones de láser si se desea</td></tr><tr><td>Camaleón de titanio-zafiro Discovery NX con control de potencia total (TPC)</td><td>Coherente</td><td>N/A</td><td>Este sistema técnicamente tiene dos láseres, tanto un láser sintonizable como uno fijo. Sin embargo, para el protocolo, solo se necesita el sintonizable.</td></tr><tr><td>Tijeras de resorte Vannas - Borde de corte de 4 mm</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>15018-10</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Baño de agua</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Fabricado mediante sinterización directa con láser 3D de acero inoxidable (aleación PH1) a partir de archivos STL 3D de SolidWorks. El proveedor original fue GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, ahora adquirida por FATHOM, las especificaciones se proporcionan en el documento publicado anteriormente</td></tr></tbody></table>

un enfoque de imagen intravital fluorescente para estudiar la dinámica de señalización de calcio inducida por la carga en osteocitos de ratón

A Fluorescent Intravital Imaging Approach to Study Load-Induced Calcium Signaling Dynamics in Mouse Osteocytes

Aquí reportamos una metodología para estudiar la señalización de calcio en osteocitos embebidos in vivo utilizando preparación quirúrgica aguda e imágenes fluorescentes multifotónicas. La señal fluorescente verde se puede observar a partir de indicadores de calcio codificados genéticamente en osteocitos a través de la expresión de DMP1-Cre. La Figura 4 es una imagen de un solo plano de los osteocitos incrustados. Tenga en cuenta que todas las células están marcadas y expres...

Un enfoque de imagen intravital fluorescente para estudiar la dinámica de señalización de calcio inducida por la carga en osteocitos de ratón

Bone tissue is exquisitely sensitive to differences in mechanical load magnitude. Osteocytes, dendritic cells that form a syncytium throughout the bone, ...

a-fluorescent-intravital-imaging-approach-to-study-load-induced

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Para comprender la dinámica de la red de microcircuitos de la neocorteza, que es esencial para grabar simultáneamente la actividad de un gran número de neuronas. En vivo de dos fotones de imágenes de calcio es el único método que permite grabar la actividad de una densa población neuronal con una sola célula de resolución.

En Vivo 2-Photon imágenes de calcio en la capa 2 / 3 de los ratones

La extensión de la tienda que funciona con...

Basado en la fluorescencia de medición de la entrada de calcio de la tienda que funciona en las células vivas: a partir de células cancerosas cultivadas de fibra muscular esquelética

Source: Heredia, D. J., et. al. Imágenes ex vivo de la señalización de calcio específica de la célula en la sinapsis tripartita del diafragma del ratón. J. Vis. Exp. (2018) Este video demuestra imágenes de fluorescencia de la dinámica del calcio en las uniones neuromusculares (NMJs) en un ratón transgénico expresando indicadores de calcio codificados genéticamente. Un MNJ se identifica por receptores de acetilcolina marcados con fluorescencia en el diafragma con el nervio frénico. Un divisor de...

Imágenes de fluorescencia de la dinámica del calcio en las uniones neuromusculares en el diafragma de un ratón transgénico

Aquí presentamos técnicas para obtener imágenes de eventos locales de Ca2+ mediados por IP3 utilizando microscopía de fluorescencia en células de mamíferos intactas cargadas con indicadores de Ca2+ junto con un algoritmo que automatiza la identificación y el análisis de estos eventos.

Imagen Ca Local<sup&gt; 2 +</sup&gt; Las señales en las células de mamífero en cultivo

Aquí presentamos un protocolo de calcio imagen señalización en poblaciones individuales de tipos de células en la Unión neuromuscular murino.

Ex Vivo Proyección de imagen del calcio celular específicos de señalización en la sinapsis tripartita del diafragma del ratón

Presentamos la metodología para el aislamiento de miocitos murinos y cómo obtener trazas de voltaje o calcio simultáneamente con rastros de acortamiento de sarcomere utilizando fotometría de fluorescencia con mediciones simultáneas de geometría celular digital.

Imágenes ópticas de miocitos ventriculares murinos aislados

Presentamos un protocolo para exponer el médula oblonga del ratón adulto del lado ventral. Mediante el uso de una lente de índice de refracción de gradiente con un microscopio en miniatura, las imágenes de calcio se pueden utilizar para examinar la actividad de los somatas neuronales oliva inferiores in vivo.

In vivo Imágenes de calcio en la aceituna inferior de ratón

Se describen dos métodos relacionados para visualizar los eventos subcelulares necesarios para la transmisión sináptica. Estos protocolos permiten el monitoreo en tiempo real de la dinámica de la afluencia de calcio presináptico y la fusión de la membrana de vesícula sináptica utilizando imágenes de células vivas de neuronas cultivadas in vitro .

Medición fluorescente en tiempo real de las funciones sinápticas en modelos de esclerosis lateral amiotrófica

El protocolo describe el método de carga de un tinte de calcio fluorescente a través del nervio cortado en las terminales nerviosas motoras del ratón. Además, se presenta un método único para registrar transitorios rápidos de calcio en las terminaciones nerviosas periféricas mediante microscopía confocal.

Registro de transitorios de calcio en unión neuromuscular de ratón con alta resolución temporal mediante microscopía confocal

El presente protocolo describe la fabricación de una ventana craneal grande (6 x 3 mm2) utilizando envoltura de alimentos, silicona transparente y vidrio de cubierta. Esta ventana craneal permite experimentos in vivo de imágenes de calcio de campo amplio y dos fotones en el mismo ratón.

In vivo Imágenes de calcio de campo amplio y dos fotones de un ratón usando una ventana craneal grande

Este estudio describe el método para visualizar y desarrollar modelos tridimensionales (3D) de osteocitos dentro de la red lacunar-canalicular (LCN) para el análisis de dinámica de fluidos computacional (CFD). Los modelos generados utilizando este método ayudan a comprender la mecanosensación de los osteocitos en huesos sanos o enfermos.

Análisis e imagen de osteocitos

Aprende a realizar imagen intravital fluorescente para estudiar la señalización de calcio en osteocitos de ratón durante la carga mecánica. Esta técnica avanza la comprensión de la mecanobiología ósea in vivo.

Un enfoque de imagen intravital fluorescente para estudiar la dinámica de señalización de calcio inducida por la carga en osteocitos de ratón (Video) | JoVE Journal

Un enfoque de imagen intravital fluorescente para estudiar la dinámica de señalización de calcio inducida por la carga en osteocitos de ratón

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