Name: Ligadura de la arteria coronaria izquierda: un modelo murino quirúrgico de infarto de miocardio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-09T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: Aprende la ligadura de la arteria coronaria izquierda en ratones para estudiar el infarto de miocardio. Este modelo quirúrgico permite investigar la fisiopatología y la respuesta inflamatoria postinfarto de forma reproducible.

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Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Instituto Nacional de Salud (R01HL143967, R01HL142629, R01AG069399 y R01DK129339), Premio al Proyecto Transformacional de la AHA (19TPA34910142), Premio al Proyecto Innovador de la AHA (19IPLOI34760566) y Premio al Proyecto de Innovación ALA (IA-629694) (a PD).

El presente protocolo de estudio fue revisado y aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Pittsburgh. Para estos experimentos se utilizaron ocho (falsos n = 4 y MI n = 4) ratones hembra C57BL/6J de 1 año de edad que pesaban entre 24 y 30 g. Aproximadamente el 100% y al menos el 80% de los ratones sobrevivieron en las primeras 24 h y 28 días, respectivamente.
1. Preparación e intubación endotraqueal de los ratones
<ol><li>Precaliente un esterilizador de cuentas (consulte la Tabla de materiales) a 250 °C y coloque instrumentos quirúrgicos esterilizados en autoclave durante unos minutos.</li>
	<li>Anestesiar al ratón en una cámara de inducción con isoflurano al 3% y oxígeno 1 L/min durante 5 min.</li>
	<li>Asegure la profundidad de la anestesia en el ratón comprobando la respuesta a un pellizco firme del dedo del pie.</li>
	<li>Pesar el ratón para estimar la dosis del fármaco analgésico preoperatorio, buprenorfina (0,1 mg/kg). Inyecte el medicamento por vía intraperitonial.</li>
	<li>Recorte el pelaje en el lado izquierdo del tórax con una máquina de afeitar eléctrica.</li>
	<li>Desinfecte el sitio quirúrgico con povidona yodada y etanol al 70% a partir de entonces tres veces.</li>
	<li>Coloque el ratón en posición supina sobre una tabla inclinada. Asegure la cabeza y las extremidades del ratón con una banda elástica unida a los incisivos superiores y cinta adhesiva, respectivamente. Aplique lubricante oftálmico estéril en los ojos para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia.</li>
	<li>Abra la mandíbula y saque suavemente la lengua de la cavidad oral.</li>
	<li>Identifique la abertura de la laringe iluminando la orofaringe con un laringoscopio (consulte la Tabla de materiales).</li>
	<li>Corte aproximadamente 0,5 cm de una aguja de catéter de 24 G e inserte la aguja roma en el protector de plástico. Dirija la aguja roma con el protector de plástico hacia la tráquea. Saque la aguja, dejando el escudo de plástico en la tráquea.</li>
	<li>Ajuste el ventilador (consulte la Tabla de materiales) a una frecuencia respiratoria de 137 latidos por minuto (optimizado para los ratones utilizados en este estudio) y un volumen corriente de 0,18 cc. Conecte los tubos del respirador al protector del catéter y confirme la intubación correcta buscando un movimiento torácico sincronizado con el ventilador.</li>
	<li>Desconecte el tubo del respirador del protector del catéter y coloque al animal en posición supina en una placa quirúrgica precalentada con temperatura controlada. Vuelva a conectar el ratón al ventilador.</li>
</ol>2. Ligadura permanente de la arteria coronaria izquierda
<ol><li>Desinfecte el sitio quirúrgico con povidona yodada y alcohol al 70%. Aplique una cortina estéril que tenga un orificio de un cuarto de tamaño en el centro para asegurar el sitio quirúrgico. Levante suavemente la piel con un par de fórceps y haga una pequeña incisión transversal cutánea (1.5-2 cm) a lo largo de la línea entre los músculos pectorales mayores izquierdos y menores con un par de tijeras quirúrgicas. NOTA: Se utilizaron tijeras para hacer la incisión, ya que proporciona el control requerido sobre la profundidad y la dirección del corte.</li>
	<li>Separe los músculos pectorales subyacentes con fórceps y tijeras de disección. Los músculos se separaron usando retractores unidos a bandas elásticas.</li>
	<li>Haga una incisión en el tercer espacio intercostal con un par de micro tijeras siguiendo el ángulo natural de la caja torácica. En esta fase, se debe tener extrema precaución para evitar lesiones en el corazón y los pulmones.</li>
	<li>Estire suavemente las costillas con retractores para exponer el ventrículo izquierdo. Mueva la grasa pericárdica a un lado y localice el LCA, que se extiende desde el borde de la aurícula izquierda hacia el ápice del corazón.</li>
	<li>Pase un 8-0 sutura de nylon debajo del LCA con la ayuda de un soporte de aguja. Ligue el LCA con un nudo doble seguido de un segundo nudo (un nudo de cirujano modificado). NOTA: El escaldado del ventrículo inferior izquierdo confirma una ligadura exitosa de LCA. Además de esto, también se recomienda la medición de troponina, la monitorización del ECG (elevación del segmento ST), la resonancia magnética cardíaca con eco / in vivo o las imágenes de micro-TC para confirmar las lesiones comparables de IM.</li>
	<li>Retire los retractores e inserte una aguja de catéter de 22 G en la cavidad torácica. Retire la aguja, dejando la punta del protector de plástico en la cavidad torácica. Cierre la caja torácica con una sutura de nylon 4-0.</li>
	<li>Conecte una jeringa al protector de plástico de 22 G y elimine lentamente el exceso de aire atrapado en la cavidad torácica presionando suavemente el tórax para establecer una presión de aire negativa. Retire el protector de plástico.</li>
	<li>Cierre la piel con una sutura de nylon 4-0.</li>
	<li>Apague el suministro de isoflurano. En esta etapa, el ratón está en el ventilador suministrando oxígeno.</li>
</ol>3. Cuidados postoperatorios
<ol><li>Apague el ventilador una vez que comience la respiración espontánea. NOTA: El procedimiento dura unos 30-35 minutos por animal desde la preparación de los ratones hasta este paso.</li>
	<li>Mantenga el ratón bajo una lámpara de calor y contrólelo hasta que esté despierto. El animal no debe dejarse desatendido hasta que haya recuperado suficiente conciencia para mantener la decúbito esternal.</li>
	<li>Después de la cirugía, coloque al animal en una jaula separada y devuélvalo a la jaula original con otros animales solo después de que se recupere por completo.</li>
	<li>Controle el ratón diariamente para detectar cualquier signo de dolor o molestia.</li>
	<li>Continuar la inyección intraperitoneal de buprenorfina (0,1 mg/kg) cada 6-8 horas durante 2 días adicionales después de la cirugía.</li>
</ol>4. Evaluación ecocardiográfica
NOTA: Se realizó ecocardiografía para evaluar los parámetros de insuficiencia cardíaca el día 28 después del IM.
<ol><li>Después de 28 días después de la cirugía, anestesiar a los ratones con isoflurano al 3% y oxígeno 1 L / min, aplicar lubricante oftálmico estéril en los ojos y eliminar el vello del pecho con crema depilatoria. Desinfecte el área del pecho con povidona yodada y etanol al 70% tres veces.</li>
	<li>Asegure los ratones anestesiados encima de la plataforma de imágenes (ver Tabla de materiales) en posición supina y mantenga un nivel constante de anestesia durante todo el procedimiento utilizando un cono nasal conectado al sistema anestésico (1% -2% isoflurano y 1 L / min de oxígeno).</li>
	<li>Pegue las cuatro patas a los electrodos de ECG con gel de electrodo (consulte la Tabla de materiales). Controle la temperatura del animal insertando una sonda rectal (ver Tabla de materiales).</li>
	<li>Aplique el gel de exploración (consulte la Tabla de materiales) en el tórax, coloque el transductor verticalmente, bájelo hasta la línea paraesternal (paralelo al tórax) y gire 35° en sentido contrario a las agujas del reloj para obtener la vista del eje largo paraesternal del ventrículo izquierdo.</li>
	<li>Toque el botón de imágenes en modo B en el software de imágenes (consulte Tabla de materiales) para obtener una vista completa del eje largo del corazón. Ajuste el tamaño y el brillo de la puerta y guarde las imágenes con Guardar clip o Guardar fotograma para mediciones posteriores16.</li>
	<li>Cambie al modo M (modo de movimiento) y coloque el eje del modo M al nivel del músculo papilar. Ajuste el tamaño de la puerta y toque el botón Inicio de modo M. Guarde las imágenes usando Guardar clip o Guardar fotograma16,17.</li>
	<li>Como el proceso de adquisición de imágenes en modo 4D está automatizado, verifique que el ECG y las señales de respiración estén activas (Figura 1) antes de adquirir los datos.</li>
	<li>Comience a adquirir los datos en modo B. Abra el panel de escaneo 4D e inicie el motor 3D. Establezca los parámetros de imagen en el panel de escaneo 4D y toque el botón Escanear para comenzar el escaneo. Después de revisar las imágenes en la vista 2D, cargue las imágenes en modo 4D usando el botón Cargar en 4D .</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen ningún conflicto de intereses que revelar.

El modelo murino de IM está ganando popularidad en los laboratorios de investigación cardiovascular, y este estudio describe un modelo de IM reproducible y clínicamente relevante. Este protocolo mejora el proceso de ligadura de LCA de varias maneras. Para empezar, se evita el uso de anestésicos preoperatorios inyectables como xilazina/ketamina o pentobarbitalsódico 14,15. Sólo se utilizó anestesia con isoflurano, que ayuda a mejorar las tasas de supervivencia ani...

Las enfermedades cardiovasculares son un importante problema de salud pública que se cobra 17,9 millones de vidas cada año, lo que representa el 31 por ciento de la mortalidad mundial1. El tipo más prevalente de anomalía cardiovascular es la enfermedad coronaria, y el infarto de miocardio (IM) es una de las principales manifestaciones de la enfermedad coronaria2. El IM suele ser causado por la oclusión trombótica de una arteria coronaria debido a la ruptura de una placa vulnerable3. La isquemia resultante causa cambios iónicos y metabólicos profundos en el miocardio afectado, así como una rápida disminución de la función sistólica. El IM resulta en la muerte de los cardiomiocitos, lo que puede conducir aún más a la disfunción ventricular y la insuficiencia cardíaca4.
La investigación sobre IM en pacientes es limitada debido a la escasez de tejidos obtenidos de pacientes con IM5. Como tal, los modelos murinos de IM son útiles tanto para estudiar los mecanismos de la enfermedad como para desarrollar posibles objetivos terapéuticos. Los modelos murinos de IM actualmente disponibles incluyen modelos de isquemia irreversible (ACV y métodos de ablación) y modelos de reperfusión (isquemia/reperfusión, I/R)6. La ligadura permanente de la arteria coronaria izquierda (ACV) en ratones es el método más utilizado, e imita la fisiopatología e inmunología del IM en pacientes 7,8,9. El IM permanente también puede ser inducido por métodos de ablación, que implican daño eléctrico o criolesión. Los métodos de ablación son capaces de generar un infarto de tamaño uniforme en la ubicación precisa10. Por otro lado, la formación de cicatrices, la morfología del infarto y los mecanismos de señalización molecular pueden variar entre los métodos de ablación10,11. El método I/R murino es otro modelo importante de IM, ya que representa el escenario clínico de la terapia de reperfusión12. El modelo I/R está asociado con desafíos como un tamaño variable del infarto, dificultad para distinguir las respuestas de la lesión inicial y reperfusión6.
Aunque ampliamente utilizados, los métodos de ligadura LCA están asociados a bajas tasas de supervivencia y dolor postoperatorio13. Este protocolo demuestra el modelo quirúrgico murino de IM de ligadura LCA que implica la preparación e intubación de ratones, ligadura LCA, cuidado postoperatorio y validación de IM. En lugar de utilizar una traqueotomía invasiva14, este método emplea la intubación endotraqueal. El animal es intubado iluminando la orofaringe con un laringoscopio, haciendo el procedimiento más fácil, más seguro y menos traumático15. El ratón se mantiene en el soporte del ventilador y bajo anestesia con isoflurano durante todo el procedimiento. Además, la ecocardiografía y la tinción tricrómica de Masson se realizan para evaluar la función cardíaca y la fibrosis cardíaca después del IM, respectivamente. En general, este método proporciona un modelo murino quirúrgico confiable y reproducible de IM que se puede usar para estudiar la fisiopatología y la inflamación después del IM.

<table><tbody><tr><td>aguja para catéter de 22 G</td><td>Exel INT</td><td>26741</td><td>Toracocentesis</td></tr><tr><td>24 G aguja para catéter</td><td>Exel INT</td><td>26746</td><td>Intubación endotraqueal</td></tr><tr><td>4-0 sutura de nailon</td><td>Covetrus</td><td>29263</td><td>Sutura de músculos y piel</td></tr><tr><td>8-0 sutura de nailon</td><td>S& T</td><td>3192</td><td>Ligadura de LAD</td></tr><tr><td>Vaporizadores anestésicos</td><td>Vet equip</td><td>VE-6047</td><td>Soporte anestésico Monitor</td></tr> de <tr><td>fisiología animal</td><td>Fujifilm</td><td>VEVO 3100</td><td>Monitoriza la frecuencia cardíaca, la frecuencia respiratoria y la temperatura corporal</td></tr><tr><td>Solución de betadine</td><td>PBS animal health</td><td>11205</td><td>Antiespédico</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Covetrus</td><td>55175</td><td>Analgésico</td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>OMANO</td><td>OM2300S-V7</td><td>Binocular</td></tr><tr><td>Maquinilla de afeitar eléctrica</td><td>Wahl</td><td>79300-1001M</td> Gel de electrodo de <td>afeitar</td></tr><tr><td></td><td>Parker Laboratories</td><td>W60698L</td><td>Gel conductor de electricidad</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>22-032-601</td><td></td></tr><tr><td>Pinza</td> desinfectante <td>FST</td><td>11065-07</td><td>Acero inoxidable</td></tr><tr><td></td><td>Gasa Curity</td><td>CAR-6339-PK Lámpara de</td> calor <td>estéril</td></tr><tr><td></td><td>Satco</td><td>S4998</td><td>Cuidados postoperatorios</td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>Kent scientific</td><td>Surgi-M</td><td>Control de temperatura</td></tr><tr><td>Esterilizador de perlas calientes</td><td>Germinator 500</td><td>11503</td><td>Esterilización de instrumental quirúrgico</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covetrus</td><td>29405</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Masson&rsquo; s kit de tinción tricrómica</td><td>Thermoscientific</td><td>87019</td><td>Medición de la fibrosis cardíaca</td></tr><tr><td>Micro portaagujas</td><td>FST</td><td>12500-12</td><td>Acero inoxidable</td></tr><tr><td>Microtijeras</td><td>FST</td><td>15000-02</td><td>Acero inoxidable</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica</td><td>Dechra</td><td>Puralube Vet Lubricante</td><td>ocular estéril</td></tr><tr><td>Gel de escaneo</td><td>Parker Laboratories</td><td>Aquasonic 100</td><td>Gel acuoso de transmisión de ultrasonidos</td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>FST</td><td>14060-11</td><td>Acero inoxidable</td></tr><tr><td>Laringoscopio para animales pequeños</td><td>Penn-Century</td><td>modelo LS-2-M</td><td>Iluminación de la orofaringe</td></tr><tr><td>Ventilador para animales pequeños Aparato</td><td>Harvard</td><td>557058</td><td>Soporte para ventilador Lámpara</td></tr><tr><td>quirúrgica</td><td>Cole parmer</td><td>41723</td><td>Iluminador Ancho (pulgadas): 7</td></tr><tr><td>Plataforma de imagen preclínica Vevo 3100</td><td>Fujifilm</td><td>VEVO 3100</td><td>Ecocardiografía</td></tr><tr><td>VevoLAB Software Fujifilm</td><td></td><td>VevoLAB 3.2.6</td><td>Análisis de datos de ecocardiografía</td></tr></tbody></table>

ligadura de la arteria coronaria izquierda: un modelo murino quirúrgico de infarto de miocardio

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

La cardiopatía isquémica y el posterior infarto de miocardio (IM) es una de las principales causas de mortalidad en los Estados Unidos y en todo el mundo. Para explorar los cambios fisiopatológicos después del infarto de miocardio y diseñar futuros tratamientos, se requieren modelos de investigación de IM. La ligadura permanente de la arteria coronaria izquierda (LCA) en ratones es un modelo popular para investigar la función cardíaca y la remodelación ventricular después del IM. Aquí describimos un modelo de IM murino quirúrgico menos invasivo, confiable y reproducible mediante ligadura permanente del LCA. Nuestro modelo quirúrgico comprende una anestesia general fácilmente reversible, intubación endotraqueal que no requiere una traqueotomía y una toracotomía. Se debe realizar electrocardiografía y medición de troponina para asegurar el IM. La ecocardiografía en el día 28 después del IM discernirá la función cardíaca y los parámetros de insuficiencia cardíaca. El grado de fibrosis cardíaca se puede evaluar mediante la tinción tricrómica de Masson y la resonancia magnética cardíaca. Este modelo de IM es útil para estudiar las alteraciones fisiopatológicas e inmunológicas después del IM.

La Figura 1 muestra el ECG activo representativo y las señales de respiración durante la evaluación ecocardiográfica de ratones simulados (Figura 1A) e IM (Figura 1B). La verificación del ECG activo y las señales de respiración son importantes antes de adquirir los datos ecocardiográficos. La figura 2 muestra la medición ecocardiográfica de los parámetros funcionales cardíacos después ...

Aquí se presenta un procedimiento quirúrgico para la ligadura permanente de la arteria coronaria izquierda en ratones. Este modelo se puede utilizar para investigar la fisiopatología y la respuesta inflamatoria asociada después del infarto de miocardio.

Ligadura de la arteria coronaria izquierda: un modelo murino quirúrgico de infarto de miocardio

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...

El modelo quirúrgico de ligadura permanente de la arteria izquierda en ratones se puede utilizar para investigar la fisiopatología y la respuesta inflamatoria asociada después del infarto de miocardio. Este método proporciona un modelo de ratón confiable y producible de MI, que es fácil, seguro y menos invasivo. Para comenzar, precaliente un esterilizador de cuentas a 250 grados centígrados y coloque instrumentos quirúrgicos esterilizados en autoclave durante unos minutos.Asegure la profundidad de la anestesia en el ratón comprobando la respuesta a un pellizco firme del dedo del pie. Pesar el ratón para estimar la dosis del fármaco analgésico preoperatorio buprenorfina e inyectar el fármaco por vía intraperitoneal. Recorte el pelaje en el lado izquierdo del tórax con una máquina de afeitar eléctrica.Después de desinfectar el sitio quirúrgico, coloque el ratón en posición supina sobre una tabla inclinada. Asegure la cabeza y las extremidades del ratón con una banda elástica unida a los incisivos superiores y cinta adhesiva, respectivamente. Aplique lubricante oftálmico estéril en los ojos para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia.Abra la mandíbula y saque suavemente la le

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video muestra cómo utilizar un modelo rápido y fiable para estudiar los procesos patobiológicas y fisiopatológicos de la isquemia miocárdica.

LAD-Ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio

Numerosas manipulaciones genéticas y / o inyecciones intramiocárdica de genes, proteínas, células, y / o los biomateriales se superponen a la dimensión del tiempo en los estudios de agudos de isquemia / reperfusión y la remodelación crónica en ratones. Este video ilustra los procedimientos de microcirugía de la isquemia / reperfusión, la ligadura permanente de la arteria coronaria, y los estudios de inyección intramiocárdica.

Ligadura de las arterias coronarias y la inyección intramiocárdica en un modelo murino de infarto

El procedimiento quirúrgico utilizado para inducir el infarto de miocardio experimental en ratones comienza con toracotomía izquierda entre la tercera y las costillas cuarta con el fin de visualizar la superficie anterior del corazón y el pulmón izquierdo. La arteria coronaria izquierda se ligó, el pecho se cierra y el ratón se le permite recuperarse de manera espontánea.

Técnica modificada para la ligadura de la arteria coronaria en ratones

En este video, describimos un procedimiento quirúrgico para generar un modelo de ratón de infarto de miocardio mediante la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda.

Generación de un modelo murino de infarto de miocardio: un procedimiento quirúrgico para la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en un modelo de ratón

Se introduce un método quirúrgico para inducir experimental de isquemia / reperfusión (I / R) lesión para simular el infarto de miocardio (MI) en modelos de ratón que permite una mayor claridad en el posicionamiento de la ligadura en la arteria descendente anterior izquierda (LAD) para aumentar la reproducibilidad de experimentos en ratones MI.

Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

La insuficiencia cardíaca es la principal causa de hospitalización y una de las principales causas de mortalidad. Se aplica un modelo de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en ratones para investigar el remodelado ventricular y la disfunción cardíaca después del infarto de miocardio. Se presenta la técnica de mediciones hemodinámicas invasivas en ratones.

La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca

Proporcionamos un método fiable para la ligadura de la arteria descendente anterior izquierda (LAD) en un modelo de ratón. Este método es comparativamente menos invasivo que otros métodos, ya que implica intubación endotraqueal, un abordaje de toracotomía del lado izquierdo y toracocentesis. Este método se puede utilizar como modelo para el infarto de miocardio (IM) agudo y crónico.

Murino descendente anterior (LAD) ligadura de la arteria coronaria: un modelo mejorado y simplificado para el infarto de miocardio

Aquí se describe un procedimiento quirúrgico que muestra cómo lograr la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente izquierda-anterior en ratones. Este modelo es de gran relevancia para investigar la fisiopatología del infarto de miocardio y los procesos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto de miocardio murino usando ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda

En este trabajo describimos un método sencillo y reproducible que puede inducir infarto de miocardio o lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones mediante ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante micromanipulación.

Inducción de infarto de miocardio y lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones

Se describe un modelo altamente reproducible para el infarto de miocardio en ratones con manipulaciones mínimamente invasivas. El modelo se puede realizar fácilmente, lo que resulta en una alta reproducibilidad y tasa de supervivencia. Por lo tanto, el modelo descrito reducirá el número de animales requeridos según lo solicitado por el principio de las 3R (Reemplazo, Refinamiento y Reducción).

Mínimo procedimiento quirúrgico invasivo de inducir infarto de miocardio en ratones

Aprende la ligadura de la arteria coronaria izquierda en ratones para estudiar el infarto de miocardio. Este modelo quirúrgico permite investigar la fisiopatología y la respuesta inflamatoria postinfarto de forma reproducible.

Ligadura de la arteria coronaria izquierda: un modelo murino quirúrgico de infarto de miocardio

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