Evaluación de los efectos tóxicos asociados a las células T del receptor de antígeno quimérico mediante un modelo de ratón de xenoinjerto derivado de pacientes con leucemia linfoblástica aguda

Este protocolo utiliza células tumorales y CAR-T humanas y demuestra con precisión las toxicidades asociadas con la administración de CART19. Por lo tanto, recapitulando lo observado en la clínica. La principal ventaja de utilizar esta plataforma es que proporciona un modelo traducible y clínicamente relevante en el que se utilizan células T humanas y células tumorales.

Este modelo no solo permite una evaluación eficiente de las toxicidades asociadas a CART19, sino que también nos permite comprender mejor cómo podemos superar estas toxicidades a través de mejores estrategias de tratamiento. Para empezar, monitorizar los ratones administrados por CART19 dos veces al día para evaluar cualquier cambio en su bienestar, como debilidad motora, cuerpo encorvado y pérdida de peso corporal. Una vez que los ratones desarrollan debilidad motora y reducción de peso, recolectan su sangre periférica para analizar la carga tumoral.

Y llevar a cabo el aislamiento sérico de citocinas, como se describe en el manuscrito. Después del aislamiento, almacene los tubos de microcentrífuga sérica a 80 grados Celsius y use la cera para analizar las quimiocinas y citocinas utilizando el ensayo multiplex. Para las imágenes por resonancia magnética, mezcle 120 microlitros de gadolinio con 880 microlitros de solución salina y cárguelo en una jeringa de insulina de un mililitro.

Inyectar 100 microlitros de la solución preparada por vía intraperitoneal en cada ratón. Anestesia al ratón y colócalo en la sonda de cuna compatible con roedores. Luego engancha sus dientes en la barra de mordida.

Tire de la cabeza del ratón hacia la bobina de volumen de 25 milímetros y ajuste el cono de la nariz atado al sistema de anestesia de isoflurano. Apriete la perilla de la barra de mordida para mantener la posición durante la exploración. Para la evaluación de la respiración, coloque la sonda de un dispositivo de monitoreo de la respiración cerca del diafragma y asegúrela con cinta quirúrgica.

Mantenga la frecuencia respiratoria entre 20 y 60 respiraciones por minuto para que la condición de los ratones permanezca estable. Inserte la sonda para animales en el orificio pequeño dentro del sistema de resonancia magnética para animales pequeños de orificio vertical y ajuste la cabeza del animal en el centro de la bobina. Usando el bloqueo, asegure el aparato en posición vertical y conecte el instrumento a la computadora.

A continuación, abra el software ParaVision para configurar las posiciones de escaneo y los tipos de escaneos. Determinar las posiciones sagital y axial óptimas manteniéndolas consistentes para todos los grupos experimentales. Para recopilar los datos de la RM ponderada en T1, utilice una secuencia multicorte y multieco ponderada en T1 con un tiempo de repetición de 300 milisegundos, un tiempo de eco de 9,5 milisegundos, un campo de visión de 4,00 X 2,00 X 2,00 centímetros y una matriz de 192 X 96 X 96.

En el caso de las imágenes de resonancia magnética ponderadas en T2, utilice una secuencia de múltiples cortes y ecos con parámetros similares. Una vez que se completen los escaneos, retire la sonda del orificio y extraiga suavemente el ratón quitando los dientes de la barra de mordida. Después de extraer los datos del software, se utilizó un software de análisis para la cuantificación y la representación del volumen en 3D de las regiones de hiperintensidad en las que se compararon las poblaciones de células tumorales CD19+ entre ratones tratados con CART19 y ratones no tratados mediante citometría de flujo.

Se observó una reducción significativa de peso en ratones tratados con células CART19. La pérdida de peso se considera un síntoma de la aparición de CRS, que se relaciona con toxicidades asociadas a células CART. Un ensayo múltiple reveló la expresión de citocinas y quimiocinas en suero de ratones NSG antes y después de la administración de CART19.

Las imágenes ponderadas en T2 revelaron evidencia de edema y posible infiltrado inflamatorio durante la neuroinflamación en ratones tratados con CART19. Mientras que la resonancia magnética ponderada en T1 mostró un realce del contraste dentro del parénquima cerebral, lo que indica un aumento de la permeabilidad vascular. Las reconstrucciones tridimensionales del cerebro de los roedores se ensamblaron en base a las regiones de hiperintensidad T1 correspondientes a la permeabilidad vascular, que hace que el volumen de fuga de gadolinio en el cerebro.

Es importante recordar que la monitorización física diaria de los ratones después de la administración de CART19, junto con la hemorragia periférica, será el mejor indicador para proceder a la resonancia magnética para evaluar completamente cualquier cambio en el cerebro indicativo de SRC o neurotoxicidad. Esta tecnología es ampliamente aplicable a terapias adicionales de células CAR-T y permitirá a los científicos probar de manera eficiente las posibles toxicidades derivadas de las nuevas células CAR-T. Este modelo propuesto es un paso adelante en la comprensión de cómo se pueden monitorear, tratar y utilizar las toxicidades asociadas a las células CAR-T para validar nuevos modelos de células CAR-T.