Name: Protección de las células miocárdicas H9c2 del estrés oxidativo por crocetina a través de la mitofagia mediada por la vía PINK1 / Parkin (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Aprende cómo la crocetina protege las células miocárdicas H9c2 del estrés oxidativo mediante la mitofagia activada por la vía PINK1/Parkin. Este método revela mecanismos cardioprotectores clave.

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Este estudio fue apoyado por la Fundación de Ciencias Naturales de Beijing (No. 7202119) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 82274380).

Los experimentos se realizaron en el Laboratorio de Fisiología de la Universidad de Medicina China de Beijing, China. Todos los métodos de estudio se realizaron de acuerdo con las directrices y regulaciones pertinentes de la Universidad de Beijing.
1. Cultivo celular
<ol><li>Agregue 10% de suero bovino fetal y 1% de penicilina/estreptomicina al medio básico Eagle medium (DMEM) modificado de Dulbecco (con 4.5 g/L de D-glucosa, 4.g.g/L de L-glutamina y 110 mg/L de piruvato de sodio; ver Tabla de materiales) para preparar el medio completo DMEM.</li>
	<li>Descongele las células miocárdicas H9c2 congeladas con nitrógeno líquido (consulte la Tabla de materiales) en agua tibia a 37 °C con una agitación rápida y uniforme hasta que el hielo se derrita.</li>
	<li>Transfiera las células a un tubo de centrífuga y agregue cuatro veces el volumen del medio completo DMEM. Centrifugar a 358 x g durante 5 min a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante con una pipeta.</li>
	<li>Diluir la suspensión celular obtenida con medio de cultivo, soplar suavemente e inocular las células en un matraz de cultivo. Cultivo en incubadora a 37 °C con 5% deCO2.</li>
</ol>2. Determinación de la viabilidad celular
<ol><li>Disuelva la crocetina (consulte la Tabla de materiales) en dimetilsulfóxido (DMSO) a concentraciones de 0.05 mM, 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, 5 mM, 10 mM, 50 mM, 100 mM y 200 mM.</li>
	<li>Disociar las células miocárdicas H9c2 por tripsina, luego neutralizar la mezcla con medio completo DMEM.</li>
	<li>Transfiera las células a un tubo de centrífuga y centrifugar a 179 x g durante 5 minutos a temperatura ambiente. Deseche el sobrenadante y mezcle las células en el medio completo DMEM soplando suavemente.</li>
	<li>Contar las células usando una placa de conteo de células sanguíneas22 (ver Tabla de materiales) y diluirlas a 5 × 104 células/ml con medio completo DMEM.</li>
	<li>Divide las celdas en nueve porciones iguales. Agregue DMSO (diluido en una proporción de 1:1,000 con medio completo DMEM) al grupo control y agregue diferentes concentraciones de crocetina a los grupos restantes en una proporción de 1:1,000.</li>
	<li>Sembrar las células en placas de 96 pocillos a 100 μL por pocillo. Desechar el sobrenadante después de la incubación durante 24 h y lavar las células tres veces con PBS.</li>
	<li>Después de agregar 100 μL de medio basal DMEM, incubar las células durante 4 h y agregar 20 μL de MTS (ver Tabla de materiales).</li>
	<li>Incubar las células durante otras 2 h, medir la absorbancia a una longitud de onda de 490 nm y calcular la viabilidad celular. NOTA: Viabilidad celular = (OD tratado - OD en blanco) / (control de OD - OD en blanco) × 100.</li>
</ol>3. Determinación de lactato deshidrogenasa (LDH), creatina quinasa (CK), malondialdehído (MDA), superóxido dismutasa (SOD), glutatión peroxidasa (GSH Px) y catalasa (CAT)
<ol><li>Sembrar las células H9c2 en una placa de 6 pocillos a una densidad de 1 × 105 células. Recoja el sobrenadante después de la intervención y detecte los niveles de LDH y SOD, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (ver Tabla de materiales).</li>
	<li>Recoja el sobrenadante y lávelo con solución salina tamponada con fosfato (PBS) una vez. Agregue el lisado celular a la placa de cultivo y déjelo reposar en hielo durante 20 minutos. Recoja el líquido de la placa de cultivo en un tubo de centrífuga.</li>
	<li>Detecte los niveles de CK, MDA, GSH-Px y CAT de acuerdo con las instrucciones del fabricante23 (consulte la Tabla de materiales y el archivo complementario 1).</li>
	<li>Detectar la concentración total de proteínas de la lisis mediante el método de ácido bicinchonínico (BCA) para corregir la concentración de CK, MDA, GSH-Px y CAT24 (ver Tabla de materiales).</li>
</ol>4. Determinación de ROS
<ol><li>Sembrar las células H9c2 en una placa de 48 pocillos a una densidad de 5 × 103 células. Diluir DCFH-DA (ver Tabla de materiales) en una proporción de 1:1,000 con el medio libre de suero. Deseche el sobrenadante celular y lave la célula dos veces con un medio sin suero.</li>
	<li>Añadir 150 μL de DCFH-DA diluido en cada pocillo e incubar a 37 °C durante 20 min. Lave las células tres veces con un medio sin suero y capture imágenes bajo un microscopio de fluorescencia (consulte la Tabla de materiales).</li>
</ol>5. Detección del potencial de membrana mitocondrial
<ol><li>Detectar el potencial de membrana mitocondrial utilizando un kit de ensayo de potencial de membrana mitocondrialJC-1 25 (ver Tabla de materiales). Deseche el medio de cultivo y lávelos una vez con un medio sin suero.</li>
	<li>Agregue una solución de trabajo JC-1 a cada tubo y mézclelos bien. Incubar a 37 °C durante 20 min y lavar las células dos veces con tampón de tinción JC-1. Agregue un medio completo a cada pocillo y capture fotografías bajo un microscopio de fluorescencia.</li>
</ol>6. Ensayo de tinción TUNEL
<ol><li>Utilice un kit de ensayo de apoptosis TUNEL (ver Tabla de materiales) para determinar las tasas de apoptosis26. Deseche el sobrenadante y lave el pellet una vez con un medio sin suero.</li>
	<li>Agregue la solución de fijación celular y lávelas con PBS una vez después de incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos.</li>
	<li>Agregue tritón-100 al 0,3% a cada pocillo e incube a temperatura ambiente durante 5 min. Lave las celdas con PBS dos veces. Añadir la solución de trabajo de detección TUNEL e incubar a 37 °C en la oscuridad durante 60 min.</li>
	<li>Agregue una tableta de sellado antifluorescencia que contenga 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; consulte la Tabla de materiales) y capture fotografías bajo un microscopio de fluorescencia.</li>
</ol>7. Monitorización del flujo autofágico por transfección del adenovirus mCherry GFP-LC3B
<ol><li>Reemplace la mitad del medio en cada pocillo con medio fresco. Agregue el adenovirus Ad-mCherry GFP-LC3B (multiplicidad de infección [MOI] de 2) al medio de cultivo y agregue 5 μg/ml de porodeno (consulte la Tabla de materiales) para mejorar la eficiencia de la infección.</li>
	<li>Reemplace el medio fresco después de 24 h y observe la expresión de la proteína fluorescente bajo un microscopio confocal.</li>
	<li>Cultivar las células con las mismas condiciones que la sección 1 después de confirmar el éxito de la infección viral y capturar imágenes bajo el microscopio confocal27. NOTA: Más del 20% de las células mostraron fluorescencia de proteína fluorescente verde (GFP), lo que indica una infección exitosa.</li>
</ol>8. Análisis de Western blot
<ol><li>Recoja células para la extracción de proteínas enteras y líselas (RIPA, inhibidor de la proteasa e inhibidor de la fosfatasa = 100: 1: 1; consulte la Tabla de materiales) en hielo durante 30 minutos.</li>
	<li>Agregue 5x tampón de carga de proteínas a la muestra de proteína después de la cuantificación de proteínas y hierva las muestras durante 10 minutos.</li>
	<li>Electroforese las muestras que contienen cantidades iguales de proteína con geles de electroforesis en gel de poliacrilamida dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE)28. Luego, transfiera las muestras a membranas de difluoruro de polivinilideno (PVDF).</li>
	<li>Bloquear las membranas de PVDF durante 1 h con leche desnatada en polvo al 5% e incubar con el anticuerpo primario (PINK1, Parkin; ver Tabla de materiales) a 4 °C durante la noche y el anticuerpo secundario a temperatura ambiente durante 1 h.</li>
	<li>Detecte las bandas objetivo utilizando la solución de quimioluminiscencia mejorada (ECL) y el sistema de detección de quimioluminiscencia. Utilice el software Image J para cuantificar las bandas mediante densitometría28.</li>
</ol>9. Detección de la translocación mitocondrial de Parkin por inmunofluorescencia
<ol><li>Observar la colocalización de Parkin con mitocondrias mediante tinción de doble inmunofluorescencia. Deseche el sobrenadante celular de cada grupo y lávelos tres veces con PBS.</li>
	<li>Fije las células durante 10 minutos a temperatura ambiente con paraformaldehído al 4% y agregue tritón-100 al 0,1% en PBS.</li>
	<li>Bloquear con solución de bloque libre de animales (ver Tabla de materiales) durante 1 h para evitar la unión no específica entre proteínas y anticuerpos y reducir el fondo de fluorescencia.</li>
	<li>Incubar con un anticuerpo primario (Parkin y Tom20; ver Tabla de materiales) a 4 °C durante la noche.</li>
	<li>Añadir un anticuerpo secundario fluorescente (ver Tabla de materiales) e incubar en la oscuridad durante 1 h.</li>
	<li>Agregue las tabletas antifluorescentes que contienen DAPI y capture imágenes bajo el microscopio confocal.</li>
</ol>10. Análisis estadístico
<ol><li>Realice análisis estadísticos utilizando software de gráficos y análisis (consulte la Tabla de materiales).</li>
	<li>Compare variables continuas entre grupos utilizando ANOVA unidireccional. p < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.</li>
</ol>

<ol><li>Anderson, J. L., Morrow, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute myocardial infarction.</a> The New England Journal of Medicine. 376 (21), 2053-2064 (2017).</li>
<li>Samsky, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiogenic+shock+after+acute+myocardial+infarction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Cardiogenic shock after acute myocardial infarction: a review.</a> JAMA. 326 (18), 1840-1850 (2021).</li>
<li>Abbate, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+cardiac+remodeling+benefits+in+patients+undergoing+late+percutaneous+coronary+intervention+of+the+infarct-related+artery%3A+evidence+from+a+meta-analysis+of+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Survival and cardiac remodeling benefits in patients undergoing late percutaneous coronary intervention of the infarct-related artery: evidence from a meta-analysis of randomized controlled trials.</a> Journal of the American College of Cardiology. 51 (9), 956-964 (2008).</li>
<li>Santoro, G. M., Carrabba, N., Migliorini, A., Parodi, G., Valenti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+heart+failure+in+patients+with+acute+myocardial+infarction+treated+with+primary+percutaneous+coronary+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Acute heart failure in patients with acute myocardial infarction treated with primary percutaneous coronary intervention.</a> European Journal of Heart Failure. 10 (8), 780-785 (2008).</li>
<li>Dhruva, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+use+of+an+intravascular+microaxial+left+ventricular+assist+device+vs+intra-aortic+balloon+pump+with+in-hospital+mortality+and+major+bleeding+among+patients+with+acute+myocardial+infarction+complicated+by+cardiogenic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Association of use of an intravascular microaxial left ventricular assist device vs intra-aortic balloon pump with in-hospital mortality and major bleeding among patients with acute myocardial infarction complicated by cardiogenic shock.</a> JAMA. 323 (8), 734-745 (2020).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+associated+with+major+cardiovascular+events+1+year+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Network+Open%22%5BJournal%5D)">Risk factors associated with major cardiovascular events 1 year after acute myocardial infarction.</a> JAMA Network Open. 1 (4), e181079(2018).</li>
<li>Jou, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+protects+against+common+deletion+of+mitochondrial+DNA-augmented+mitochondrial+oxidative+stress+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pineal+Research%22%5BJournal%5D)">Melatonin protects against common deletion of mitochondrial DNA-augmented mitochondrial oxidative stress and apoptosis.</a> Journal of Pineal Research. 43 (4), 389-403 (2007).</li>
<li>La Piana, G., Fransvea, E., Marzulli, D., Lofrumento, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+membrane+potential+supported+by+exogenous+cytochrome+c+oxidation+mimics+the+early+stages+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial membrane potential supported by exogenous cytochrome c oxidation mimics the early stages of apoptosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 246 (2), 556-561 (1998).</li>
<li>De Filippo, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+secondary+prevention+medical+therapies+on+outcomes+of+patients+suffering+from+Myocardial+Infarction+with+NonObstructive+Coronary+Artery+disease+%28MINOCA%29%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Impact of secondary prevention medical therapies on outcomes of patients suffering from Myocardial Infarction with NonObstructive Coronary Artery disease (MINOCA): A meta-analysis.</a> International Journal of Cardiology. 368, 1-9 (2022).</li>
<li>Davidson, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multitarget+strategies+to+reduce+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury%3A+JACC+review+topic+of+the+week%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Multitarget strategies to reduce myocardial ischemia/reperfusion injury: JACC review topic of the week.</a> Journal of the American College of Cardiology. 73 (1), 89-99 (2019).</li>
<li>Caricati-Neto, A., Errante, P. R., Menezes-Rodrigues, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+pharmacological+and+non-pharmacological+strategies+of+cardioprotection%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Recent advances in pharmacological and non-pharmacological strategies of cardioprotection.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (16), 4002(2019).</li>
<li>Chen, G. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology+analysis+and+experimental+validation+to+investigate+the+mechanism+of+total+flavonoids+of+rhizoma+drynariae+in+treating+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design%2C+Development%2C+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of rhizoma drynariae in treating rheumatoid arthritis.</a> Drug Design, Development, and Therapy. 16, 1743-1766 (2022).</li>
<li>Wei, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+Chinese+medicine+has+great+potential+as+candidate+drugs+for+lung+cancer%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 300, 115748(2023).</li>
<li>Zhi, W., Liu, Y., Wang, X., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+of+traditional+Chinese+medicine+for+the+prevention+and+treatment+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Recent advances of traditional Chinese medicine for the prevention and treatment of atherosclerosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 301, 115749(2023).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertensive+heart+disease+and+myocardial+fibrosis%3A+How+traditional+Chinese+medicine+can+help+addressing+unmet+therapeutical+needs%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Hypertensive heart disease and myocardial fibrosis: How traditional Chinese medicine can help addressing unmet therapeutical needs.</a> Pharmacological Research. 185, 106515(2022).</li>
<li>Zhang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+Chinese+medicine+intervenes+ventricular+remodeling+following+acute+myocardial+infarction%3A+evidence+from+40+random+controlled+trials+with+3%2C659+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Traditional Chinese medicine intervenes ventricular remodeling following acute myocardial infarction: evidence from 40 random controlled trials with 3,659 subjects.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 707394(2021).</li>
<li>Hao, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+Chinese+medicine+for+cardiovascular+disease%3A+evidence+and+potential+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Traditional Chinese medicine for cardiovascular disease: evidence and potential mechanisms.</a> Journal of the American College of Cardiology. 69 (24), 2952-2966 (2017).</li>
<li>Delgado-Montero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+stasis+imaging+predicts+cerebral+microembolism+during+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Blood stasis imaging predicts cerebral microembolism during acute myocardial infarction.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 33 (3), 389-398 (2020).</li>
<li>Lu, C. Y., Lu, P. C., Chen, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilization+trends+in+traditional+Chinese+medicine+for+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Utilization trends in traditional Chinese medicine for acute myocardial infarction.</a> Journal of Ethnopharmacology. 241, 112010(2019).</li>
<li>Gao, Z. Y., Xu, H., Shi, D. Z., Wen, C., Liu, B. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+on+outcome+of+5284+patients+with+coronary+artery+disease%3A+the+role+of+integrative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Analysis on outcome of 5284 patients with coronary artery disease: the role of integrative medicine.</a> Journal of Ethnopharmacology. 141 (2), 578-583 (2012).</li>
<li>Huang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crocetin+ester+improves+myocardial+ischemia+via+Rho%2FROCK%2FNF-kappaB+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Crocetin ester improves myocardial ischemia via Rho/ROCK/NF-kappaB pathway.</a> International Immunopharmacology. 38, 186-193 (2016).</li>
<li>Green, M. R., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+cell+number+by+hemocytometry+counting%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Estimation of cell number by hemocytometry counting.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2019 (11), (2019).</li>
<li>Zeng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+potential+value+and+mechanism+of+Kaji-Ichigoside+F1+on+arsenite-induced+skin+cell+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidative+Medicine+and+Cellular+Longevity%22%5BJournal%5D)">Assessing the potential value and mechanism of Kaji-Ichigoside F1 on arsenite-induced skin cell senescence.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2022, 9574473(2022).</li>
<li>Chazotte, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+mitochondria+with+JC-1%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Labeling mitochondria with JC-1.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (9), (2011).</li>
<li>Kyrylkova, K., Kyryachenko, S., Leid, M., Kioussi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+apoptosis+by+TUNEL+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Detection of apoptosis by TUNEL assay.</a> Methods in Molecular Biology. 887, 41-47 (2012).</li>
<li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitate+impairs+the+autophagic+flux+to+induce+p62-dependent+apoptosis+through+the+upregulation+of+CYLD+in+NRCMs%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Palmitate impairs the autophagic flux to induce p62-dependent apoptosis through the upregulation of CYLD in NRCMs.</a> Toxicology. 465, 153032(2022).</li>
<li>Kurien, B. T., Scofield, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blotting%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Western blotting.</a> Methods. 38 (4), 283-293 (2006).</li>
<li>Chen, G. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+flavonoids+of+rhizoma+drynariae+restore+the+MMP%2FTIMP+balance+in+models+of+osteoarthritis+by+inhibiting+the+activation+of+the+NF-%CE%BAB+and+PI3K%2FAKT+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Total flavonoids of rhizoma drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-κB and PI3K/AKT pathways.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 6634837(2021).</li>
<li>Amin, A., Hamza, A. A., Bajbouj, K., Ashraf, S. S., Daoud, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saffron%3A+a+potential+candidate+for+a+novel+anticancer+drug+against+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Saffron: a potential candidate for a novel anticancer drug against hepatocellular carcinoma.</a> Hepatology. 54 (3), 857-867 (2011).</li>
<li>Kamalipour, M., Akhondzadeh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+effects+of+saffron%3A+an+evidence-based+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Tehran+Heart+Center%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular effects of saffron: an evidence-based review.</a> The Journal of Tehran Heart Center. 6 (2), 59-61 (2011).</li>
<li>Mani, V., Lee, S. K., Yeo, Y., Hahn, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+metabolic+perspective+and+opportunities+in+pharmacologically+important+safflower%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolites%22%5BJournal%5D)">A metabolic perspective and opportunities in pharmacologically important safflower.</a> Metabolites. 10 (6), 253(2020).</li>
<li>Broadhead, G. K., Chang, A., Grigg, J., McCluskey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+saffron+supplementation%3A+current+clinical+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Food+Science+and+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of saffron supplementation: current clinical findings.</a> Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 56 (16), 2767-2776 (2016).</li>
<li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insight+into+the+protective+effect+of+salidroside+against+H2O2-induced+injury+in+H9C2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidative+Medicine+and+Cellular+Longevity%22%5BJournal%5D)">Insight into the protective effect of salidroside against H2O2-induced injury in H9C2 cells.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 1060271(2021).</li>
<li>Chen, G. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+rhizoma+drynariae+targets+in+the+treatment+of+osteoarthritis+based+on+network+pharmacology+and+experimental+verification%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Prediction of rhizoma drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 5233462(2021).</li>
<li>Reers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+membrane+potential+monitored+by+JC-1+dye%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial membrane potential monitored by JC-1 dye.</a> Methods in Enzymology. 260, 406-417 (1995).</li>
<li>Radovits, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28ADP-ribose%29+polymerase+inhibition+improves+endothelial+dysfunction+induced+by+reactive+oxidant+hydrogen+peroxide+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Poly(ADP-ribose) polymerase inhibition improves endothelial dysfunction induced by reactive oxidant hydrogen peroxide in vitro.</a> European Journal of Pharmacology. 564 (1-3), 158-166 (2007).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interdependence+of+parkin-mediated+mitophagy+and+mitochondrial+fission+in+adult+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Interdependence of parkin-mediated mitophagy and mitochondrial fission in adult mouse hearts.</a> Circulation Research. 117 (4), 346-351 (2015).</li>
<li>Gan, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+mechanism+of+PINK1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Activation mechanism of PINK1.</a> Nature. 602 (7896), 328-335 (2022).</li>
<li>Nguyen, T. N., Padman, B. S., Lazarou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deciphering+the+molecular+signals+of+PINK1%2FParkin+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Deciphering the molecular signals of PINK1/Parkin mitophagy.</a> Trends in Cell Biology. 26 (10), 733-744 (2016).</li>
<li>Yamada, T., Dawson, T. M., Yanagawa, T., Iijima, M., Sesaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SQSTM1%2Fp62+promotes+mitochondrial+ubiquitination+independently+of+PINK1+and+PRKN%2Fparkin+in+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">SQSTM1/p62 promotes mitochondrial ubiquitination independently of PINK1 and PRKN/parkin in mitophagy.</a> Autophagy. 15 (11), 2012-2018 (2019).</li>
<li>Klionsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+assays+for+monitoring+autophagy+%284th+edition%29%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (4th edition).</a> Autophagy. 17 (1), 1(2021).</li>
</ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.

La exploración de ingredientes efectivos a partir de compuestos complejos de medicamentos naturales a través de tecnología avanzada ha sido un punto caliente de la investigación de la MTC29, y puede proporcionar evidencia de laboratorio para el desarrollo futuro de medicamentos después de la verificación. El cártamo es un fármaco representativo en el tratamiento de "promover la circulación sanguínea y minimizar la estasis sanguínea" y es ampliamente utilizado en el tratamiento del infarto de mioca...

El infarto agudo de miocardio (IAM) es una necrosis miocárdica potencialmente mortal causada por isquemia e hipoxia graves y persistentes en las arterias coronarias 1,2. La intervención coronaria percutánea (ICP) es una de las estrategias terapéuticas de primera línea para el IAM, y generalmente protege a los cardiomiocitos del daño isquémico 3,4. El miocardio distal carecerá de suministro de sangre y oxígeno si no se trata con prontitud y eficacia después del IAM, lo que conduce a necrosis isquémica y complicaciones cardiovasculares adicionales 5,6. Promover la recuperación de cardiomiocitos y minimizar el daño miocárdico irreversible después de perder la oportunidad quirúrgica de ICP ha sido un punto caliente de investigación. Después del IAM, los cardiomiocitos se encuentran en un estado de isquemia e hipoxia, lo que resulta en la inhibición de la fosforilación oxidativa mitocondrial, la reducción de NAD + a NADPH y el aumento de la reducción de un solo electrón7. Como resultado, la reacción de reducción incompleta del oxígeno genera un exceso de especies reactivas de oxígeno (ROS) y, en última instancia, conduce al daño por estrés oxidativo de los cardiomiocitos8. Una acumulación excesiva de ROS desencadena la peroxidación lipídica, alterando aún más la estructura y función de las membranas mitocondriales. El resultado es una apertura continua de los poros de transición de permeabilidad mitocondrial y una disminución del potencial de la membrana mitocondrial, induciendo apoptosis y necrosis.
Los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), los bloqueadores de los receptores de angiotensina (BRA), los inhibidores de los β receptores adrenérgicos, los antagonistas de la aldosterona y otros fármacos estándar en el IAM pueden ayudar a mejorar la función cardíaca después del infarto de miocardio y prevenir la aparición de eventos malignos, como arritmias y remodelación ventricular izquierda9. Sin embargo, la supervivencia y el pronóstico postinfarto se ven muy afectados por el tamaño del infarto, y no se han logrado resultados satisfactorios para reducir la apoptosis cardiomiocitaria10,11. Por lo tanto, el desarrollo de fármacos para promover la recuperación de los cardiomiocitos después del infarto de miocardio se ha convertido en un tema urgente.
La medicina tradicional ha sido una fuente de inspiración para la investigación farmacéutica moderna durante muchos años12,13,14,15. La medicina tradicional china (MTC) tiene una larga historia en el tratamiento del IAM, y una serie de ensayos controlados aleatorios en los últimos años han confirmado que la MTC puede mejorar el pronóstico de los pacientes16,17. De acuerdo con la teoría de la MTC, el IAM es causado por la estasis sanguínea18,19, por lo que los medicamentos para promover la circulación sanguínea se utilizan generalmente para el tratamiento del IAM en la fase aguda20. Entre ellos, se cree que el azafrán tiene un poderoso efecto sobre la activación y la estasis de la sangre, y se usa a menudo en el tratamiento agudo del IAM. La crocetina, un componente importante del azafrán, puede desempeñar un papel clave en la protección de los cardiomiocitos21.
En este estudio, las células miocárdicas H9c2 fueron inducidas porH2O2para simular isquemia/reperfusión miocárdica, que causa una lesión cardiomiocitaria del IAM, y la crocetina se utilizó como una intervención para investigar su efecto protector contra la lesión miocárdica inducida por el estrés oxidativo. El mecanismo de crocetina que protege a los cardiomiocitos se exploró más a fondo a través de la mitofagia. Más importante aún, este artículo proporciona una referencia para el enfoque técnico para el estudio de la mitofagia y describe todo el procedimiento experimental en detalle.

<table><tbody><tr><td>0,25% tripsina</td><td>Gibco</td><td>2323363</td><td></td></tr><tr><td>1% Penicilina-estreptomicina</td><td>Sigma</td><td>V900929</td><td></td></tr><tr><td>5x tampón de carga de proteínas</td><td>Beijing Pulilai Gene Technology</td><td>B1030-5</td><td></td></tr><tr><td>Ad-mCherry GFP-LC3B adenovirus</td><td>Beyotime</td><td>C3011</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488-conjugado cabra anti-conejo IgG (H+L)&nbsp;</td><td>Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd.</td><td>ZF-0514</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594-conjugado cabra anti-ratón IgG (H + L)</td><td>Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd.</td><td>ZF-0513</td><td></td></tr><tr><td>Solución bloqueante sin animales</td><td>CST</td><td>15019s</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-parkina</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-32282</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-PINK1</td><td>ABclonal</td><td>A11435</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-TOM20</td><td>ABclonal</td><td>A19403</td><td></td></tr><tr><td>Anti-&beta;-actina&nbsp; anticuerpo</td><td>ABclonal</td><td>AC026</td><td></td></tr><tr><td>kit de ensayo de proteínas BCA</td><td>KeyGEN Biotech</td><td>KGP902</td><td></td></tr><tr><td>Placa de recuento de glóbulos</td> sanguíneos <td>Servicebio</td><td>WG607</td><td></td></tr><tr><td>Kits de ensayo CAT</td> Instituto de <td>Bioingeniería de Nanjing Jiancheng</td><td>A007-1-1</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de detección de quimioluminiscencia</td><td>Shanghai Qinxiang Fábrica de instrumentos científicos</td><td>ChemiScope 6100</td><td></td></tr><tr><td>CK kits de ensayo</td><td>Nanjing Jiancheng Instituto de Bioingeniería</td><td>A032-1-1</td><td></td></tr><tr><td>Coenzima Q10 (CoQ 10)</td><td>Macklin</td><td>C6129</td><td></td></tr><tr><td>Crocetina</td><td>Chengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd.</td><td>RFS-Z01802006012</td><td></td></tr><tr><td>Tabletas de enfriamiento antifluorescente que contienen DAPI</td><td>Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd.</td><td>ZLI-9557</td><td></td></tr><tr><td>DCFH-DA</td><td>Beyotime</td><td>S0033S</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Solarbio</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Medio de águila modificado de Dulbecco (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>8122091</td><td></td></tr><tr><td>solución de quimioluminiscencia mejorada (ECL)</td><td>NCM Biotech</td><td>P10100</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Corning-Cellgro</td><td>35-081-CV</td><td></td></tr><tr><td>Prisma GraphPad 7.0&nbsp;</td><td>https://www.graphpad.com/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Kits de ensayo GSH-Px</td><td>Nanjing Jiancheng Instituto de Bioingeniería</td><td>A005-1-2</td><td></td></tr><tr><td>H9c2 células miocárdicas</td><td>Beijing Dingguochangsheng Biotech Co., Ltd.</td><td>CS0062</td><td></td></tr><tr><td>Peroxidasa de rábano picante (HRP)-anti-cabra conjugada IgG (H + L) &nbsp;</td><td>Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd.</td><td>ZB-2305</td><td></td></tr><tr><td>Peroxidasa de rábano picante (HRP)-conjugada de cabra anti-ratón IgG (H + L) &nbsp;</td><td>Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd.</td><td>ZB-2301</td><td></td></tr><tr><td>JC-1 JC-1 kit de ensayo de potencial de membrana mitocondrial</td><td>LABLEAD</td><td>J22202</td><td></td></tr><tr><td>Kits de ensayo LDH</td><td>Instituto de Bioingeniería de Nanjing Jiancheng</td><td>A020-2-2</td><td></td></tr><tr><td>MDA kit de ensayo</td><td>Nanjing Jiancheng Instituto de Bioingeniería</td><td>A003-2-2</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Aladdin</td><td>A2114057</td><td></td></tr><tr><td>Ensayo MTS</td><td>Promega</td><td>G3581</td><td></td></tr><tr><td>Perhydrol</td><td>G-clon</td><td>CS7730</td><td></td></tr><tr><td>Inhibidor de la fosfatasa</td><td>CWBIO</td><td>CW2383</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Beyotime</td><td>C0351</td><td></td></tr><tr><td>Membranas de difluoruro de polivinilideno (PVDF)</td><td>Millipore</td><td>ISEQ00010</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de lisis del ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA)</td><td>Solarbio</td><td>R0010</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE geles Shanghai</td><td>Epizyme Biomedical Technology</td><td>PG112</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE tampón de funcionamiento</td><td>en polvo Servicebio</td><td>G2018-1L</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE polvo tampón de transferencia</td><td>Servicebio</td><td>G2017-1L</td><td></td></tr><tr><td>Kits de ensayo SOD</td><td>Nanjing Jiancheng Instituto de Bioingeniería</td><td>A001-2-2</td><td></td></tr><tr><td>Polvo de solución salina tamponado Tris</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>SLCC9172</td><td></td></tr><tr><td>TUNEL, kit de ensayo de apoptosis</td><td>Beyotime</td><td>C1086</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Solarbio</td><td>T8220</td><td></td></tr></tbody></table>

protección de las células miocárdicas h9c2 del estrés oxidativo por crocetina a través de la mitofagia mediada por la vía pink1 / parkin

Protection of H9c2 Myocardial Cells from Oxidative Stress by Crocetin via PINK1/Parkin Pathway-Mediated Mitophagy

Este estudio tuvo como objetivo explorar el efecto protector del estrés oxidativo de la crocetina en las células miocárdicas H9c2 mediadas porH2O2 a través de experimentos in vitro, y explorar más a fondo si su mecanismo está relacionado con el impacto de la mitofagia. Este estudio también tuvo como objetivo demostrar el efecto terapéutico del ácido cártamo sobre el estrés oxidativo en cardiomiocitos y explorar si su mecanismo está relacionado con el efecto de la mitofagia. Aquí, se construyó un modelo de estrés oxidativo basado enH2O2y se evaluó el grado de lesión por estrés oxidativo de los cardiomiocitos mediante la detección de los niveles de lactato deshidrogenasa (LDH), creatina quinasa (CK), malondialdehído (MDA), superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GSH Px). Se emplearon colorantes fluorescentes detectores de especies reactivas de oxígeno (ROS) DCFH-DA, colorante JC-1 y colorante TUNEL para evaluar el daño mitocondrial y la apoptosis. El flujo autofágico se midió mediante la transfección de adenovirus Ad-mCherry-GFP-LC3B. Las proteínas relacionadas con la mitofagia se detectaron a través de Western blot e inmunofluorescencia. Sin embargo, la crocetina (0,1-10 μM) podría mejorar significativamente la viabilidad celular y reducir la apoptosis y el daño por estrés oxidativo causado porH2O2. En células con activación autofágica excesiva, la crocetina también podría reducir el flujo de autofagia y la expresión de proteínas relacionadas con la mitofagia PINK1 y Parkin, y revertir la transferencia de Parkin a las mitocondrias. La crocetina podría reducir el daño por estrés oxidativo mediado porH2O2y la apoptosis de las célulasH9c2, y su mecanismo estaba estrechamente relacionado con la mitofagia.

Efectos de la crocetina sobre la viabilidad celular La crocetina a 0,1 μM, 0,5 μM, 1 μM, 5 μM, 10 μM, 50 μM y 100 μM tuvo un efecto proliferativo significativo en las células, mientras que la crocetina en concentraciones superiores a 200 μM inhibió significativamente la proliferación de células H9c2 (Figura 1A). Después de 4 h de tratamiento con 400 μMH2O2, la viabilidad celular se redujo considerablemente, y la crocetina pudo revertir este cambio en...

Basado en experimentos in vitro , este estudio reveló el mecanismo de la crocetina en la reparación del daño por estrés oxidativo de los cardiomiocitos al influir en la mitofagia, en la que la vía de señalización PINK1 / Parkin juega un papel importante.

Protección de las células miocárdicas H9c2 del estrés oxidativo por crocetina a través de la mitofagia mediada por la vía PINK1 / Parkin

This study aimed to explore the oxidative stress-protective effect of crocetin on H2O2-mediated H9c2 myocardial cells through in vitro experiments, and ...

Este protocolo proporciona una referencia para el enfoque técnico para el estudio de autófagos y describe todos los procedimientos experimentales en detalle. La principal ventaja de esta técnica es que permite la observación de la longitud del cambio en el flujo autofágico. Antes de comenzar el experimento, determine la concentración efectiva de infección y tome las medidas de seguridad necesarias.Comience centrifugando células miocárdicas H9C2 neutralizadas a 179 G durante cinco minutos a temperatura ambiente. Deseche el sobrenadante y mezcle las células en el medio completo DMEM soplando suavemente. Divide las celdas en nueve proporciones iguales.Agregue dimetilsulfóxido al grupo de control. Luego, agregue concentraciones variables de crocetina a los grupos restantes. Sembrar 100 microlitros de células por pocillo en una placa de 96 pocillos.Una vez incubado durante 24 horas, desechar el sobrenadante. Luego, lave las celdas tres veces con PBS. Agregue 100 microlitros de medio basal DMEM a cada pocillo e incube las células durante cuatro horas a 37 grados centígrados.Ahora, agregue 20 microlitros de MTS e incube durante otras dos horas como se demostró. Finalmente, medir la absorb

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Los fibroblastos de pacientes portadores de mutaciones causantes de la enfermedad en el Parkinson genes representan un fácil...

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Aquí, describimos en detalle un enfoque de microscopía de video de lapso de tiempo para medir el reclutamiento temporal de EYFP-Parkin durante la eliminación selectiva de mitocondrias dañadas. Este proceso dinámico de eliminación de mitocondrias dañadas dependiente de EYFP-Parkin se puede utilizar como indicador de la salud celular en diferentes condiciones experimentales.

Lapso de tiempo-microscopía de vídeo para la Evaluación de EYFP-Parkin agregación como un marcador para celular mitofagia

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Aprende cómo la crocetina protege las células miocárdicas H9c2 del estrés oxidativo mediante la mitofagia activada por la vía PINK1/Parkin. Este método revela mecanismos cardioprotectores clave.

Protección de las células miocárdicas H9c2 del estrés oxidativo por crocetina a través de la mitofagia mediada por la vía PINK1 / Parkin (Video) | JoVE Journal

Protección de las células miocárdicas H9c2 del estrés oxidativo por crocetina a través de la mitofagia mediada por la vía PINK1 / Parkin

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