Name: Uso de dispersión múltiple de luz para examinar la estabilidad de Phyllanthus emblica L. Extractos obtenidos con diferentes métodos de extracción (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Aprende a evaluar la estabilidad de extractos de Phyllanthus emblica L. mediante dispersión múltiple de luz. Este método reduce el tiempo de análisis 200 veces y mejora el control de calidad en medicina tradicional.

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Este estudio fue apoyado por subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81973493); Equipo Nacional de Innovación Interdisciplinaria de Medicina Tradicional China (ZYYCXTD-D-202209); Sanajon Pharmaceutical Group Chengdu University of TCM production, study, and Research Joint Laboratory Project (2019-YF04-00086-JH); y el Proyecto Financiado por el Plan de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Sichuan (2021YFN0100). Los autores agradecen al Instituto Innovador de Medicina China y Farmacia de la Universidad de Chengdu de TCM por su apoyo técnico en el trabajo de espectrometría de masas.

1. Preparación del extracto
<ol><li>Pese con precisión una cantidad adecuada de PE y agregue 10 veces (peso) de agua desionizada para la extracción por reflujo.</li>
	<li>Coloque cinco muestras para la extracción por reflujo durante 0 h (E1), 0,5 h (E2), 1 h (E3), 1,5 h (E4) y 2 h (E5) después del pesaje.</li>
	<li>Después de la extracción, enfríe las muestras a temperatura ambiente y péselas para compensar el peso perdido para garantizar la consistencia con los pesos previos a la extracción.</li>
	<li>Centrifugar las muestras a 8.581 × g durante 10 min para asegurar la eliminación del material insoluble y los residuos herbales de la solución de muestra.</li>
	<li>Use una pipeta para agregar 20 ml de solución de muestra en el frasco de muestra para asegurarse de que la solución agregada cada vez esté a la misma altura. NOTA: Evite la contaminación, como huellas dactilares, en la parte de escaneo de la botella de muestra, asegúrese de que la botella de muestra esté limpia y verifique si hay arañazos visibles en la superficie de la botella. Al agregar la solución de muestra, tenga cuidado de no derramar o salpicar en la botella de muestra, y asegúrese de que el nivel de líquido esté a la misma altura en cada botella.</li>
</ol>2. Funcionamiento del instrumento
<ol><li>Encienda el instrumento de detección MLS y caliéntelo durante 30 minutos.</li>
	<li>Haga clic en el botón Crear archivo en el menú superior (o haga clic en Archivo | Nueva función de archivo) para crear un nuevo archivo de prueba.</li>
	<li>Haga clic en el botón Mostrar temperatura de laboratorio de turbisca en el menú superior para ajustar la temperatura objetivo del instrumento a 25 ° C. NOTA: La temperatura establecida del instrumento debe ser superior a la temperatura ambiente; de lo contrario, la temperatura de la muestra se verá afectada por la temperatura ambiente.</li>
	<li>Haga clic en Análisis del programa en el menú superior para ingresar al programa de análisis de configuración. Agregue el programa a la lista y, en la barra de tareas, agregue 5 minutos como ciclo, escanee durante 48 h a la secuencia de análisis y establezca el tiempo de equilibrio en 20 minutos. Seleccione este programa de análisis para todas las mediciones posteriores.</li>
	<li>Mueva la botella de muestra preparada al sistema de detección MLS. Después de configurar el programa, haga clic en Inicio para iniciar la medición. NOTA: Tenga cuidado de no agitar la botella de vidrio al cargar la muestra. La medición solo se puede iniciar después de que la temperatura de la muestra y la temperatura de ajuste estén equilibradas.</li>
</ol>3. Configuración del programa de análisis de dispersión de luz múltiple
<ol><li>Después de la recopilación de datos, haga clic en la lista de parámetros de cálculo para establecer los parámetros ópticos para calcular el índice de estabilidad (SI), el tamaño de partícula y la velocidad de migración de partículas. </li>
	<li>Establezca los parámetros ópticos de la siguiente manera: la intensidad de transmisión de luz de fase continua (T0) como 99.99% (agua), el índice de refracción de fase dispersa (np) como 1.36 y el índice de refracción de fase continua (nf) como 1.33.</li>
</ol>

<ol><li>Huang, H. -Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploration+on+the+approaches+of+diverse+sedimentations+in+polyphenol+solutions%3A+An+integrated+chain+of+evidence+based+on+the+physical+phase%2C+chemical+profile%2C+and+sediment+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Exploration on the approaches of diverse sedimentations in polyphenol solutions: An integrated chain of evidence based on the physical phase, chemical profile, and sediment elements.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 1060(2019).</li>
<li>Ran, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+or+low+temperature+extraction%2C+which+is+more+conducive+to+Triphala+against+chronic+pharyngitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+and+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">High or low temperature extraction, which is more conducive to Triphala against chronic pharyngitis.</a> Biomedicine and Pharmacotherapy. 140, 111787(2021).</li>
<li>Wei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatoprotective+effects+of+different+extracts+from+Triphala+against+CCl%284%29-induced+acute+liver+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Hepatoprotective effects of different extracts from Triphala against CCl(4)-induced acute liver injury in mice.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 664607(2021).</li>
<li>Huang, H. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+stability+control+strategy+of+Triphala+solution+based+on+the+balance+of+physical+stability+and+chemical+stabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Study on the stability control strategy of Triphala solution based on the balance of physical stability and chemical stabilities.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 158, 247-256 (2018).</li>
<li>Bhattacharya, A., Chatterjee, A., Ghosal, S., Bhattacharya, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+activity+of+active+tannoid+principles+of+Emblica+officinalis+%28amla%29%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Antioxidant activity of active tannoid principles of Emblica officinalis (amla).</a> Indian Journal of Experimental Biology. 37 (7), 676-680 (1999).</li>
<li>Chao, P. C., Hsu, C. C., Yin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+and+anti-coagulatory+activities+of+caffeic+acid+and+ellagic+acid+in+cardiac+tissue+of+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory and anti-coagulatory activities of caffeic acid and ellagic acid in cardiac tissue of diabetic mice.</a> Nutrition and Metabolism. 6, 33(2009).</li>
<li>Tiwari, V., Kuhad, A., Chopra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emblica+officinalis+corrects+functional%2C+biochemical+and+molecular+deficits+in+experimental+diabetic+neuropathy+by+targeting+the+oxido-nitrosative+stress+mediated+inflammatory+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Emblica officinalis corrects functional, biochemical and molecular deficits in experimental diabetic neuropathy by targeting the oxido-nitrosative stress mediated inflammatory cascade.</a> Phytotherapy Research. 25 (10), 1527-1536 (2011).</li>
<li>Baliga, M. S., Dsouza, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amla+%28Emblica+officinalis+Gaertn%29%2C+a+wonder+berry+in+the+treatment+and+prevention+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer+Prevention%22%5BJournal%5D)">Amla (Emblica officinalis Gaertn), a wonder berry in the treatment and prevention of cancer.</a> European Journal of Cancer Prevention. 20 (3), 225-239 (2011).</li>
<li>Rehman, H. -u, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+chemical+constituents+of+Phyllanthus+emblica%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Studies on the chemical constituents of Phyllanthus emblica.</a> Natural Product Research. 21 (9), 775-781 (2007).</li>
<li>Jang, Y., Koh, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+and+storage+stability+of+aronia+anthocyanins+encapsulated+with+combinations+of+maltodextrin+with+carboxymethyl+cellulose%2C+gum+Arabic%2C+and+xanthan+gum%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Characterisation and storage stability of aronia anthocyanins encapsulated with combinations of maltodextrin with carboxymethyl cellulose, gum Arabic, and xanthan gum.</a> Food Chemistry. 405, 135002(2022).</li>
<li>Fu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+phenylalanine-modified+magnetic+ferroferric+oxide+nanoparticles+for+ciprofloxacin+removal+from+aqueous+solution%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Colloid+and+Interface+Science%22%5BJournal%5D)">Novel phenylalanine-modified magnetic ferroferric oxide nanoparticles for ciprofloxacin removal from aqueous solution).</a> Journal of Colloid and Interface Science. 632, 345-356 (2023).</li>
<li>Jiang, T., Charcosset, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+of+curcumin+within+oil-in-water+emulsions+prepared+by+premix+membrane+emulsification%3A+Impact+of+droplet+size+and+carrier+oil+on+the+chemical+stability+of+curcumin%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Encapsulation of curcumin within oil-in-water emulsions prepared by premix membrane emulsification: Impact of droplet size and carrier oil on the chemical stability of curcumin.</a> Food Research International. 157, 111475(2022).</li>
</ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.

La evaluación rápida y precisa de la estabilidad de la MTC siempre ha sido un foco de la investigación de la MTC. Para proporcionar información más útil para dirigir la mejora del proceso de extracción, este estudio analizó los mecanismos de estabilidad e inestabilidad de una muestra utilizando una tecnología no destructiva de infrarrojo cercano.
En este protocolo, los parámetros de estabilidad importantes se calculan en función de los datos precisos del escaneo MLS. Los escaneos MLS pueden re...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65130">Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods</a>. The Authors section was updated from:
Haozhou Huang1 
Mengqi Li2 
Chuanhong Luo3 
Sanhu Fan4 
Taigang Mo4 
Li Han3 
Dingkun Zhang3 
Junzhi Lin5 
1Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Sichuan Nursing Vocational College 
3School of Pharmacy/School of Modern Chinese Medicine Industry, State Key Laboratory of Characteristic Chinese Medicine Resources in Southwest China 
4Sanajon Pharmaceutical Group 
5TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
to
Haozhou Huang1,2 
Mengqi Li3 
Chuanhong Luo4 
Sanhu Fan5 
Taigang Mo5 
Li Han4 
Dingkun Zhang4 
Junzhi Lin6 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Meishan Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3Sichuan Nursing Vocational College 
4State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Sanajon Pharmaceutical Group 
6TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65130">Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods

En la fabricación de la medicina tradicional china (MTC), la estabilidad de los intermedios de extracción de la MTC y las preparaciones líquidas relacionadas siempre ha sido el foco de la inspección1. La eficacia clínica de los medicamentos, especialmente con polifenoles como ingrediente activo primario, sufre debido a importantes problemas de estabilidad 2,3. El líquido oral Sanajon y el líquido oral Nuodikang son ejemplos de casos típicos de este problema4. Por lo tanto, es crucial aprender a utilizar herramientas eficientes para evaluar y optimizar de forma rápida y precisa la estabilidad de los intermedios líquidos en el proceso de producción de MTC. Se cree que Phyllanthus emblica L. (PE), una planta medicinal muy extendida en el sudeste asiático, tiene buenas propiedades antioxidantes5, así como acciones antiinflamatorias6, antibacterianas7 y antitumorales8. Durante el procedimiento de extracción térmica, los taninos en PE se transforman violentamente9. Bajo catálisis a altas temperaturas, estos taninos se hidrolizan rápidamente para producir moléculas como el ácido gálico y el ácido elágico, que conducen a inestabilidad o precipitación debido a su escasa solubilidad1. Los métodos actuales para evaluar la estabilidad de la MTC, como las pruebas aceleradas o la centrifugación, suelen ser engorrosos4, lo que limita el desarrollo posterior de los procesos de preparación pertinentes.
Basándonos en el principio de dispersión múltiple de luz (MLS), establecimos un método de evaluación de estabilidad rápida para extractos de PEF y analizamos el mecanismo de inestabilidad. MLS es un método de medición basado en el escaneo de fuentes de luz infrarroja cercana. Cualquier cambio en el sistema de solución resulta en un cambio en la intensidad de la luz. La luz incidente se dispersa cuando es absorbida o penetrada por las partículas de la muestra. El sistema registra la señal luminosa de transmisión cuando pasa a través de la muestra; Si la transmitancia de luz de la muestra es deficiente, el sistema registra la señal luminosa de retrodispersión. En comparación con la observación visual, esto puede ahorrar mucho tiempo1 y puede analizar de forma rápida y precisa el fenómeno de inestabilidad en detalle, proporcionando así información más útil para guiar la optimización del proceso de extracción.

<table><tbody><tr><td>Chaqueta calefactora eléctrica ajustable</td><td>Beijing Kewei Yongxing Instrument Co., Ltd</td><td>MH-1000&nbsp;</td><td>www.keweiyq.com</td></tr><tr><td>Balanza analítica(1/10000)</td><td>Sartorious, Alemania</td><td>BSA224S&nbsp;</td><td>www.sartorius.com.cn</td></tr><tr><td>Instrumento ultrasónico CNC</td><td>Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd</td><td>KQ-500DE</td><td>www.ks-csyq.com</td></tr><tr><td>centrífuga de alta velocidad GL-16</td><td>&nbsp; Sichuan Shuke Instrument Co., Ltd</td><td>18091403</td><td>www.sklxj.com</td></tr><tr><td>Phyllanthus emblica L.</td><td>Mercado de materiales medicinales de Hehuachi</td><td>&nbsp; YJL2004</td><td>Producido en Yunnan</td></tr><tr><td>Turbisoft Lab instrumento de dispersión de luz múltiple</td><td>Compañía francesa Formulaction</td><td>Turbisoft Lab 2.3.1.125 Fanalyser 1.3.5</td><td>www.formulaction.com</td></tr><tr><td>UPR-II-5T dispositivo de agua ultrapura</td><td>Sichuan ULUPURE&nbsp; Tecnología ultrapura Co., Ltd</td><td>Z16030559</td><td>www.ccdup.com</td></tr></tbody></table>

uso de dispersión múltiple de luz para examinar la estabilidad de phyllanthus emblica l. extractos obtenidos con diferentes métodos de extracción

Using Multiple Light Scattering to Examine the Stability of Phyllanthus emblica L. Extracts Obtained with Different Extraction Methods

El intermedio de extracción de la medicina tradicional china es el intermediario clave en el proceso de preparación, y su estabilidad tiene un impacto importante en la eficacia y calidad del producto final. Sin embargo, los métodos de evaluación de estabilidad existentes a menudo requieren mucho tiempo y mano de obra, lo que requiere observación a largo plazo y la operación de equipos complejos (como la cromatografía líquida de alto rendimiento), y es difícil obtener más información física sobre la inestabilidad del sistema. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de establecer una tecnología de análisis de estabilidad rápida y precisa para la medicina tradicional china. La dispersión múltiple de luz es un método analítico de vanguardia que puede evaluar con precisión y rapidez la estabilidad de las medicinas tradicionales chinas de una manera respetuosa con el medio ambiente sin cambiar la naturaleza o el estado de la muestra o usar reactivos orgánicos.
En este trabajo, utilizando los datos de escaneo precisos de la dispersión de luz múltiple, el protocolo actual adquirió rápidamente las curvas de variación para el grosor de la capa, la velocidad de migración de partículas y el tamaño promedio de las partículas a lo largo del tiempo. Esto permitió la identificación precisa del mecanismo y las características cruciales que causan la inestabilidad del sistema en sus primeras etapas. Cabe destacar que el período de investigación para el proceso de extracción puede acortarse considerablemente mediante la cuantificación detallada de la estabilidad del sistema, que también permite un análisis rápido, preciso y profundo de los efectos de varios procesos de extracción en la estabilidad de Phyllanthus emblica L.

La Figura 1 muestra el principio de medición de luz múltiple y el significado de los resultados recopilados. En los resultados de los espectros MLS (Figura 2), la abscisa fue la altura de la celda de muestra, y la ordenada fue la intensidad de transmisión (T%) y retrodispersión (BS%). Al calcular los resultados de los espectros MLS, el sistema puede obtener los cambios en los parámetros físicos clave de la muestra durante el período de medición...

Aquí, presentamos un método de evaluación de estabilidad basado en tecnología de dispersión de luz múltiple para evaluar la estabilidad de los extractos de medicina tradicional china.

Uso de dispersión múltiple de luz para examinar la estabilidad de Phyllanthus emblica L. Extractos obtenidos con diferentes métodos de extracción

The extraction intermediate of traditional Chinese medicine is the key intermediate in the preparation process, and its stability has an important impact ...

Los métodos de evaluación de la estabilidad a menudo requieren mucho tiempo y mano de obra. Esta técnica puede ahorrar aproximadamente 200 veces más tiempo y recopilar muchos parámetros de estabilidad para Phyllanthus emblica L.extracts. Esta técnica puede analizar de forma rápida y precisa el fenómeno de inestabilidad en detalle, proporcionando así información más útil para guiar el optimismo del proceso de extracción.Para comenzar, pese con precisión una cantidad adecuada de Phyllanthus emblica L. y agregue agua desionizada 10 veces el peso de la planta para la extracción por reflujo. Después del pesaje, coloque cinco muestras para la extracción por reflujo, E1 a las 0 horas, E2 a las 0,5 horas, E3 a 1 hora, E4 a 1,5 horas y E5 a las 2 horas. Use una pipeta para agregar 20 mililitros de solución de muestra al frasco de muestra para asegurarse de que la solución agregada cada vez esté a la misma altura.Encienda el instrumento de detección de dispersión de luz múltiple, o MLS, y caliéntelo durante 30 minutos. Haga clic en el botón Crear archivo en el menú superior para crear un nuevo archivo de prueba, y luego haga clic en el botón Mostrar temperatura de laboratorio de Turbiscan para establecer la temperatura objetivo del instrumento en 25 grados centígrados. Haga clic en Análisis del programa para ingresar al programa de análisis de configuración y agregue el programa a la lista.Ajuste el tiempo de equilibrio a 20 minutos. En la barra de tareas, agregue Analizar durante 48 horas a la secuencia de análisis y 5 minutos como ciclo. Seleccione este programa de análisis para todas las mediciones posteriores.Coloque la botella de muestra preparada en el sistema de detección MLS y haga clic en Inicio para iniciar la medición. Después de la recopilación de datos, haga clic en la lista de parámetros de cálculo. Establezca el índice de refracción de fase dispersa en 1,36 y el índice de refracción de fase continua en 1,33 para calcular el índice de estabilidad, el tamaño de partícula y la velocidad de migración de partículas, y establezca la fracción de volumen en 1, y la intensidad de transmisión de luz de fase continua en 99,99% Los espectros MLS de muestras E1 a E5 se muestran en esta figura.Los datos espectrales sugieren que la muestra E2 fluctuó menos, lo que indica una mayor estabilidad de la muestra, mientras que E1 puede haber tenido turbidez debido a la disminución general de la luz de transmisión. Las muestras E3 a E5 eran bastante inestables, y los datos espectrales de las muestras a diferentes alturas eran diferentes, lo que indica que la estratificación ocurrió en el período posterior. El valor T aumenta con el tiempo, haciendo que la muestra sea más inestable.Para E3 y E4, el nivel delta-T volvió al de la etapa anterior al final, lo que indica que la agregación y la precipitación ocurrieron en estos extractos. El delta-T de E5 se mantuvo bajo después de la turbidez, lo que indica que E5 puede haber tenido una gran cantidad de sedimentación. La tendencia en el camino libre de fotones puede reflejar los cambios en la luz transmitida de la muestra.La estabilidad de varios extractos fluctuó continuamente con el tiempo. Los cambios dinámicos en el tamaño de partícula revelaron que los tamaños de partícula de todas las muestras cambiaron considerablemente dentro de 8 a 20 horas, con el tamaño de partícula de E3 y E5 incluso excediendo el rango de medición. Aquí se muestra la inestabilidad de los extractos de Phyllanthus emblica L. obtenidos por diferentes métodos de extracción.La banda de cromaticidad en la parte superior de cada resultado representa los valores de intensidad de luz correspondientes a diferentes colores, donde la parte azul representa la transmisión y la parte marrón representa la intensidad de retrodispersión. Seleccionar un programa de análisis adecuado para las mediciones y elegir la lista de parámetros para calcular el índice de estabilidad, el tamaño de partícula y la velocidad de migración de partículas son cruciales para esta partícula, ya que estos dos pasos afectarán directamente la vigencia de los resultados. También se puede obtener información significativa, como el grosor de la capa, y se pueden analizar las reglas de formación de emulsificación o precipitación.Esta técnica facilitará el desarrollo de un modelo de predicción de estabilidad basado en datos extensos de inestabilidad de medicamentos. Además, esta técnica podría combinarse y mejorarse con otros métodos de detección, ampliando aún más las posibilidades de investigación.

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