Un protocolo eficiente para el análisis CUT&RUN de células satélite de ratón aisladas de FACS
July 7th, 2023
Se presenta aquí un protocolo eficiente para el aislamiento de células satélite de músculo de extremidades de ratón con aislamiento de células satélite de células satélite de células satélite de músculo de extremidades de ratón adaptado al estudio de la regulación de la transcripción en fibras musculares por escisión bajo dianas y liberación mediante nucleasa (CUT&RUN).
Desde hace más de 20 años, nuestro laboratorio está interesado en el papel fisiopatológico de los receptores nucleares. Para descifrar su función in vivo, diseñamos un modelo de ratón que permite el control espacial y temporal de su expresión. Paralelamente, desarrollamos técnicas de vanguardia para investigar su función molecular en los tejidos de ratón.
Nuestro interés científico nos ha llevado recientemente a determinar la señalización de los secosteroides y de los receptores de esteroides en varios tejidos, incluido el músculo esquelético. Recientemente hemos demostrado que el receptor de andrógenos en las miofibras que diferencian las células del músculo esquelético es fundamental en sus funciones contráctiles y metabólicas. Nuestros hallazgos recientes brindan una comprensión más profunda de la dinámica fisiopatológica del músculo esquelético que es crucial para desarrollar tratamientos efectivos para los trastornos asociados a los músculos.
Desarrollamos este protocolo para poder realizar análisis de cistroma en células madre musculares in vivo. Todos los protocolos anteriores utilizaron modales in vitro, lo que disocia completamente la investigación del contexto de un organismo completo. Además de ser de bajo costo y eficiente en el tiempo, este protocolo proporciona un entorno experimental eficaz para estudiar el reclutamiento de factores de transcripción y el panorama de la cromatina en las células progenitoras del músculo esquelético.
La cromatina preparada por este protocolo ha proporcionado el primer análisis de todo el genoma del cistromo AR en células satélite, y facilitará futuros estudios sobre la regulación génica. Entre muchos, nuestro objetivo futuro sería extender estas investigaciones a otros receptores oxoesteroides y explorar sus correguladores específicos en los diversos tipos celulares involucrados en el proceso de regeneración en el músculo esquelético.
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Visión general
Este artículo presenta un protocolo para el aislamiento de células satélite del músculo de las extremidades del ratón mediante clasificación celular activada por fluorescencia (FACS). Este método se adapta para estudiar la regulación de la transcripción en fibras musculares utilizando la técnica CUT&RUN.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología celular
- Biología molecular
Antecedentes
- El laboratorio se ha centrado en el papel de los receptores nucleares durante más de 20 años.
- Se han desarrollado modelos de ratón para el control espacial y temporal de la expresión del receptor.
- Se han desarrollado técnicas para investigar las funciones moleculares en tejidos de ratón.
- Estudios recientes han explorado la señalización de los receptores esteroideos en el músculo esquelético.
Propósito del estudio
- Entender el papel del receptor de andrógenos en el músculo esquelético.
- Investigar las funciones contráctiles y metabólicas de las miofibras.
- Desarrollar tratamientos efectivos para trastornos asociados al músculo.
Métodos utilizados
- Clasificación celular activada por fluorescencia (FACS)
- Cortes bajo objetivos y liberación mediante nucleasa (CUT&RUN)
- Ingeniería de modelos de ratón
- Análisis de vías de señalización del receptor
Principales resultados
- El receptor de andrógenos es crucial para la función de la miofibra.
- Los hallazgos mejoran la comprensión de la dinámica del músculo esquelético.
- La investigación contribuye a posibles tratamientos para trastornos musculares.
Conclusiones
- El estudio proporciona información sobre la regulación de la transcripción en células musculares.
- Destaca la importancia de los receptores nucleares en la fisiología muscular.
- La investigación futura puede conducir a nuevas estrategias terapéuticas.
