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DOI: 10.3791/65530-v
Ines Cherkaoui1, Qian Du2, Dieter Egli2, Shivani Misra1,3, Guy A. Rutter1,4,5
1Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Faculty of Medicine,Cell Biology and Functional Genomics, 2Departments of Pediatrics, Naomi Berrie Diabetes Center, Obstetrics and Gynecology, Columbia Stem Cell Initiative, Columbia University Irving Medical Center,Columbia University, 3Department of Diabetes,Imperial College Healthcare NHS Trust, 4Faculté de Médicine,Université de Montréal, 5Lee Kong Chian Imperial Medical School,Nanyang Technological University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este artículo presenta un protocolo para la diferenciación dirigida y el análisis funcional de células similares a β células. Describimos las condiciones óptimas de cultivo y los pasajes para las células madre pluripotentes humanas antes de generar células pancreáticas productoras de insulina. La diferenciación de seis etapas progresa desde la formación definitiva del endodermo hasta las células funcionales similares a las células β que secretan insulina en respuesta a la glucosa.
Lograr una eficiencia alta y consistente en el proceso de diferenciación para convertir células madre pluripotentes en células beta humanas es un desafío notable. Este desafío está influenciado por la precisión y la consistencia con la que el experimentador sigue el protocolo. Además, la cantidad de células beta obtenidas en cada experimento es bastante variable, lo que puede resultar en la reducción de la función de las células beta en múltiples experimentos.
En el contexto de la investigación de células beta con alto contenido de leptina en la diabetes, la disponibilidad de donantes de ojales cadavéricos es bastante limitada. En consecuencia, el uso de células beta diferenciadas con células madre está ofreciendo un suministro ilimitado y abundante de células secretoras de insulina. La diferenciación de células beta es un avance fundamental en nuestro campo, que ofrece numerosos beneficios.
Nos permite explorar el desarrollo y la función de las células beta, lo que lleva a una comprensión más profunda de las causas de la diabetes y la disfunción de las células beta. Nuestro objetivo es utilizar esta técnica para nuestra investigación centrada en la genética de la diabetes. Nuestro objetivo principal es centrarnos en la mutación de ciertos genes que pueden influir en las células beta y en la función de los ojales.
Por lo tanto, este protocolo facilitará el acceso a los ojales humanos derivados de células madre prepotentes con mutaciones de interés.
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