Name: La combinación de fracción vascular estromal aislada mecánicamente e hidrogel de fibrina: un protocolo de procesamiento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Aprende a combinar fracción vascular estromal aislada mecánicamente con hidrogel de fibrina para mejorar la cicatrización de heridas crónicas. Este método ofrece una solución autóloga eficiente en ingeniería tisular.

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<meta charset="utf8"></head><body>Fracción vascular estromal mecánica en hidrogel de fibrina para medicina regenerativa

<table><tbody><tr><td>Placa de 12 pocillos</td><td>Sarstedt</td><td>83.3921</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Biochemica</td><td>A1001.0010</td><td></td></tr><tr><td>50 mL-Falcon</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Toallas Absorbentes, Paquete de Dos</td><td>Driza</td><td>89701</td><td></td></tr><tr><td>Alamar azul 25 mL</td><td>Invitrogen</td><td>DAL1025</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina, Bovino (BSA)</td><td>VWR</td><td>0332-500G</td><td></td></tr><tr><td>Biotek Cytation 5&nbsp;</td><td>Lector de microplacas multimodo de imágenes celulares de</td> <td>Agilent</td><td></td>&nbsp;</tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670-500G</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo</td><td></td><td></td><td>criostato</td></tr><tr><td>DMEM con 4,5 g/L de glucosa, con L-Glutamina, con piruvato de sodio</td><td>VWR</td><td>392-0416</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Epinefrina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4250</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino</td><td>Biowest</td><td>S181H-500</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinógeno Plasma Humano 100 mg</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>341576-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>Formalina 4%</td><td>Formafix</td><td>1308069</td><td></td></tr><tr><td>FSC 22-Einbettmedium, blau</td><td>Biosystems</td><td>3801481S</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina & Solución de eosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3136 / HT110132</td><td></td></tr><tr><td>Timbre lactato s Solución 1000 mL</td><td>B Braun</td><td>R5410-01</td><td></td></tr><tr><td>Cánula Mercedes 4mm</td><td>MicroAire</td><td>PAL-R404LL</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Bbraun</td><td>570160</td><td></td></tr><tr><td>OCT Matriz de Inclusión 125 mL</td><td>CellPath</td><td>KMA-0100-00A</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Fisher Scientific 10342243</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS 1%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4474</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Petridish 150mm</td><td>Sarstedt</td><td>83.1803</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin-iFluor 488 Reactivo</td><td>Abcam</td><td>ab176753</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa Estéril 20 mL Luer</td><td>HENKE-JECT</td><td>5200-000V0</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa Estéril 30 mL Luer-Lock</td><td>BD</td><td>10521</td><td></td></tr><tr><td>Trombina de Plasma Humano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6884-100UN</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tranexámico</td><td>Orpha Swiss</td><td>6837093</td><td></td></tr><tr><td>Tulipfilter 1.2</td><td>Lencion Surgical</td><td>ATLLLL</td><td></td></tr><tr><td>Tulipfilter 1.4</td><td>Lencion Surgical</td><td>ATLLLL</td><td></td></tr></tbody></table>

la combinación de fracción vascular estromal aislada mecánicamente e hidrogel de fibrina: un protocolo de procesamiento

The Combination of Mechanically Isolated Stromal Vascular Fraction and Fibrin Hydrogel: A Processing Protocol

Ensayo de resazurina En primer lugar, examinamos la viabilidad celular in vitro de las células mSVF. Para ello, realizamos un ensayo de viabilidad de células de resazurina en los días 0, 3 y 7. La viabilidad celular a los días 0, 3 y 7 de un total de cuatro muestras se muestra en la Figura 1. Los valores del día 0 sirven como referencia y se establecieron como 100%. Al día 3, el control positivo (mSVF) mostró una ligera disminución hasta el 78,92% (± 5,33%), mien...

La combinación de fracción vascular estromal aislada mecánicamente e hidrogel de fibrina: un protocolo de procesamiento

The regenerative potential of adipose-derived stromal cells (ASCs) has gained significant attention in regenerative and translational research. In the ...

the-combination-mechanically-isolated-stromal-vascular-fraction

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Investigación

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Medicine

Medicina

Se describe el aislamiento de los cardiomiocitos neonatales y la preparación de las células para la encapsulación en las construcciones de hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos. Se describen los métodos para el análisis de la ingeniería tisular miocardio después del período de la cultura como fuerza activa generada a la estimulación eléctrica y la viabilidad celular y tinción inmunohistoquímica.

La encapsulación de los cardiomiocitos en un hidrogel de fibrina para ingeniería de tejidos cardíacos

Estos detalles del trabajo de la preparación de la fibrina andamios 3D para el cultivo y diferenciación de las células madre plutipotent. Tales andamios puede ser utilizado para cribar los efectos de diversos compuestos biológicos sobre el comportamiento de células madre, así como modificado para contener los sistemas de suministro de fármacos.

Preparación de fibrina Andamios 3D para Aplicaciones madre para cultivo celular

Este protocolo se centra en la utilización de la capacidad inherente de las células madre para tomar el ejemplo de su matriz extracelular circundante y ser inducidas a diferenciarse en múltiples fenotipos. Este manuscrito métodos extiende nuestra descripción y caracterización de un modelo utilizando un hidrogel bicapa, compuesto de PEG-fibrina y colágeno, a la vez co-diferenciar derivadas de tejido adiposo células...

Ingeniería de un hidrogel de dos capas para el control de la diferenciación ASC

La microscopia del lapso de tiempo y las técnicas de proceso de imagen fueron utilizadas para observar y para analizar la compactación fibroblasto-mediada del gel y el realineamiento de la fibra de la fibrina en un biorreactor ambientalmente controlado durante un período de 48 horas.

Observación Y Cuantificación De Fibroblastos Mediada Por Fibrina Gel Compactamiento

Este sistema modelo se inicia a partir de un gel de fibrina-miofibroblastos poblado que se puede utilizar para estudiar colágeno endógeno (re) organización en tiempo real de una manera no destructiva. El modelo de sistema es muy sintonizable, ya que se puede utilizar con diferentes fuentes de células, aditivos de medio, y se puede adaptar fácilmente a las necesidades específicas.

Ingeniería fibrina basado en construcciones de tejido de miofibroblastos y de aplicación de las restricciones y la tensión para inducir la organización de células y colágeno (Re)

Para la creación de estructuras altamente organizadas de tejido complejo, se deben ensamblar múltiples tipos de materiales y células en un compuesto integrado.  Este diseño combinatorio incorpora láminas de células estratificadas específicas de órganos con dos materiales distintos derivados de la biología que contienen una fuerte base de matriz fibrosa y células endoteliales para mejorar la formación de nuevos vasos.

Ingeniería de tejidos: Construcción de un multicelular 3D Andamios para la entrega de láminas de células en capas

El protocolo describe cómo diseñar una red vascular perfusable en un esferoide. Microambiente circundante del esferoide es ideado para inducir angiogénesis y conectarse el esferoide de los microcanales en un dispositivo de microfluidos. El método permite la perfusión de la esferoide, que es una técnica largamente esperada en cultivos tridimensionales.

Perfusable Red Vascular con un modelo de tejido en un dispositivo de microfluidos

El método presentado implica el estiramiento uniaxial de hidrogeles blandos 3D incrustados en caucho de silicona mientras permite la microscopía confocal viva. Se demuestra la caracterización de las cepas de hidrogel externas e internas, así como la alineación de la fibra. El dispositivo y el protocolo desarrollados pueden evaluar la respuesta de las células a diversos regímenes de deformación.

Cepa controlada de hidrogeles 3D bajo imágenes de microscopía en vivo

Aquí, presentamos un protocolo para generar un modelo tridimensional de piel simplificado e indiferenciado utilizando una plataforma microfluídica micromecanizado. Un enfoque de flujo paralelo permite la deposición in situ de un compartimento dérmico para la siembra de células epiteliales en la parte superior, todo controlado por bombas de jeringa.

Generación de un modelo tridimensional simplificado de piel en un chip en una plataforma microfluídica micromecanizado

Se presenta un protocolo reproducible para la preparación, enriquecimiento y aplicación de un hidrogel in situ de luz azul cruzada–gelatina–riboflavina reticular para la reparación de heridas estromales corneales en conejos, incluyendo pasos procedimentales para el manejo quirúrgico, tarsorrafia parcial y cuidados postoperatorios.

Fabricación y aplicación quirúrgica de hidrogeles enriquecidos foto-reticulados gelatina–riboflavina para la reparación de heridas corneales en conejos

Aprende a combinar fracción vascular estromal aislada mecánicamente con hidrogel de fibrina para mejorar la cicatrización de heridas crónicas. Este método ofrece una solución autóloga eficiente en ingeniería tisular.

La combinación de fracción vascular estromal aislada mecánicamente e hidrogel de fibrina: un protocolo de procesamiento

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